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LRP4抗体阳性的重症肌无力研究进展
自身免疫性疾病是继癌症和心血管疾病后的第三类为常见的疾病，其在人群中的发生率约为5％，自身免疫性疾病目前仍呈上升趋势，已逐渐成为影响人类健康的主要疾病之一。作为一种经典的神经系统自身免疫疾病，重症肌无力（myasthenia gravis, MG）是一类异质性的神经肌肉接头（neuromuscular junction, NMJ）突触后膜信号传递障碍的配体门控离子通道病[1]。MG人群发病率为32~64/10万，我国目前MG患者约有60万。该病多青壮年发病，临床表现为眼外肌和/或全身骨骼肌无力，症状起伏迁延。在MG的致病机制方面，已被证实的致病性抗体有两种：抗乙酰胆碱受体（acetylcholine receptor, AChR）抗体和抗肌肉特异性酪氨酸激酶（muscle-specific tyrosine kinase, MuSK）抗体。约有80%的MG患者为AChR抗体阳性的MG （AChR-MG），仅有不足10%的MG患者属于MuSK抗体阳性的MG（MuSK－MG）[2]。这两种抗体介导的MG亚型已被证实存在不同的致病机制、地域分布和临床特点[3-12]。然而，仍有小部分MG患者血清AChR抗体和MuSK抗体均呈阴性，这部分MG被称之为血清双阴性重症肌无力[13]。在这部分血清双阴性重症肌无力患者中，抗低密度脂蛋白受体相关蛋白4（low-density lipoprotein receptor-related protein 4, LRP4）抗体新近被发现，并被证实具有致病性。本文就LRP4抗体阳性的MG（LRP4－MG）的致病机制、流行病学、临床特点以及对药物的反应展开综述。
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LRP4在胆固醇介导的神经细胞生长中的重要作用
目的:探讨LRP4通过参与胆固醇向细胞内转运及其在神经细胞生长中的作用.方法:神经细胞生存实验分析LRP4神经元细胞生长中作用.免疫沉降实验及免疫荧光染色分析LRP4与apoE的结合.结果:与添加胆固醇拮抗剂相似,在培养神经细胞时添加抗LRP4抗体,神经细胞的生长被抑制.免疫沉降实验证明了LRP4能够结合在胆固醇转运过程中发挥重要作用的apoE.免疫荧光染色进一步证实了LRP4与apoE在细胞内的共存.结论:LRP4通过与apoE的结合在胆固醇介导的神经细胞生长中发挥重要的作用.
关键词： 低密度脂蛋白受体相关蛋白4 载脂蛋白E 胆固醇 -
实验性自身免疫性重症肌无力模型大鼠腓肠肌低密度脂蛋白受体相关蛋白4表达的特点
目的 探讨实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型大鼠腓肠肌低密度脂蛋白受体相关蛋白4(LRP4)表达的特点.方法 将30只大鼠随机分为EAMG组、对照组和空白组.以小鼠乙酰胆碱受体(AChR)基因为模板合成AChR抗原,以Lewis大鼠为免疫动物.EAMG组采取主动免疫法将AChR抗原与弗氏佐剂混合制成乳剂,注射入大鼠背部皮下.对照组在相同部位注射等量的弗氏佐剂.空白组在相同部位注射等量的生理盐水.8周后使用低频重复电刺激(RNS)检测肌电RNS衰减率.采用蛋白免疫印迹法检测腓肠肌LRP4含量.结果 EAMG组所有大鼠在8周后出现肌无力症状,对照组、空白组大鼠无肌无力症状.EAMG组大鼠RNS衰减率明显高于对照组和空白组(均P<0.05).EAMG组大鼠腓肠肌LRP4蛋白的相对含量明显低于对照组和空白组(均P<0.05).结论 EAMG大鼠中,当AChR被自身抗体破坏时,可能导致包含LRP4在内的整条信号通路受损,进而使LRP4含量减少.LRP4是神经肌肉接头信号通路完整的重要分子.
关键词： 低密度脂蛋白受体相关蛋白4 重症肌无力 主动免疫 乙酰胆碱受体 -
重症肌无力患者肌细胞中LRP4胞内区与SNX17的相互作用
目的:探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白4(LRP4)和分拣微管连接蛋白17(SNX17)在重症肌无力(MG)患者肌细胞中相互作用关系.方法:分别构建原核表达载体pET30a-LRP4胞内区和真核表达载体pEASY-Blunt M2-SNX17,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达相对分子质量约为17800的His-LRP4胞内区,在HEK293T细胞中诱导表达相对分子质量约为53000的Myc-SNX17.利用抗Myc单克隆抗体磁珠与抗His单克隆抗体磁珠进行双向免疫共沉淀(Co-IP),以验证LRP4、SNX17两种蛋白分子是否存在相互作用.结果:成功构建了原核表达载体pET30a-LRP4胞内区和真核表达载体pEASY-Blunt M2-SNX17;抗Myc单克隆抗体磁珠与His-LRP4混合后不发生共沉淀,如再与Myc-SNX17混合则可发生共沉淀;抗His单克隆抗体磁珠与Myc-SNX17混合后不发生共沉淀,再与His-LRP4胞内区混合可发生共沉淀.结论:原核表达的LRP4胞内区蛋白与真核表达的SNX17体外可发生直接结合.
