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BTG2作为一种新的电离辐射诱导基因的研究
目的 研究γ射线照射对肿瘤细胞的B细胞易位基因2(BTG2)表达水平的影响.方法 应用RT-PCR方法研究电离辐射对肿瘤细胞BTG2 mRNA水平的影响;应用Western blot方法测定电离辐射对肿瘤细胞BTG2蛋白表达水平的影响.结果 与未照射对照细胞相比,3 Gyγ射线单次剂量照射明显提高了人乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和人宫颈癌细胞系C33A、HeLa中的BTG2蛋白的表达水平.γ射线照射人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231导致了照射剂量和时间依赖性的BTG2表达水平的升高,而且这种改变既表现在BTG2 mRNA水平上,也反映在BTG2蛋白水平上.结论 BTG2是一种新的辐射诱导DNA损伤的反应基因,进一步研究将为BTG2作为肿瘤放射治疗的疗效和预后评价指标提供实验基础和依据.
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B细胞易位基因2的表达水平对肿瘤细胞放射敏感性的影响
目的 研究B细胞易位基因2(BTG2)表达水平的改变对肿瘤细胞放射敏感性的影响.方法 通过pcDNA3-BTG2脂质体转染的方法提高细胞的BTG2的表达水平,利用噻唑蓝和细胞克隆形成实验研究细胞放射敏感性的改变,应用Wester blot方法研究蛋白表达水平的变化.结果 噻唑蓝和细胞克隆形成实验结果显示,在不同剂量的γ射线照射后,提高BTG2的表达水平可明显提高乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞的放射敏感性.免疫共沉淀-Wester blot实验结果显示BTG2蛋白与DNA损伤修复和抗氧化蛋白乳腺癌易感基因1(BRCA1)相互作用,形成复合物.高表达的BRCA1明显地抑制了BTG2高表达对乳腺癌细胞放射敏感性的调节作用,而降低BRCA1的表达水平则提高了BTG2对乳腺癌细胞放射敏感性的调节作用.另外,肺癌细胞放射敏感性与其所含的BRCA1的表达水平成反比,而与BTG2的表达水平成正比.结论 BTG2的高表达明显提高了肿瘤细胞的放射敏感性,其机制可能与其同BRCA1形成复合物有关.
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B细胞易位基因2过表达增加人乳腺癌细胞T-47D的放射敏感性的研究
目的 研究B细胞易位基因2(BTG2)对人乳腺癌细胞T-47D放射敏感性的影响.方法 应用脂质体转染的方法提高BTG2基因在人乳腺癌细胞T-47D的表达水平,利用克隆形成实验研究转染后细胞的放射敏感性改变,采用流式细胞术对细胞周期变化进行分析,应用 Western blot 方法研究相关蛋白的变化.结果 克隆形成细胞生存实验结果表明,BTG2 稳定高表达的 T-47D/BTG2 细胞在不同剂量X射线照射后,其存活分数明显低于X射线照射后的未转染的T-47D/ Parental(母)细胞以及"空质粒"转染的对照T-47D/Neo细胞的存活分数.细胞平均致死剂量(Do)值在T-47D/Parental 细胞、T-47D/Neo细胞和T-47D/BTG2细胞分别为1.84,1.86和1.57.流式细胞实验结果显示,与T-47D/母细胞和T-47D/Neo细胞相比,T-47D/BTG2细胞在受照射后出现明显的细胞凋亡sub-G1峰.另外,BTG2高表达上调了Bad和Bax促凋亡蛋白的表达水平和下调了协作性的致癌基因Cyclin D1的表达水平.结论 增加BTG2 基因的表达水平可以明显提高凋亡相关蛋白水平,增加放射治疗所诱导的细胞凋亡,从而提高人类乳腺癌细胞T-47D 对电离辐射放射治疗的敏感性.BTG2可能是调节人类乳腺癌细胞放射治疗的有效靶点之一.
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微RNA 18与B细胞易位基因2在肝癌细胞中差异表达相关性的研究
目的 研究微RNA 18(miR-18)对肝癌细胞HepG2基因表达谱的影响,预测其靶基因,初步探讨miR-18与抗增殖基因B细胞易位基因2(BTG2)两者在肝癌发生过程中差异表达的相关性.方法 利用基因表达谱芯片技术筛选HepG2的微RNA差异表达谱,应用生物信息学方法预测表达明显上调的miR-18的靶基因,初步筛选出直接调控的靶基因为抗增殖基因BTG2;应用RT-PCR和Northern blot法分析BTG2正常与肝癌组织中的表达情况.结果 生物信息学分析结果显示miR-18分子调控的下游靶基因有609个,涉及细胞增殖、分化和凋亡,转录调节等众多生理和病理过程;抗增殖基因BTG2在肝癌组织和细胞中呈明显低表达.结论 miR-18在肝癌细胞中表达明显上调,并可能负性调控抗增殖基因BTG2在肝癌细胞中的表达,两者共同在肝癌细胞增殖方面发挥着重要作用.
