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let-7i在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义
目的：探讨子宫内膜癌组织中let-7i的表达及临床意义。方法：收集2011年4月—2014年12月河北医科大学第一医院40例子宫内膜癌、20例子宫内膜不典型增生及30例正常子宫内膜组织，采用多聚腺苷酸加尾实时荧光定量逆转录聚合酶链反应[poly（A）-RT-qPCR]检测let-7i在不同子宫内膜组织中的表达，并将检测结果和临床及病理资料进行统计学分析。结果：let-7i在子宫内膜癌组织中的表达低于不典型增生和正常子宫内膜组织，3组间差异有统计学意义（P＜0.01）；不同年龄、病理类型、国际妇产科联盟（FIGO）病理分期、病理分级的子宫内膜癌患者let-7i的表达量差异无统计学意义（P＞0.05），在是否合并高血压、糖尿病，是否淋巴结转移及雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）是否阳性的子宫内膜癌患者中let-7i的表达量差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：let-7i在子宫内膜癌组织中低表达，可能调控了子宫内膜癌的发生。
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Let-7i抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭
目的:探讨let-7i对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂(cisplatin,DDP)耐药性的影响及可能的作用机制.方法:应用实时荧光定量PCR检测人永生化卵巢细胞IOSE、卵巢癌SKOV3细胞和卵巢癌DDP耐药细胞SKOV3/DDP中let-7i的表达.将let-7i过表达质粒(let-7i)、抑制let-7i表达质粒(anti-let-7i)和阴性对照(negative control,NC)质粒(lct-7i-NC)分别转染SKOV3细胞后,应用EdU(5-ethynyl-2'-deoxyuridine)实验、划痕愈合实验和Transwell侵袭实验分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力.用不同浓度的DDP处理转染了let-7i质粒的SKOV3/DDP细胞后,MTT法检查SKOV3/DDP细胞对DDP敏感性的变化.应用TargetScan、miRanda利PicTar靶基因预测软件以及DAVID(Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery)数据库对let-7i进行生物信息学分析,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测let-7i和anti-let-7i转染组SKOV3细胞中let-7i潜在靶基因Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4) mRNA和蛋白的表达水平.结果:SKOV3细胞中let-7i的表达水平低于IOSE细胞(P＜0.01),而SKOV3/DDP细胞中let-7i的表达水平低于SKOV3细胞(P＜0.01).Let-7i转染组SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降(P＜0.05、P＜0.01和P＜ 0.05),而anti-let-7i转染组SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力的改变不显著(P值均＞ 0.05).转染let-7i质粒后,SKOV3/DDP细胞对DDP的敏感性增强(P＜0.05).生物信息学分析表明,let-7i的靶基因主要富集于丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路、转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)信号通路和黏着斑通路等.Let-7i转染组SKOV3细胞中TLR4 mRNA和蛋白的表达水平下调(P值均＜0.05).结论:卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞中let-7i低表达.Let-7i过表达可抑制SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,增强SKOV3/DDP细胞对DDP的敏感性.TLR4可能是let-7i的靶基因之一.
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let-7 i影响口腔鳞癌增殖和迁移作用的研究
目的：：探讨微小RNA let-7i对口腔鳞癌细胞的增殖、凋亡、侵袭及迁移调控的作用。方法：荧光定量PCR( qRT-PCR)检测口腔鳞癌组织与癌旁正常组织之间let-7i的表达差异,并在口腔鳞癌细胞系和正常口腔上皮细胞系中进行表达水平验证。应用let-7i抑制物和模拟物转染口腔鳞癌细胞系(SCC25)细胞,qRT-PCR检测let-7i的抑制或者增强效率；应用细胞增殖实验、单细胞克隆形成实验、细胞凋亡实验、Transwell细胞迁移和侵袭实验等技术,分别检测let-7i表达水平变化对口腔鳞癌细胞生长、迁移和侵袭等生物学行为的影响。结果：与癌旁正常组织相比,口腔鳞癌组织中let-7i的表达显著上调,为癌旁正常组织表达量的1.97倍；let-7i抑制物和模拟物,能分别显著降低或增强SCC25中let-7i的表达；降低let-7i表达后,SCC25细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力明显降低；而细胞凋亡率明显升高；相反let-7i表达升高后,SCC25细胞增殖能力、Transwell迁移和侵袭能力明显升高,而凋亡率明显降低。结论：let-7i能够促进口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,而其抑制物能发挥有效的抗增殖作用,为口腔鳞癌的靶向治疗提供了候选分子。
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let-7i通过调节LIN28影响胶质瘤U251干细胞成熟分化
目的 探讨微小RNA(miRNA)let-7i对胶质瘤U251干细胞成熟分化的影响及其调控机制. 方法 (1)体外培养胶质瘤U251细胞,磁珠分选出CD133阳性细胞,通过合成let-7imimics(let-7i mimics组)及let-7i control (let-7i control组)转染U251干细胞,实时荧光定量PCR验证转染后let-7i表达水平,Western blotting检测U251干细胞转染前后CD133、巢蛋白(nestin)和LIN28表达水平,利用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色U251干细胞评价其成熟分化水平.(2)LIN28 siRNA(LIN28 siRNA组)及siRNA control(siRNA control组)转染U251干细胞后,Westernblotting检测转染前后CD133和nestin表达水平.(3)利用Targetscan软件分析及荧光素酶报告系统验证LIN28是let-7i靶基因的可能性. 结果 (1)转染let-7i mimics的U251干细胞中let-7i显著过表达,为let-7i control组的17.9倍;CD133、nestin和LIN28表达水平分别是let-7i control组13.9％、43.7％和53.6％;GFAP阳性标记指数为(83.0±1.93)％,显著高于let-7i control组[(39.7±6.73)％],差异有统计学意义(P＜0.05).(2)LIN28 siRNA转染U251干细胞后CD133和nestin表达水平分别下调为siRNA control组的23.7％和37.9％.(3)Targetscan软件分析表明LIN28 3'UTR存在let-7i的配对结合位点,荧光素酶报告系统证明LIN28是let-7i的靶基因. 结论 过表达let-7i可显著下调CD133及nestin的表达水平,促进胶质瘤干细胞的成熟分化,其机制可能是通过下调LIN28表达.
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Let-7 i在子痫前期孕妇胎盘中的表达
目的 :研究Let-7i基因表达与子痫前期孕妇患者疾病发作的关系.方法 :在2016年07月-2018年03月,随机选取30名剖宫产的子痫前期孕妇患者病例的胎盘作为研究组、30例正常妊娠孕妇的胎盘作为对照组.采用荧光PCR技术实时、定量检测两组胎盘中Let-7i基因的表达结果.结果 :在研究组胎盘中,Let-7i基因表达量较低于对照组中相应结果,约为对照组平均表达水平的1/3,两组胎盘中Let-7i基因表达情况具有统计学差异(P<0.05).结论 :以Let-7i为代表的特异微小RNA(miRNA)在子痫前期孕妇胎盘组织和正常妊娠孕妇胎盘组织中差异性表达明显,miRNA表达可能影响子痫前期疾病发作情况.
