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饱和游离脂肪酸通过其代谢产物酰基辅酶A导致卵巢颗粒细胞凋亡
探讨脂肪酸对人卵巢颗粒细胞生长的影响.不同剂量的游离脂肪酸处理颗粒细胞1～3天,用台盼蓝排除法对活细胞进行计数.用染色体DNA断裂和细胞形态学改变确定细胞凋亡.检测脂肪酸代谢产物酰基辅酶A是否直接引起细胞凋亡.测定与细胞凋亡相关的Bcl-2和Bax蛋白质表达水平.结果表明,饱和脂肪酸通过其代谢产物酰基辅酶A呈剂量依赖性的引起颗粒细胞凋亡,并导致Bcl-2水平下降和Bax水平升高.说明饱和脂肪酸对卵巢颗粒细胞有直接致凋亡作用.提示,女性肥胖和胰岛素抵抗患者出现的性功能障碍可能与饱和脂肪酸水平增高有关.
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携带Bcl-2基因的慢病毒对原代培养的人卵巢颗粒细胞的影响
目的 探讨携带Bcl-2基因的慢病毒对体外培养的原代人卵巢颗粒细胞感染效率及对细胞凋亡的影响.方法 构建携带Bcl-2基因的慢病毒载体,包装成高滴度慢病毒,将重组慢病毒在体外分别以不同感染复数(MOI)值(10、50、100、200、400)感染人卵巢原代颗粒细胞,观察感染24、48、72、96h后的感染效率及细胞增殖情况；将人卵巢颗粒培养24h后,分为3组.实验组:加MOI值为100的重组慢病毒GC-FU-Bcl-2；空白对照组:不加病毒；空载体对照组:加空载病毒GC-FU-EGFP.转染后第3、7天,采用Western blotting及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测目的基因Bcl-2在人卵巢原代颗粒细胞中的蛋白及mRNA的表达水平.同时转染后第3天采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 原代培养的人卵巢颗粒细胞24h即贴壁,集落样生长,呈多角形或梭形；当MOI为100时,细胞的形态和生长不受影响,且感染效率较高,感染后72h达高峰,感染率达60％.携带Bcl-2基因的慢病毒感染靶细胞后,实验组中检测到Bcl-2基因及蛋白的表达,且卵巢颗粒细胞的凋亡率明显低于空载体对照组.结论 携带Bcl-2基因的慢病毒感染原代培养的人卵巢颗粒细胞后可过度分泌Bcl-2蛋白,抑制细胞凋亡.
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内质网应激的发生及其与多囊卵巢综合征的关系
内质网(endoplasmic reticulum,ER)是大的细胞器之一,是细胞膜所有组件、蛋白、脂类和类固醇合成的部位.当未折叠/错误折叠蛋白在内质网内堆积时将导致内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS).ERS是ER生理功能发生紊乱的一种病理状态,是机体的一种自我防御机制,持久而强烈的ERS可引起细胞不可逆损伤甚至凋亡,因此其是促细胞凋亡的一条重要途径.多囊卵巢综合征患者卵巢窦卵泡颗粒细胞异常凋亡,表明ERS介导的颗粒细胞凋亡可能与多囊卵巢综合征的发生有关.
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长链非编码RNA在卵泡与早期胚胎发育中的研究进展
长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是长度大于200 nt并且缺乏蛋白质编码能力的一类RNA分子.卵泡及早期胚胎发育与女性生殖健康密切相关,lncRNA在其中发挥重要作用.目前的研究认为lncRNA可能通过影响女性生殖干细胞的增殖和体外存活能力以及调节卵丘扩张和卵母细胞成熟参与卵泡发育.lncRNA也可通过影响颗粒细胞增殖、分化与凋亡在排卵、黄体形成和早期胚胎发育等阶段发挥重要作用.对lncRNA的深入研究有助于进一步了解卵泡及早期胚胎发育的分子机制,为评价女性卵巢储备及移植前胚胎质量提供新的诊断标准,同时为不孕症的治疗提供新思路.现就lncRNA在卵泡与早期胚胎发育中的研究进行综述.
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P38αMAPK在雌性生殖系统中的研究进展
丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPK）是真核生物长期进化过程中高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，MAPK在许多生物中发挥着重要作用，包括细胞生长、分化、凋亡、炎症反应、细胞骨架重排及应激刺激等。 P38MAPK是其中重要的一个亚家族，其中P38α是P38MAPK中重要的亚型，在雌性生殖系统中有着重要的作用。卵巢在受到体内激素或者外界因素等信号刺激时，通过激活P38αMAPK信号通路，表达各种细胞调控因子以调控颗粒细胞活动及卵母细胞减数分裂，进而影响生殖细胞的生长发育。激活颗粒细胞中P38αMAPK信号通路可以调控激素分泌及相关细胞因子的释放，从而有助于卵母细胞的成熟；P38αMAPK可能参与了卵母细胞的减数分裂过程，下调P38α的表达，可能导致成熟卵母细胞数目减少或者非整倍体卵母细胞的产生。
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 卵母细胞 粒层细胞 减数分裂 生长和发育 -
颗粒细胞在卵母细胞发育成熟中的作用
卵泡的发育是涉及多种细胞、多个阶段的复杂过程,其中颗粒细胞和卵母细胞是构成卵泡的重要细胞,卵泡的形成需要颗粒细胞与卵母细胞间密切的相互作用.在促性腺激素等多种激素和信号分子作用下,颗粒细胞增殖、分化,并通过间隙连接与周围的颗粒细胞、卵母细胞、膜细胞进行物质交换和信号传递,卵母细胞也可分泌多种因子反作用于颗粒细胞.颗粒细胞与卵母细胞间的相互作用涉及多条信号通路,这些信号通路间同样存在相互影响,决定卵泡的成熟或闭锁.当这些信号通路被过度激活或抑制时,可影响细胞因子的生成或传递,从而引起颗粒细胞或卵泡的凋亡,具体机制尚未明确.本文就卵泡的形成,颗粒细胞与卵母细胞、膜细胞在发育过程中的相互作用以及涉及的重要信号通路进行综述.
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小鼠Tox3基因重组慢病毒载体的构建及其在卵巢颗粒细胞中的表达
目的:构建重组慢病毒载体pCDH-Tox3-Flag,并检测其转染小鼠原代卵泡颗粒细胞后的表达情况.方法:利用DNA重组技术将小鼠Tox3基因克隆入慢病毒表达载体pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV中,通过酶切、测序验证后,将重组慢病毒载体pCDH-Tox3-Flag、包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染HEK293FT细胞,包装重组慢病毒LV-Tox3-Flag,并感染小鼠原代颗粒细胞,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Tox3 mRNA的转录水平,蛋白质印迹(Western blot)法检测TOX3-Flag蛋白的表达情况.结果:经酶切及测序结果证实,构建了重组慢病毒载体LV-Tox3;RT-PCR及Western blot结果显示慢病毒感染小鼠原代颗粒细胞后,Tox3基因能在细胞内正确转录、翻译并稳定表达TOX3蛋白.结论:成功建立Tox3基因慢病毒表达载体L V-Tox3-Flag,包装的慢病毒能够成功感染小鼠原代颗粒细胞,并使Tox3基因得到稳定表达,为后续研究Tox3基因在生殖相关疾病的生理与病理作用奠定了基础.
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生长分化因子-9与超排卵周期卵巢低反应的相关性研究
目的:研究超排卵周期卵巢低反应与颗粒细胞中生长分化因子(GDF)-9表达的相关性.方法:选取行体外受精一胚胎移植(IVF-ET)的患者70例,采用本中心常规方案进行超排卵,依据取卵时获得平均直径>14mm的卵泡数分为卵巢低反应组21例,中反应组25例,高反应组24例.应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PeR)技术检测卵巢不同反应组患者卵泡壁颗粒细胞和卵丘颗粒细胞GDF-9 mRNA的表达,分析其与卵巢低反应的关系.结果:卵巢不同反应组患者年龄、不孕年限、基础卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)水平及促性腺激素(Gn)用量差异均无统计学意义(P>0.05).卵巢低反应组卵泡壁颗粒细胞和卵丘颗粒细胞的GDF-9 mRNA表达均低于中反应组和高反应组(P<0.05),GDF-9在卵泡壁颗粒细胞和卵丘颗粒细胞中的表达与获卵数呈正相关(r分别为0.508、0.632,均P<0.01).结论:超排卵周期卵巢低反应与颗粒细胞GDF-9表达有关.
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祛瘀解毒颗粒对子宫内膜异位症大鼠卵巢颗粒细胞肿瘤坏死因子α和白细胞介素6 mRNA表达的影响
目的:观察祛瘀解毒颗粒对子宫内膜异位症(endometriosis,EM)模型大鼠卵细胞质量及卵巢颗粒细胞肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)mRNA表达的影响.方法:40例EM模型大鼠随机分为实验组(给予祛瘀解毒方颗粒)和对照组(给予生理盐水)各20例,另取20只大鼠只牵拉子宫作为假手术组,观察优质卵细胞数目及优质卵细胞率,采用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测3组颗粒细胞TNF-α和IL-6的mRNA表达.结果:实验组优质卵细胞数目和优质卵细胞率明显高于对照组(P＜0.05),而实验组颗粒细胞TNF-α和IL-6mRNA表达又明显低干对照组(P＜0.05).结论:EM模型大鼠卵巢颗粒细胞TNF-α和IL-6 mRNA表达升高,祛瘀解毒方可能通过降低TNF-α和IL-6水平提高卵细胞的质量.
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cathpsin D在多囊卵巢综合征卵巢组织中的表达
目的:检测cathepsin D蛋白在多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)患者卵巢组织中的表达.方法:采用Western blot免疫印迹法检测卵巢组织中cathepsin D蛋白的表达,并进行半定量分析;免疫组织化学法观察cathepsin D蛋白的分布定位.结果:PCOS组患者卵巢中cathepsin D蛋白表达显著低于对照组(2.06±0.39 vs 4.76±1.43,P＜0.05);cathepsin D在卵泡和卵巢间质细胞上均有表达,其中在卵泡颗粒细胞上染色深,主要定位在胞浆和胞膜.结论:cathepsin D蛋白在PCOS患者卵巢组织中表达水平显著下调,这可能是PCOS卵泡发育异常的机制之一.
关键词： 多囊卵巢综合征/病理学 组织蛋白酶D/生物合成 免疫组织化学 受精 体外 胚胎移植 卵泡/生长和发育 粒层细胞 -
多囊卵巢综合征患者颗粒细胞AQP9的表达
目的:研究多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)卵巢组织中窦状卵泡和在超促排卵(COH)周期黄素化颗粒细胞AQP9的表达,探讨颗粒细胞AQP9表达水平与COH周期卵泡液中甾体激素水平的关系.方法:行体外受精-胚胎移植的PCOS患者18例,对照组18例.收集卵泡(直径≥1.8 cm)液,测定甾体激素E2、P和T水平;取卵时分别收集大卵泡(直径＞1.6 cm)和小卵泡(直径＜1.4 cm)的黄素化颗粒细胞.用RT-PCR检测COH周期黄素化颗粒细胞AQP9 mRNA的表达,免疫组化定位AQP9在PCOS卵巢内窦状卵泡和COH周期的黄素化颗粒细胞的表达.结果:RT-PCR检测证实黄素化颗粒细胞有AQP9 mRNA表达,PCOS组AQP9 mRNA表达水平与对照组比较差异无显著性(P＞0.05),PCOS组大卵泡的颗粒细胞AQP9表达高于小卵泡,但无统计学差异.免疫组化显示PCOS患者卵巢的窦状卵泡内颗粒细胞和COH周期的黄素化颗粒细胞均有AQP9的表达,染色定位于胞浆和胞膜.在COH周期,颗粒细胞AQP9 mRNA表达水平与卵泡液中E2、P和T均无显著性相关.结论:PCOS患者卵巢组织中窦状卵泡的颗粒细胞及在COH周期黄素化颗粒细胞均有AQP9表达,推测AQP9可能通过水转运介导卵泡发育和窦卵泡形成.在COH周期,PCOS的大卵泡AQP9的表达有高于小卵泡的趋势,可能与卵泡发育有关.在COH周期,颗粒细胞AQP9 mRNA表达水平与甾体激素的分泌无相关性.
关键词： 多囊卵巢综合征/病理学 不育 女(雌)性 受精 体外 胚胎移植 水孔蛋白类/生物合成 卵泡/细胞学 粒层细胞 性腺甾类激素 -
人绒毛膜促性腺激素对小鼠颌下腺颗粒曲管影响的体视学研究
目的从体视学的角度探讨人绒毛膜促性腺激素(HCG)对小鼠颌下腺颗粒曲管的内分泌调节机制,为内分泌免疫调节网络提供实验依据.方法用显微测微尺测出ICR雄性小鼠注射HCG或生理盐水后颌下腺颗粒曲管的各项体视学指标.结果给药组与对照组相比,颌下腺颗粒曲管的截面积、周长明显降低(P<0.05),比表面及面数密度明显升高(P<0.05),细胞的核质比、细胞核的截面积、周长明显升高(P<0.05),颌下腺颗粒曲管细胞的截面积、周长及胞质的截面积明显降低(P<0.01).结论 HCG可促进颌下腺颗粒曲管合成和分泌生物活性物质,它对颗粒曲管分泌功能的促进作用大于对合成功能的促进作用.
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人卵泡颗粒细胞的原代培养与鉴定
目的 建立和完善人卵泡颗粒细胞的体外原代培养和鉴定方法.方法 分离行辅助生殖助孕技术治疗的符合研究纳入标准的不孕患者的卵泡颗粒细胞,接种于DMEM培养基进行原代培养;以H-E染色和卵泡刺激素受体(FSHR)免疫组织化学染色对所培养的卵泡颗粒细胞进行鉴定.结果 分离培养的人卵泡颗粒细胞存活率>90%;FSHR免疫组织化学鉴定细胞纯度达到95%以上;体外培养的人卵泡颗粒细胞在培养第2～5 d时处于分裂高峰.结论 采用本研究所建立的方法可获得生长活性好、细胞纯度高及较稳定的人卵泡颗粒细胞,H-E染色和FSHR免疫组织化学染色可以简便快速地鉴定人卵泡颗粒细胞.
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冷冻保存对人始基卵泡中颗粒细胞的影响
目的:探讨冷冻保存对人始基卵泡中颗粒细胞的形态及存活率的影响.方法:程序冷冻法保存人卵巢组织,采用常规组织学检测冷冻前后卵泡中颗粒细胞形态,并采用胶原酶消化联合镜下机械分离卵巢组织中的始基卵泡,采用双荧光标记,检测冷冻前后人卵巢组织分离始基卵泡中颗粒细胞的存活比例.结果:形态学检测发现,冷冻前卵巢组织中颗粒细胞发生损伤的始基卵泡占12.4%,卵母细胞损伤20.6%;冷冻后两者的比例分别为23.3%与24.4%.荧光标记的冷冻前卵巢组织中颗粒细胞存活的始基卵泡占72.7%,＜50%颗粒细胞存活的卵泡仅占3.6%,卵母细胞存活率为85.5%;冷冻组中颗粒细胞存活的始基卵泡占79.5%,＜50%颗粒细胞存活的卵泡仅占2.5%,卵母细胞存活率达86.1%.结论:冷冻复温的过程主要破坏卵泡中的颗粒细胞,而对卵母细胞的损伤很小.
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子宫性索瘤样间质细胞肉瘤1例
患者,女,37岁,因月经量增多2月,不规则阴道流血20+天就诊.患者12天曾于当地医院行子宫肌瘤剥除术,术后病检报告:子宫后壁中分化粒层细胞侵犯,子宫肌瘤.于2002年9月13日再次入院就诊.体检:发育正常,营养中等,心肺(-).
