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几种红豆杉的品种分析
红豆杉是红豆杉科(Taxaceae)红豆杉属(Tax us)植物的总称.红豆杉又称紫杉,也称赤柏松.属浅根植物.其主根不明显、侧根发达.起源于古老的第三纪,是第四纪冰川后遗留下来的世界珍稀濒危植物,因此又称之为植物王国里的"活化石"[1].由于在自然条件下红豆杉生长速度缓慢,再生能力差,所以很长时间以来,世界范围内还没有形成大规模的红豆杉原料林基地.
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南方红豆杉总黄酮、总多糖与紫杉醇配伍增效减毒作用研究
目的:研究南方红豆杉中总黄酮、总多糖及其与紫杉醇配伍抗肿瘤的增效减毒作用.方法:采用MTT比色法,观察南方红豆杉中总黄酮、总多糖及其与紫杉醇配伍对4T1、A549、MCF-7细胞增殖抑制率的影响;利用等效线图探讨联合用药的行为.采用均匀设计分组,培养S180肉瘤ICR小鼠,观察配伍对荷瘤小鼠移植瘤生长的抑制情况;血液细胞分析仪检测血常规.结果:体外总多糖、总黄酮能够增强紫杉醇对4T1、A549细胞的抑制作用;总多糖能够增强紫杉醇体外对MCF-7细胞、体内对S180荷瘤小鼠移植瘤的抑制作用,体内减轻紫杉醇抗肿瘤时的骨髓抑制毒副作用.结论:紫杉醇可以通过配伍南方红豆杉总黄酮、总多糖达到增效减毒作用.
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南方红豆杉枝叶不同提取部位抑制α-葡萄糖苷酶及抗氧化活性筛选
目的:考察南方红豆杉枝叶不同提取部位体外抑制α-葡萄糖苷活性和抗氧化活性.方法:对南方红豆杉的醇提液、石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位采用体外α-葡萄糖苷酶抑制模型进行酶抑制活性研究,并通过其清除1,1二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基和Fe3±还原能力(FRAP)测定南方红豆杉提取物的体外抗氧化作用.结果:南方红豆杉提取物均有不同程度抑制α-葡萄糖苷酶活性,以乙酸乙酯部位效果佳(IC50 27.854 1 mg·L-1),其次醇提物(IC5029.215 5 mg·L-1)和正丁醇部位(IC50 38.913 0 mg·L-1),水部位(IC50 74.505 9 mg·L-1)石油醚部位(IC50 128.729 5 mg·L-1)弱.抗氧化活性依次为醇提液(DPPH IC506.370 7 mg·L-1,FRAP 4.266 mmol·g-1)＞乙酸乙酯部位(DPPH IC50 9.535 8 mg·L-1,FRAP 3.275 mmol·g-1)＞正丁醇部位(DPPH IC50 20.461 3 mg·L-1,FRAP 1.498 mmol·g-1)＞水部位(DPPH IC5026.685 5 mg·L-1,FRAP 0.678 mmol·g-1)＞石油醚部位.结论:初步确定南方红豆杉抑制α-葡萄糖苷酶活性有效成分主要在乙酸乙酯与正丁醇部位,抗氧化及其相关成分主要在乙酸乙酯部位.
关键词： 南方红豆杉 枝叶 抑制α-葡萄糖苷酶活性 抗氧化 -
南方红豆杉水提物联合紫杉醇对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用研究
目的:研究南方红豆杉水提物联合紫杉醇对肺癌A549细胞增殖的抑制作用和机制.方法:将A549细胞分为低浓度紫杉醇联合不同浓度红豆杉组、低浓度紫杉醇组、空白对照组,用CCK-8法检测药物作用48h后对细胞存活率的影响,用Western blot检测细胞内Bcl-2、Bax、Survivin蛋白表达变化.结果:红豆杉可增加紫杉醇对A549细胞的抑制作用,且随着药物浓度的增加,其抑制作用逐步增强;紫杉醇联用红豆杉可通过下调Bcl-2,Survivin,并上调Bax的表达,而促进细胞发生凋亡.结论:红豆杉联合紫杉醇能抑制A549细胞生长,其机制可能与凋亡相关基因Bcl-2,Survivin的降低,促凋亡基因Bax的增高有关.
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南方红豆杉不同组织总RNA提取方法研究
目的:从南方红豆杉不同组织中提取高质量的总RNA.方法:以南方红豆杉幼叶、嫩茎和种子为材料,采用Trizol法、CTAB法、热酚法、改良热酚法和天根RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒法5种方法进行比较分析.结果:Trizol法基本未提取到南方红豆杉不同组织的RNA;CTAB法提取的RNA浓度较高,但OD260/OD280大于2.1,RNA降解严重;热酚法提取的RNA浓度较高,OD260/OD280均小于1.8,蛋白质和酚类物质等残留严重,质量较低;改良热酚法和试剂盒法28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA条带清晰,完整性好,OD260/OD280均在1.8～2.1范围内,纯度高.结论:Trizol法、CTAB法和热酚法均不适用于南方红豆杉总RNA提取,而改良热酚法和试剂盒法可提取到质量较好的南方红豆杉总RNA.
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南方红豆杉水提物抑制EGFR/MAPK通路诱导人肺癌A549细胞凋亡的研究
目的:进一步研究南方红豆杉水提物抑制人肺癌A549细胞增殖,诱导其凋亡的机制.方法:采用MTT法检测南方红豆杉水提物对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测其对A549细胞凋亡的影响;WesternBlot技术检测其对EGFR/MAPK信号通路相关蛋白表达的影响.结果:南方红豆杉水提物对A549细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量效应相关性,IC50值为2.20mg/mL.2.0、2.5、3.0mg/mL南方红豆杉水提物处理24h后凋亡率分别为20.9％,38.0％和61.7％.南方红豆杉水提物抑制磷酸化EGFR和ERK1/2的水平,促进p38 MAPK磷酸化.但对EGFR、ERK1/2和p38 MAPK的表达却无影响.结论:南方红豆杉水提物通过多靶点抑制人肺癌A549细胞增殖,抑制EGFR/MAPK信号通路诱导其凋亡是其机制之一.
关键词： 南方红豆杉 人肺癌A549细胞 凋亡 EGFR/MAPK通路 -
南方红豆杉组织培养提取物对α-糖苷酶活性的影响
目的:研究南方红豆杉枝叶及其愈伤组织萃取紫杉醇后剩余部分对α-糖苷酶活力的影响.方法:将萃取紫杉醇后剩余部分分别加入α-淀粉酶、α-麦芽糖酶、α-葡萄糖苷酶不同微量反应体系中,分别用Bernfeld法、PNPG法、GOD法测定其酶活性,并采用Dixon作图法研究其动力学性质.结果:枝叶及其愈伤组织对α-麦芽糖酶和α-葡萄糖苷酶有明显的抑制作用,与拜唐苹的作用一致,其抑制存在量效关系,抑制α-麦芽糖酶活性[IC50=(218.49±18.24) mg/mL和(91.04±5.43) mg/mL]呈可逆性、竞争性抑制,抑制α-葡萄糖苷酶活性[IC50=(7.99±1.57) mg/mL和(19.87±2.52) mg/mL]呈不可逆性、竞争性抑制.结论:南方红豆杉枝叶及其愈伤组织萃取紫杉醇后剩余部分对α-糖苷酶均有一定的抑制活性,愈伤组织较优于枝叶.
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南方红豆杉水提物诱导人肺腺癌A549细胞凋亡与紫杉醇抑瘤机制不同的研究
目的:初步探讨南方红豆杉水提物抗人肺腺癌A549细胞(以下简称“A549细胞”)的作用机制,明确其与紫杉醇抗肿瘤机制的不同.方法:以流式细胞仪检测南方红豆杉水提物对A549细胞凋亡的影响,以紫杉醇为对照；以普通光学显微镜观察南方红豆杉水提物和紫杉醇对A549细胞形态的影响；以Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白P-jnk的表达.结果:①流式细胞检测及光镜观察发现南方红豆杉水提物处理后A549细胞呈典型的早期凋亡表现(P＜0.05,P＜0.01),而紫杉醇组细胞以坏死及晚期凋亡表现为主(P＜0.05,P＜0.01),且其比例均呈现一定的剂量-效应关系；②Western blotting检测发现南方红豆杉水提物处理后A549细胞P38蛋白表达无明显变化、P-jnk蛋白随药物浓度增加表达减少(P＜0.01).结论:南方红豆杉水提物抗A549细胞的机制与紫杉醇不同,其作用机制主要与诱导肿瘤细胞凋亡有关.
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南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞增殖抑制作用的研究
目的:研究南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用和机制.方法:采用MTT法检测南方红豆杉水提物对A549细胞增殖的抑制作用；生长曲线法观察其抑制A549细胞的时间-效应曲线；流式细胞仪检测其对A549细胞周期及凋亡的影响；倒置显微镜及电镜观察其对A549细胞形态的影响.结果:南方红豆杉水提物对A549细胞的增殖有抑制作用；其抑制作用机制为使A549细胞周期出现明显的G0/G1期阻滞,诱导细胞凋亡.结论:南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞的增殖有抑制作用.
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衍生化GC-MS法同时测定南方红豆杉叶中19种脂肪酸的含量
目的:建立衍生化GC-MS法同时测定不同来源南方红豆杉叶中19种脂肪酸甲酯化衍生物的含量.方法:采用HP-VOC(60m×320μm,1.8μm)弹性石英毛细管柱,程序升温:初温80℃,以10℃/min升至150℃保持5min,以3℃/min升至195℃保持5min,以2℃/min升至230℃保持10min,总计运行59.5min.进样口温度为250℃,分流比10∶1,进样量0.6μL,载气为氮气,流速为10mL/min.结果:19种脂肪酸的响应峰面积与其相应浓度的线性关系良好(r＞ 0.9976).加样回收率为94.85％-105.43％,RSD均小于4.0％.结论:该方法简便快速、准确,具有良好的重复性和回收率,可用于南方红豆杉叶中19种脂肪酸成分含量测定.不同来源的南方红豆杉叶中脂肪酸含量存在显著差异.
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光照强度与南方红豆杉初生代谢产物相关性研究
目的:探讨不同光照条件对南方红豆杉初生代谢产物含量的影响规律,为其进一步探讨南方红豆杉生物学特性及开发利用提供实验依据.方法:通过LI-6400便携式光合作用仪采集不同光照强度(自然光照、一层遮荫、二层遮荫和三层遮荫)下南方红豆杉光合作用参数及气体交换参数,绘制光响应曲线,分析不同光照强度对南方红豆杉光合作用及初生代谢产物的影响.结果:自然光照条件时,有助于南方红豆杉进行更充分地光合作用,提高其初生代谢产物的含量,但适度的遮荫又有助于提高南方红豆杉的水分利用率,有利于其生长,两者之间并不完全平行.结论:光照强度对南方红豆杉的光合作用、初生代谢产物含量有明显的影响.
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南方红豆杉水提物抑制裸鼠A549肺癌移植瘤生长及其机制研究
目的:研究南方红豆杉水提物对裸鼠A549肺癌移植瘤生长的抑制作用和机制.方法:建立荷A549肺癌移植瘤模型,随机分为对照组、低、中、高剂量南方红豆杉水提物实验组,24 h后以等体积生理盐水及药物灌胃,给药7周,每3d测移植瘤长短径,绘制移植瘤生长曲线,给药7周后处死裸鼠,取瘤组织,计算抑瘤率,采用Real-time PCR及Western blot方法检测mRNA和蛋白水平.结果:南方红豆杉水提物各剂量组均有明显抑瘤效果(P＜0.05).与对照组相比,各实验组移植瘤组织中EGFR及Survivin mRNA水平明显下调(P＜0.05),VEGF mRNA水平无明显变化.灰度值之比分析显示:各实验组移植瘤组织中EGFR及VEGF蛋白水平均有下调趋势,但差异无统计学意义,Survivin及p-EGFR蛋白水平明显下调(P＜0.05).结论:南方红豆杉水提物对血管生成无明显影响,可能通过抑制Survivin蛋白,抑制EGFR磷酸化,起到抑制移植瘤生长的效果.
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南方红豆杉水提物诱导人肺癌A549细胞凋亡及其分子机制的实验研究
目的 探讨南方红豆杉水提物诱导人肺癌A549细胞的凋亡作用及其分子机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测南方红豆杉水提物对A549细胞的增殖抑制作用；以光镜、电镜、膜联蛋白V-FITC PI( Annexin V-FITC/PI)标记法检测细胞凋亡；以蛋白印迹法分析南方红豆杉水提物对细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2),c-jun氨基未端激酶1/2(JNK1/2)和生存素(survivin)蛋白表达的影响.结果 南方红豆杉水提物能抑制A549细胞的增殖；南方红豆杉水提物处理A549细胞后,光镜与电镜下可见到明显的凋亡细胞；Annexin V-FITC/PI标记法的定量检测进一步证实了南方红豆杉水提物诱导细胞凋亡的作用；蛋白印迹检测表明南方红豆杉水提物能使survivin表达下降,对ERK1/2和JNK1/2表达无影响.结论 南方红豆杉水提物能显著抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,主要通过调节survivin蛋白的表达来实现.
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南方红豆杉细胞培养物的化学成分研究
采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、HPLC等柱色谱技术,从南方红豆杉细胞培养物的80％乙醇(体积分数)提取物中分离得到13个化合物,根据理化性质与波谱数据鉴定化合物的结构分别为:2α,4α,7β,9α,10β-pentaacetoxy-14β-hydroxytax-11-ene(1)、2α,4α,7β,9α,10β-pentaacetoxytax-11-ene (2)、1β-deoxybaccatin Ⅵ (3)、2α-acetoxytaxusin (4)、taxuyunnanine C(5)、yunnanxane (6)、2α,5α,10β-triacetoxy-14β-propionyloxy-4(20),11-taxadiene (7)、2α,5α,10β-triacetoxy-14β-isobutyryloxy-4 (20),11-taxadiene (8)、2α,5α,10β-triacetoxy-14β-(2'-methyl)butyryloxy-4 (20),11-taxadiene (9)、13-dehydroxylbaccatin Ⅲ(10)、13-dehydroxy-10-deacetylbaccatin Ⅲ (11)、paclitaxel (12)及β-谷甾醇(13).其中,化合物1为新化合物,化合物2、4、10和11为首次从南方红豆杉的细胞培养物中分离得到.
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人工栽培的南方红豆杉化学成分研究(III)
人工栽培的南方红豆杉全株乙醇提取物的氯仿萃取部位通过反复硅胶和凝胶柱层析分离得到4个化合物,采用波谱解析(IR,ESI-MS,1H NMR和13C NMR)等方法确定了其结构,4个化合物分别鉴定为 taxamairin K (1), 2α,4α-dideacetoxy-7β-benzoyloxy-5β,20-epoxy-9α,10β,13α,15-tetrahydroxy-11(15→1)abeotaxa-11-ene (2), 7β-xylosyl-taxol (3), 10-deacetoxy-7-xylosyl-taxol (4),其中化合物1为新化合物.
关键词： 南方红豆杉 taxamairin K 人工栽培 -
南方红豆杉枝叶中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的分离与纯化
目的:以南方红豆杉的枝叶为原料,研究其中活性成分10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)的分离和纯化条件,并进行优化筛选.方法:综合运用浸提、萃取(包括液液萃取和反萃取)、色谱分离和重结晶技术得到10-DABⅢ晶体,并采用UV,HPLC法进行分析鉴定.结果:得到了用以合成高效抗癌药紫杉醇的前体--10-DABⅢ晶体,纯度可达91%,整个工艺收率达7.9%.结论:本实验为首次采用该工艺路线得到10-DABⅢ和紫杉醇,总收率达60%以上,可用于进一步的工业化研究.
关键词： 南方红豆杉 紫杉醇 10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ) 提取 -
南方红豆杉内生真菌的分离及抗菌活性筛选研究
目的 对我国广西产的野生南方红豆杉内生真菌进行分离,并研究其抗菌活性,旨在筛选具有良好抗菌活性的真菌菌株,以寻找新型抗菌物质.方法 以组织块分离法获得内生真菌,并以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌为实验菌株,用琼脂块法和纸片扩散法对分离的菌株进行抗菌活性筛选.结果 从南方红豆杉根、茎、叶中共分离到34株内生真菌,其中有8株真菌对至少1种实验菌株有抗菌活性,占总分离菌株的23.53％.结论 南方红豆杉内生真菌种类多样,而且存在着丰富的抗菌天然活性物质,这可为寻找新型抗菌物质提供可利用的候选菌株.
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HPLC法测定南方红豆杉种子中紫杉醇的含量
目的:建立高效液相色谱测定南方红豆杉种子中紫杉醇含量的方法.方法:采用Whatman C18 (250 mm × 4.6 mm,5.0 μm) 色谱柱,柱温30℃;流动相为乙腈-水(35∶65-80∶20)30 min梯度洗脱,流速1.0 mL/min;检测波长227 nm.结果:紫杉醇的线性范围:8.5 ~ 51.0 μg/mL(r = 0.999 6),平均回收率为99.7%,RSD为1.57%;三批南方红豆杉种子种紫杉醇的含量分别为:0.019 6%、0.021 2%和0.020 5%.结论:方法稳定可靠,重复性和精密度良好,可作为南方红豆杉药材的含量测定方法,为紫杉醇的分离纯化及该药材的质量控制提供科学依据.
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南方红豆杉各部位中紫杉醇、10DABⅢ、7-木糖紫杉醇的含量分析
取1~3 年生南方红豆杉中各部位( 包括树根、树皮、叶片、枝条、主干木质部) 进行分离,分析其在全株中所占的比例,进一步定量分析其各部位中紫杉醇、10DAB Ⅲ、7- 木糖紫杉醇的含量;发现南方红豆杉中各部位紫杉烷类化合物含量差异较大,对工业化生产过程中如何进行合理分类加工,从而达到好的提取分离效果,起到很大的作用.
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红豆杉根的显微结构及其内生真菌分布
目的研究南方红豆杉根的显微结构及其内生真菌的分布.方法取自然生长状态下南方红豆杉根,石蜡切片光学显微观察并照相.结果南方红豆杉根的次生结构由周皮和维管系统组成,次生木质部由轴向系统和径向系统两部分构成.轴向系统由管胞和木薄壁组织细胞组成;径向系统由木射线构成;根的次生韧皮部则由筛胞和韧皮薄壁细胞组成.次生韧皮中分布有少量韧皮纤维,韧皮射线不明显.根被细胞中分布有大量内生真菌菌丝.结论南方红豆杉根的次生构造与其他裸子植物和双子叶植物一致,但次生木质部由管胞,次生韧皮部由筛胞组成.内生真菌分布于红豆杉根被细胞,并只在一定区域细胞中分布.
