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Apicidin对人舌鳞癌CAL-27细胞作用的初步研究
目的 探讨Apicidin对体外培养人舌鳞癌CAL-27细胞影响及作用机制.方法 体外培养人舌鳞癌CAL-27细胞,采用不同浓度的Apicidin作为实验组,并设立对照组,倒置显微镜观察细胞形态,CCK-8法检测细胞增殖、TUNEL、流式细胞仪检测Apicidin对CAL-27细胞凋亡作用.结果 Apicidin可显著抑制CAL-27细胞的生长(P＜0.05),呈时间剂量依赖性.通过TUNEL法、流式细胞仪检测显示CAL-27细胞的凋亡,并且使CAL-27细胞停留在G2期.结论 Apicidin能显著抑制CAL-27的体外生长并能诱导细胞凋亡.
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牙本质基质蛋白1在口腔鳞癌细胞中的表达
目的:观察牙本质基质蛋白1 (dentin matrix protein 1,DMP1)在舌鳞癌细胞Cal-27、Tca-8113以及人永生化表皮细胞Hacat中的表达情况,初步探讨DMP1与口腔鳞癌的相关性.方法:免疫荧光染色用于人永生化表皮细胞Hacat与舌鳞癌细胞Cal-27中,于共聚焦显微镜下观察DMP1在两组细胞的染色情况;采用Western blot方法,分别提取Hacat,Cal-27和人舌鳞癌细胞Tca-8113中DMP1蛋白并检测其含量.结果:通过免疫荧光实验观察到DMP1在Cal-27细胞及Hacat细胞中都表达于细胞质,同时发现DMP1在Hacat细胞中的荧光强度为41.2,高于Cal-27细胞荧光强度26.5;Western blot实验结果显示Hacat细胞中DMP1蛋白的灰度分析值为100和109,明显高于Cal-27和Tca-8113细胞的40.8和37.6.结论:DMP1在口腔鳞癌细胞和Hacat细胞中的表达存在差异,提示DMP1可能与口腔鳞癌的发生相关.
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miRNA-32-5p对EZH2基因的靶向调控以及对口腔癌细胞CAL-27增殖的影响
目的:构建miR-32-5p慢病毒载体,研究其对EZH2基因的靶向调控作用以及对CAL-27细胞增殖作用的影响.方法:分别构建pSicoR-miR-32-5p及pMIR-Report-EZH2过表达载体,应用双荧光素酶报告基因系统、Western免疫印迹及实时定量荧光PCR方法验证miR-32-5p与EZH2的靶向调控关系,应用MTT法检测过表达miR-32-5p后对CAL-27细胞的增殖调节作用,采用SPSS20.0软件包对数据进行统计学分析.结果:成功构建了pSicoR-miR-32-5p及pMIR-Report-EZH2重组质粒,并证实miR-32-5p过表达可明显抑制EZH2的蛋白及mRNA的表达水平(P＜0.05);抑制miR-32-5p的表达,则明显上调EZH2的蛋白及mRNA的表达水平(P＜0.05);MTT结果显示,miR-32-5p可显著抑制CAL-27的增殖.结论:miR-32-5p可通过靶向作用于EZH2-3' UTR的特异序列,直接抑制EZH2基因的表达并调控CAL-27细胞的增殖.
关键词： miRNA-32-5p 口腔癌 EZH2 CAL-27 -
Cal－27舌鳞癌动物模型的建立及其意义
目的：建立Cal－27舌鳞癌动物移植瘤模型，研究肿瘤细胞的生物学行为及转移瘤的特性。方法：将107／0．2 mL Cal－27细胞悬液通过在裸鼠左腋背部皮下注射接种，建立移植瘤模型。达到成瘤标准后，定期测量肿瘤大小并记录体质量变化，4周后处死裸鼠，通过组织切片HE染色法观察组织结构异型性和细胞异型性，并观察肺、肝有无转移。结果：实验裸鼠在接种后平均14天达到成瘤标准，24只裸鼠移植瘤中，成瘤率100%。未见有肺、肝脏的转移。结论：在细胞接种的数量、肿瘤接种的部位、实验动物的周龄及状态等内外部条件都适宜的情况下，成瘤率可以达到100%。该模型较客观地反应了人舌鳞癌的生物学行为，为以后的动物模型研究提供了较为适宜的注射剂量，为实验研究提供了理想的动物模型。
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人脐带血间充质干细胞对人舌鳞癌移植瘤生长的影响及作用机制
目的:探讨人脐带血间充质干细胞(HUC-MSCs)对人舌鳞癌细胞(Cal-27)移植瘤生长的影响及其相关特异性蛋白表达机制.方法:将Cal-27细胞移植到BALB/c裸小鼠皮下,待裸鼠肿瘤体积达到50 mm3成瘤标准后通过裸鼠尾静脉注射经GFP绿色荧光蛋白标记的HUC-MSCs,然后研究HUC-MSCs对预先建立的Cal-27细胞移植瘤生长状况的影响.为了阐明其发生机制,我们对具体阳性实验组及阳性对照组肿瘤组织的细胞增殖及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、c-Myc、β-catenin的相对mRNA表达量进行了q-PCR分析实验.结果:在预先建立人舌鳞癌的体内模型中,通过尾静脉注射的经GFP绿色荧光蛋白标记的HUC-MSCs可以在肿瘤组织内富集并可抑制肿瘤生长.通过实时荧光定量PCR实验,我们发现阳性实验组相较于阳性对照组肿瘤组织细胞内Bax的mRNA表达量上调,Bcl-2、β-catenin、c-Myc的mRNA表达量下调.结论:HUC-MSCs通过促进Bax/Bcl-2形成同源二聚体以及抑制Wnt/β-catenin信号通路可抑制Cal-27细胞移植瘤生长.
