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清热、活血类中药有效成分对THP-1巨噬泡沫细胞形成及分泌IL-1β、TNF-α的影响
目的 探讨清热、活血类中药有效成分抑制巨噬细胞泡沫化的作用及机制.方法 以氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)和细菌脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞成为巨噬泡沫细胞,采用油红O染色脂质半定量分析法和ELISA法检测中药有效成分对THP-1巨噬泡沫细胞形成及培养上清中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的影响.结果 20μmol/L的黄连素、黄芩苷、大黄素、丹参酮ⅡA和100mg/L的三七总皂苷可显著降低THP-1巨噬泡沫细胞油红O染色阳性率;20μmol/L的大黄素、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA可显著降低THP-1巨噬细胞的IL-1β分泌量;20μmol/L的黄连素可显著降低THP-1巨噬细胞的TNF-α分泌量.结论 清热、活血类中药有效成分可抑制巨噬细胞泡沫化及其炎症因子IL-1β和/或TNF-α的分泌,抑制炎症因子的释放可能是其抗泡沫细胞形成的机制之一.
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Kruppel样因子6基因对巨噬细胞中胆固醇蓄积的影响
背景：研究表明，Kruppel样因子6与巨噬细胞极化密切相关。但是，关于Kruppel样因子6在巨噬泡沫细胞形成中的作用尚不清楚。
目的：观察Kruppel样因子6过表达对氧化低密度脂蛋白刺激下的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)胆固醇蓄积及对ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响。
方法：取Raw264.7巨噬细胞株分别转染慢病毒空载体和重组载体pCDH-KLF6，作为对照组和Kruppel样因子6组，另取稳定感染慢病毒空载体的Raw264.7巨噬细胞株和稳定感染重组载体pCDH-KLF6的Raw264.7巨噬细胞株均加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白共孵育48 h后，得到氧化低密度脂蛋白组和Kruppel样因子6+氧化低密度脂蛋白组。
结果与结论：与对照组相比，氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平显著增加(P <0.05)。与氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞相比，Kruppel样因子6+氧化低密度脂蛋白组细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平明显下降，胆固醇酯/总胆固醇明显降低(P <0.05)。而未加入氧化低密度脂蛋白处理的2组细胞内脂质表达水平少，且对照组与Kruppel样因子6组相比，细胞内脂质表达水平差异无显著性意义。提示Kruppel样因子6可能通过促进ATP结合盒转运蛋白A1的表达，抑制氧化低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积。 -
014 TNF-α对内皮细胞粘附分子NFκB表达的影响
目的: 目前认为动脉粥样硬化(AS)是一种炎症性疾病, 其致病因素多种, 细胞因子生长因子等在其发病机制中起着重要的作用. 因而通过TNF-α作用于内皮细胞(EC)后, 观察单核细胞对其粘附的变化, 粘附分子表达以及对调控粘附分子基因的转录因子(NFκB)变化, 以探讨TNF-α在AS发生早期细胞行为中的作用. 方法: 人脐静脉内皮细胞和γTNF-α(5 ng/ml)作用4 h后, 用细胞计数法测U937细胞以EC粘附率, 用ELISA法检测EC膜上粘附分子VCAM-1、 ICAM-1、 P-selectin的表达, 以及采用细胞免疫化学方法测定NFκB核转位百分率. 结果: U937细胞对γTNF-α作用的EC粘附明显增高, 其粘附率为41.30%±1.16%(n=7), 对照组为4.50±1.01%(n=7)(P<0.001), γTNF-α能明显上调EC膜上VCAM-1, ICAM-1及P-selectin表达, 并能明显增加NFκB的核转位其阳性细胞为99.42%±0.84%而对照组为28.93%±14.06%(P<0.001), 当采用银杏提取液事先处理EC而后再用γTNF-α作用, 能抑制U937对EC的粘附百分率, 且有量效依赖关系. 结论: γTNF-α明显促进NFκB核转位, 增强了对粘附分子基因调控, 明显增加EC膜上粘附分子表达粘附分子是细胞粘附分子基础, 增加了单核细胞等对EC粘附, 这为单核细胞迁移到内膜下成为巨噬泡沫细胞提供了前提, 而银杏提取液有明显抑制单核细胞对TNF-α处理的EC粘附作用, 为AS的发病机理和防治提供线索.
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016 不同流动方式的流体对血管内皮细胞粘附分子VCAM-1表达的影响
目的: 动脉粥样硬化(AS)早期病变易发生于动脉分叉及动脉弯曲处, 推测与血液流动方式有关: 此处血流呈低切应力摆动方式, 血管其它部位的血流呈稳层流方式. 单核细胞粘附于血管内膜, 进而穿过内膜迁移到内膜下成为巨噬泡沫细胞, 这是AS的病理基础的早期细胞行为, 细胞粘附分子的表达是细胞粘附的分子基础. VCAM-1是参与内皮和单核粘附的主要粘附分子之一, 了解不同血流方式对血管内皮细胞(VEC)粘附分子VCAM-1表达的影响, 有助于AS发生机制的阐明. 方法: 接种的第二代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)玻片置于平板流动腔中, 在无菌条件下连接到灌流系统, 调节流动腔隙的高度及灌流液速率达到所需切应力(0.2 Pa), 此为稳层流, 在此基础上, 用T形管连接一个偏心轮使液面在HUVEC表面来回摆动为振荡流, 这两种流动方式作用于HUVEC 4、 18 h后, 用细胞免疫化学方法测定EC膜上VCAM-1表达. 结果: 低切应力振荡流4、 18 h细胞阳性表达百分率分别为14.83%±2.09%(n=6, P<0.01), 10.40%±2.28%(n=5, P<0.05), 稳层流4、 18 h, 分别为2.45%±0.47%(n=9, P<0.05), 4.98%±1.34%(n=9, P>0.05), 对照组为4.41%±0.59%(n=9), 阳性对照组(用TNF-α 5 ng/ml作用)为20.33%±3.01%(n=9, P<0.001). 结论: 同是低剪切应力, 由于流动方式不同, 细胞粘附分子VCAM-1表达不同, 振荡流可上调粘附分子VCAM-1表达, 促进细胞粘附发生, 为AS在局部形成提供了基础.
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NF-κB途径介导硫酸吲哚酚抑制THP-1源性巨噬泡沫细胞SR-B1的表达
目的 观察尿毒症毒素硫酸吲哚酚(IS)是否促进巨噬泡沫细胞脂滴的蓄积,以及对细胞内B类1型清道夫受体(SR-B1)表达和核因子NF-κB活化的影响.方法 体外佛波酯(PMA)诱导人源单核细胞系THP-1分化为巨噬细胞,加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)培养促进巨噬细胞泡沫化,随后以不同浓度的IS干预巨噬泡沫细胞,油红O染色观察细胞内脂滴变化,实时PCR和Western blotting检测SR-B1 mRNA和蛋白表达的水平,ELISA法检测NF-κB活化情况;经NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)预处理后IS再干预,实时PCR检测巨噬泡沫细胞内SR-B1 mRNA表达的变化.结果 与对照组(IS 0μmol/L)比较,IS干预后巨噬泡沫细胞内脂滴明显增加,随着IS浓度的升高,细胞内脂滴逐渐增加;IS干预后巨噬泡沫细胞的NF-κB活化程度增高,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,细胞在不同浓度的IS(2.5、25、250μmol/L)处理下,SR-B1 mRNA和蛋白的表达下降,随着IS浓度的增加,SR-B1和蛋白逐渐减少,呈现浓度依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05).PDTC预处理后SR-B1mRNA表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IS抑制SR-B1 mRNA和蛋白的表达,增加THP-1源性巨噬泡沫细胞胆固醇的蓄积,促进巨噬细胞泡沫化,从而促进动脉粥样硬化.NF-κB活化可能是IS抑制SR-B1 mRNA表达的可能机制之一.
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microRNA-152对RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积的影响及其靶基因验证
目的 探讨microRNA-152(miR-152)对ox-LDL刺激下的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积的影响及其靶基因的确定.方法 小鼠RAW264.7巨噬细胞分为两组,miR-152组和阴性对照组.ox-LDL刺激两组细胞48 h后,酶荧光学法测定各组细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)、胆固醇酯(cholesterol ester,CE)的含量和TC/CE比例.生物信息学方法、双荧光素酶报告及实时荧光定量PCR和Western blot证实miR-152的下游靶基因.结果 与对照组相比,miR-152组巨噬细胞内TC和CE含量增加,CE/TC的比值明显升高;并且,miR-152组ABCAl的mRNA和蛋白表达水平较对照组明显降低.结论 miR-152能够促进ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积,其机制可能与靶向调控ABCA1有关.
