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紫杉二烯合成酶文献资料
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南方红豆杉紫杉二烯合成酶cDNA的克隆
目的 采取分子手段通过紫杉醇生物合成途径对细胞中的紫杉醇产量进行调控.方法 根据已发表的中国红豆杉紫杉二烯合成酶cDNA序列设计2对引物,从南方红豆杉愈伤组织提取总RNA,通过RT-PCR技术扩增出该酶5'端长度为1201bp和3'端长度为1388bp的2个cDNA片段,将其克隆到pGEM-T Vector上并转化到E. coli DH5α中,5'端片段经XbaⅠ和BglⅡ双酶切鉴定,3'端片段经BglⅡ和SacⅠ双酶切鉴定后,对阳性克隆进行序列测定,证实确为紫杉二烯合成酶基因.将这2个cDNA片段与双元载体pCAMBIA1300连接并转化到E. coli DH5α中,经XbaⅠ和SacⅠ双酶切鉴定.结果 成功得到全长为2589bp的紫杉二烯合成酶基因,编码862个aa.结论 南方红豆杉紫杉二烯合成酶基因与中国红豆杉紫杉二烯合成酶基因具有98%的同源性;并且紫杉二烯合成酶cDNA成功插入到pCAMBIA1300中,为下一步的转基因工作做好了准备.
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紫杉二烯合成酶
紫杉二烯合成酶是第一个被详细研究和目前所发现的重要的紫杉醇合成代谢酶,它催化紫杉醇生物合成途径中的第一个定向的、慢速的步骤,然而该步骤并非限速步骤.文章综述了紫杉二烯合成酶的酶学特性、催化机理、cDNA克隆和表达,以及对紫杉醇合成代谢通量的影响等方面的研究进展,指出紫杉醇生物合成途径中的限速步骤位于距环化步骤较远的下游处.
