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hIGF-1工程细胞对糖尿病小鼠血糖的影响
目的:观察hIGF-1工程细胞移植对糖尿病模型小鼠的降血糖作用.方法:用高病毒滴度的病毒上清感染骨髓基质细胞,并植入糖尿病模型小鼠腹腔内,观察糖尿病模型小鼠血糖的变化.结果:稳定表达hIGF-1的骨髓基质细胞腹腔移植后,可见糖尿病小鼠的血糖明显下降(P＜0.05).结论:稳定表达hIGF-1的骨髓基质细胞对糖尿病动物模型有降糖作用,说明IGF-1基因可作为糖尿病基因治疗的候选基因.
关键词： hIGF-1 腺相关病毒载体(AAV) 骨髓基质细胞 糖尿病 -
hIGF-1腺相关病毒质粒的构建、包装和滴度测定
目的:构建pAAV/hIGF-1载体,并测定pAAV/hIGF-1病毒粒子包装盒病毒滴度.方法:将hIGF-1基因克隆入pAAV腺病毒相关病毒载体,以HEK293包装细胞包装病毒颗粒,HT1080细胞检测病毒滴度.结果:获得插入方向正确的hIGF-1腺相关病毒载体,HEK293细胞包装得到了1012滴度的病毒上清.结论:成功构建了hIGF-1腺相关病毒载体,并且获得了较高滴度包装病毒颗粒.
关键词： hIGF-1 腺相关病毒载体(AAV) 病毒滴度 -
hIGF-1基因转染促进退变椎间盘Ⅱ型胶原的表达
[目的]探讨人胰岛素样生长因子(human insulin-like growth factor-1,hIGF-1)基因在退变椎间盘中的表达及对椎间盘中Ⅱ型胶原表达的影响.[方法]参考文献[1]制备出腰椎间盘退变(intervertebral disk degeneration,IVDD)动物模型24只,随机分为携带hIGF-1基因重组腺病毒(Ad/CMV-hIGF-1)、hIGF-1生长因子及PBS组.L4、5、L5、6椎间盘中分别注射25 μl第2代Ad/CMV-hIGF-1 (8×108 PFU)、hIGF-1生长因子(100 μg/L)、PBS.注射后1、2、4、8周,Western blot检测hIGF-1蛋白表达;半定量RT-PCR检测Ⅱ型胶原mRNA的表达.[结果]hIGF-1蛋白带出现在7 540.00 u.Ad/CMV-hIGF-1组hIGF-1蛋白表达持续达4周以上,hIGF-1组表达持续约2周;PBS注射组无hIGF-1蛋白表达.Ⅱ型胶原电泳条带出现在200～300 bp;在注射后1～4周,Ad/CMV-hIGF-1组内Ⅱ型胶原mRNA相对表达量进行性增加,8周轻度下降,4个时期比较(F=12.18,P＜0.001);注射后1～8周,hIGF-1注射组、PBS注射组Ⅱ型胶原mRNA相对表达量进行性下降(F=27.38、21.56,P＜0.001).相同时间点3组比较,Ⅱ型胶原mRNA相对表达量Ad/CMV-hIGF-1组高,PBS组低(F=27.31～39.85,P＜0.001).[结论]hIGF-1基因在退变椎间盘中的表达能够促进合成Ⅱ型胶原.
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hIGF-1基因在退变椎间盘中的表达
[目的]探讨hIGF-1基因在退变椎间盘中的表达.[方法]参考文献[1～3]制备出椎间盘退变(intervertebral disk degeneration,IVDD)动物模型24只,随机分为Ad/CMV-hIGF-1、hIGF-1生长因子及PBS组,每组有新西兰大白兔8只.L4、5、L5、6椎间盘中分别注射第2代Ad/CMV-hIGF-1(8×108 PFU)、hIGF-1生长因子(100 μg/L)、PBS 25 μL.注射后1、2、4、8周,Western blot检测椎间盘中hIGF-1蛋白表达.[结果]hIGF-1蛋白带出现在7 539.96μ.Ad/CMV-hIGF-1、hIGF-1蛋白表达持续达4周以上,hIGF-1组表达持续约2周;PBS注射组无hIGF-1蛋白表达.[结论]hIGF-1基因能够在退变椎间盘中表达;hIGF-1基因转染表达的持续时间长于单纯hIGF-1生长因子直接注射.
