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不同受精方式对选择性囊胚培养结局的影响
目的:探讨不同受精方式对选择性囊胚培养结局的影响. 方法:回顾性分析2009年1月至2012年12月在我中心接受囊胚培养的IVF组1 153个周期和ICSI组205个周期的囊胚培养结局. 结果:IVF组和ICSI组分别有14 748和2 655枚胚胎进行序贯囊胚培养,两组均无因无囊胚可移植而取消周期.IVF组共形成7 871枚囊胚,ICSI组形成1 210枚囊胚;IVF组的优胚率、囊胚形成率和胚胎利用率均显著高于ICSI组(64.77％vs58.72％,53.37％vs45.57％,60.06％ vs 52.17％,P均＜0.05);但IVF组与ICSI组种植率(48.94％ vs51.43％)、临床妊娠率(49.03％vs52.02％)和流产率(11.69％vs15.56)均无显著差异(P均＞0.05). 结论:在同样的选择性囊胚培养纳入标准下,IVF相比于ICSI行囊胚培养的囊胚形成率和胚胎利用率更高,因无囊胚移植取消周期的风险相对更小.针对不同的受精方式可能需要制定相应的选择性囊胚培养纳入标准.
关键词： 囊胚培养 体外受精 卵细胞胞质内单精子注射 受精方式 -
卵裂期胚胎移植后剩余胚胎囊胚培养的研究
目的:探讨影响常规体外受精(in vitro fertilization,IVF)与卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)治疗周期中剩余胚胎体外培养囊胚形成潜力的相关因素,为单囊胚移植打下基础.方法:将IVF/ICSI治疗周期中第3天(D3)卵裂期胚胎移植和冷冻后剩余的优质/非优质胚胎行囊胚培养,观察囊胚形成率.比较患者的年龄、病因、受精方式、D3胚胎质量、卵裂球数和碎片量与囊胚形成率的关系,并比较囊胚形成情况与体外受精临床妊娠率的影响.结果:(1)70个治疗周期中303枚剩余胚胎进行囊胚培养,形成囊胚127枚(41.91％),其中优质囊胚56枚(44.09％);(2)不同年龄、病因、受精方式对囊胚形成率的影响差异均无统计学意义(均P＞0.05);(3)D3胚胎碎片＞25％、卵裂球数＜7个的胚胎囊胚形成率明显降低;(4)剩余胚胎有囊胚形成周期与无囊胚形成周期的临床妊娠率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:将移植、冷冻后剩余胚胎进行体外囊胚培养,可以筛选出具有发育潜能的胚胎,提高治疗周期胚胎的利用率.
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受精及胚胎早期卵裂阶段的形态学与染色体之间的关系
自第一例试管婴儿Brown诞生以来,体外受精与胚胎培养技术得到了飞速的发展,现在许多不孕症治疗中心采用序贯培养技术已经能将胚胎培养至囊胚阶段.无论是早期对4～8细胞的胚胎进行胚胎移植(Embryo transfer,ET),还是新的囊胚培养和辅助孵出(Assisted hatching,AH)后ET,人们主要是根据每个胚胎的形态学指标来判断其质量的优劣.这些形态学指标大致包括:原核的形成时间及形态、卵裂速度、卵裂球的形态数量、细胞碎片的多少、胞浆的性质及透明带的厚度等等.这种以形态学为标准的选择有很大的主观性,并且人们也无法了解其内部的染色体情况.
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分裂期胚胎移植后剩余胚胎行囊胚培养与冷冻并复苏后获足月分娩一例
在体外受精-胚胎移植周期中,分裂期胚胎移植后剩余达不到冷冻标准的胚胎,开展囊胚培养,如有囊胚形成则行囊胚冷冻的方法,可以大限度的节约胚胎,同时可评估胚胎继续发育能力.本中心自2005年开始对剩余胚胎进行囊胚培养与冷冻,并于2006年首次获得临床分娩,报道如下.
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激光辅助孵化对冻融囊胚移植妊娠结局的影响
目的：探讨激光打孔法辅助孵化对复苏周期中囊胚移植妊娠结局的影响。方法收集复苏周期中行囊胚移植患者的568个周期，其中352个周期于冻存囊胚复苏后，行激光打孔辅助孵化后移植（AH 组），216个复苏周期囊胚移植未行激光打孔辅助孵化（非 AH 组）；分析两组的生化妊娠率、临床妊娠率、种植率、流产率、继续妊娠率、多胎妊娠率及单卵双胎率。结果两组患者的年龄、不孕原因、排卵日内膜厚度、平均移植胚胎数组间差异无统计学意义。AH 组生化妊娠率、临床妊娠率、种植率、继续妊娠率显著高于非 AH组（P <0.05），流产率显著低于非 AH 组（P <0.05），多胎妊娠率及单卵双胎率略高于非 AH 组，但差异无统计学意义。结论复苏周期囊胚移植前采用激光打孔辅助孵化可以提高妊娠率，降低流产率。
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囊胚培养技术的改良及临床应用
将2014年9月～2015年7月在本机构生殖医学科接受体外授精胚胎术助孕、符合纳入标准的患者,随机分为实验组(组1,温度36.9℃)和对照组(组2,温度37.0℃)两组,两组的培养条件除培养温度不同以外,其余条件完全相同,通过观察囊胚形成率以及顶级囊胚形成率(3-6AA级)的差别来探索体外培养的佳温度,形成的囊胚按常规要求进行移植或冷冻保存;然后根据以上优化的培养条件,作为后续病人的唯一培养条件,进一步观察囊胚形成率和顶级囊胚形成率,并观察和总结后期的临床结局;组1共273个囊胚培养周期,有囊胚形成的周期数267个,囊胚培养成功率97.8％,以第3d符合进一步做囊胚培养的卵裂胚数为基数,囊胚形成率为74.7％,顶级囊胚比率27.3％;鲜囊胚移植临床妊娠率65.3％,胚胎植入率58.5％;解冻囊胚移周期临床妊娠率66.3％,胚胎着床率50.0％,目前尚无婴儿出生.组2共28 个周期,168个卵裂胚用于囊胚培养,囊胚形成率70.0％,其中顶级囊胚比率19％,顶级囊胚比率率明显低于组1.
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谷氨酰胺-丙氨酸二肽在不同培养基中应用效果研究
目的：探索不同浓度的丙氨酸-谷氨酰胺二肽在序贯培养基及一程式培养基中的培养效果和佳浓度。方法丙氨酸-谷氨酰胺二肽分别按0.7、0.85、1.0、1.15和1.3mmol/L配制序贯系列培养基的囊胚培养液和一程式培养基，将上述培养基分组分别用于小鼠受精卵的体外常规培养，100~104h后，观察其囊胚形成率和孵化率，并以商品化的GⅢ培养基作对照组。结果在序贯培养基中除1.3mmol/l组的囊胚形成率和孵化率显著降低以外，其余各组件均为显著性差异；在一程式培养基中，0.7、0.85和1.0mmol/L组的囊胚形成率明显高于其它各组，但0.7mmol/L组的孵出率显著高于其它各组。结论在体外培养基中，丙氨酸-谷氨酰胺二肽的浓度低于1.0mmol/L时可能更有利于体外培养中小鼠胚胎的发育。
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囊胚培养的相关因素分析
目的 探讨体外受精(IVF)和精子卵胞浆内注射技术(ICSI)治疗周期中体外培养囊胚形成的影响因素.方法 将卵裂期第3d(D3)冷冻后剩余胚胎进行体外延长培养至囊胚期,观察囊胚形成情况.结果共收集7438个冷冻后剩余胚胎,经序贯培养,形成1382个优质囊胚(18.58%).D3胚胎中6个细胞的优质囊胚形成率(10.34%)显著高于4-5个细胞的优质囊胚形成率(5.45%),差异有统计学意义(P=0.011);7-9个细胞的优质囊胚形成率(19.95%)显著高于6个细胞的优质囊胚形成率(10.34%),≥10个细胞的优质囊胚形成率(27.47%)显著高于7-9个细胞的优质囊胚形成率(19.95%),差异均有统计学意义(P<0.001).D2胚胎中4个细胞的优质囊胚形成率(25.40%)显著高于3个细胞、5个细胞的优质囊胚形成率(10.26%,15.41%),差异有统计学意义(P<0.001).碎片评级I- II 级D2、D3胚胎的囊胚形成率均显著高于III-IV级的胚胎,差异有统计学意义(P<0.001).结论 体外延长培养能有效筛选具有发育潜力的胚胎,优质囊胚形成与D2、D3胚胎的卵裂球数及碎片评级密切相关.
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囊胚培养在辅助生殖技术治疗周期中应用价值研究
目的：探究囊胚培养在辅助生殖技术治疗周期中的应用价值。方法选取我中心2015年6月至2016年5月常规 IVF/ ICSI - ET 周期 D3（第3天）胚胎进行回顾性分析，将 D3卵裂期胚胎培养至囊胚，比较不同评分和卵裂球数胚胎的囊胚形成情况，并对妊娠结局进行预测。结果与其他组相比，评分3分以上且 D3为6~9个细胞的胚胎的优质囊胚形成率高，达35.7％，差异显著（P ＜0.05）；无囊胚形成者临床妊娠率和胚胎种植率分别为15.2％、6.8％，有囊胚形成者为36.4％、41.9％，差异有统计学意义（P ＜0.05）。结论囊胚培养能够淘汰不良胚胎，筛选出具有发育潜力的优质胚胎，可间接预测妊娠结局，是选择胚胎质量的有效方式。
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新鲜周期和复苏周期囊胚培养及移植的临床结局分析
目的：比较新鲜周期和复苏周期囊胚培养及移植的临床结局，探讨囊胚移植的佳方案。方法：回顾分析2012年1月至2014年8月在郑州大学第三附属医院生殖中心行常规体外受精／卵胞质内单精子注射-胚胎移植（ IVF／ICSI-ET）患者的临床资料。根据培养方式分为A组（新鲜胚胎行囊胚培养后移植，58个周期）、B组（新鲜胚胎行囊胚培养冷冻复苏后移植，285个周期）和C组（冷冻胚胎复苏后行囊胚培养再移植，84个周期）。比较新鲜胚胎和冷冻胚胎复苏后的囊胚形成率及可利用囊胚形成率以及3组患者的囊胚种植率、生化妊娠率、临床妊娠率、多胎率和早期流产率等指标。结果：新鲜胚胎的囊胚形成率及可利用囊胚形成率均高于冷冻胚胎（χ2＝8．561和4．037，P＜0．05）；3组患者的生化妊娠率、临床妊娠率及早期流产率比较差异有统计学意义（χ2＝44．376、6．255和9．167，P＜0．05），B组患者的生化妊娠率及临床妊娠率均高于A组，早期流产率低于A组；3组间囊胚种植率和多胎率比较差异无统计学意义（χ2＝4．234、1．172，P＞0．05）。结论：新鲜胚胎较冷冻胚胎有较高的囊胚形成率，新鲜囊胚冷冻后择期复苏移植能提高患者的妊娠率，是目前佳的囊胚培养和移植方案。
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胚胎碎片对囊胚形成结局的影响
目的 探讨胚胎碎片率对囊胚培养结局的影响.方法 回顾性分析行D3优质胚胎移植、剩余胚胎行囊胚培养的7935个胚胎的相关信息,根据D3胚胎碎片率分为3组:碎片率≤5 %为A组,碎片率6 % ~20 %为B组,碎片率>20 %为C组;再根据卵裂期胚胎数将胚胎分为>8细胞、8细胞、7细胞、6细胞、5细胞、4细胞组,比较各亚组不同碎片率胚胎的囊胚形成结局.结果 A组、B组囊胚形成率、优质囊胚率均优于C组,且B组优于A组;在各个卵裂球细胞亚组中,A组与B组囊胚形成结局没有显著差异,除>8细胞组胚胎外,其余各亚组中,A、B组的囊胚形成率及优质囊胚率均显著高于C组;当碎片率<5 %时,>8细胞胚胎与8细胞胚胎的囊胚形成率及优质囊胚率均显著高于<8细胞数胚胎;当碎片率为6 % ~20 %时,>8细胞胚胎囊胚形成率显著高于<8细胞胚胎,优质囊胚率显著高于<6细胞胚胎,8细胞胚胎囊胚形成率及优质囊胚率均显著高于<7细胞胚胎;当碎片率>20 %时,>8细胞胚胎囊胚形成率显著高于<6细胞胚胎,优质囊胚率显著高于<7细胞胚胎,8细胞胚胎囊胚形成率及优质囊胚率均显著高于<7细胞胚胎.Logistic回归结果表明,碎片率、卵裂球细胞数均对囊胚培养结局有显著影响.结论 碎片率、卵裂球细胞数与囊胚培养的结局密切相关.在影响囊胚形成的作用上,当碎片率<20 %时,卵裂球细胞数效应相对较大,而当碎片率>20 %时,碎片的影响效应可能更大.
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姐妹胚胎单囊胚结局的影响因素分析
目的 探讨姐妹胚胎继续单囊胚培养后影响其囊胚形成的相关因素.方法 回顾性分析行D3优质胚胎移植、 剩余姐妹胚胎单囊胚培养的7662个胚胎的相关信息,根据D3胚胎质量分为优质胚胎组及非优质胚胎组;根据形成囊胚的情况分为无囊胚形成组及囊胚形成组,其中囊胚形成组又按时间分为D5组和D6组,按囊胚形成的质量分为优质囊胚组和非优质囊胚组.结果 D3优质胚胎组的囊胚形成率、 优质囊胚形成率、D5/D6囊胚形成率、D5/D6优质囊胚形成率均显著高于非优质胚胎组;0PN、2PN胚胎的囊胚形成率、 优质囊胚形成率均显著高于1PN胚胎;囊胚形成组与无囊胚形成组间D3优质胚胎、1PN、2PN胚胎比例有显著差异;优质囊胚形成组与非优质囊胚形成组之间0PN、1PN、D3优质胚胎比例有显著差异;D5与D6囊胚形成组组间0PN、1PN、2PN、D3优质胚胎比例均存在显著差异.Logistic回归结果表明,原核数、 胚胎质量均对单囊胚培养结局有显著影响.结论 原核数、D3胚胎质量与姐妹胚胎单囊胚培养的结局密切相关.
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人类发育欠佳胚胎在卵裂期及囊胚期移植后的临床结局比较
目的 比较分析人类体外受精后的发育欠佳胚胎,行卵裂期移植或囊胚培养后,哪一种策略更有利于改善患者的临床结局.方法 患者入选标准:体外受精第3天(d3)所有胚胎均为发育欠佳胚胎(胚胎卵裂球数＜6-细胞,或胚胎碎片为10％～20％).将患者随机分为两组:卵裂期移植组(n =114)及囊胚培养组(n=106).比较两组间的临床妊娠率、继续妊娠率及植入率.结果 卵裂期移植组与囊胚培养组的移植周期临床妊娠率(38.6％ vs 24.5％)、继续妊娠率(35.1％vs 24.5％)及植入率(24.5％ vs 17.9％)差异均无统计学意义.由于囊胚培养组具有较高的周期取消率(53.8％),卵裂期移植组的取卵周期临床妊娠率显著高于囊胚培养组(38.6％vs 11.3％).结论 人类发育欠佳胚胎在卵裂期进行移植更加适合.
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玻璃化对复苏囊胚移植单胎分娩结局的影响
[目的]比较卵裂期胚胎复苏后囊胚培养移植与复苏嚢胚移植的单胎分娩结局,探讨佳冻存方案.[方法]回顾性分析2014年1月至2016年10月在本中心行复苏周期移植(FET)并单胎分娩的患者,囊胚复苏组1037个周期,卵裂胚复苏囊胚培养组690个周期.分析两组的新生儿分娩结局,其中包括平均孕周,平均体质量,男婴出生率,早产率,极早产率,低体质量率,极低体质量率,先天异常率.[结果]平均胎龄,新生儿平均体质量,活产、健康抱婴以及死胎的比例两组没有统计学差异(P>0.05).出生性别比差异没有统计学意义;早产率,极早产率,低出生体质量率,极低出生体质量率以及先天异常率两组没有统计学差异(P>0.05);校正后,出生男婴率(AOR 1.07,95% CI 0.86~1.34),早产率(AOR 0.7,95% CI 0.49~1.01),极早产率(AOR 1.47,95% CI 0.55~3.96),低出生体质量率(AOR 1.38,95% CI 0.86~2.22),极低出生体质量率(AOR 0.76,95% CI 0.20~2.83)以及先天异常率(AOR 1.58,95% CI 0.66~3.76)两组仍然没有统计学差异(P>0.05).[结论]新鲜囊胚冷冻后择期复苏移植能获得较好的新生儿结局,是目前较佳的囊胚培养和移植方案.
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辅助生殖技术中的几个热点问题
近年来辅助生殖技术(assisted reproductive technologies,ART)领域的学术交流日趋活跃,技术水平不断提高,其主要标志是:①临床妊娠率大幅攀升,一些好的生殖医学中心妊娠率已稳定在50%以上;②一些新技术不断完善,如囊胚培养,辅助孵化,玻璃化冷冻,未成熟卵培养,某些疾病的移植前诊断等;③培养系统的改进等.本文拟就当前人们关心的几个热点问题作一简单回顾.
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选择性囊胚培养和移植的临床应用和效果分析
目的：探讨选择性囊胚培养和移植的临床效果及实施单囊胚移植的可行性。方法：对体外受精/卵胞浆内单精子显微注射（IVF / ICSI）后行囊胚培养并移植的207个周期与移植卵裂期胚胎的周期比较，同时对移植单囊胚和双囊胚、有无优胚及患者年龄在优质胚胎率、囊胚形成率、优质囊胚率、囊胚种植率、临床妊娠率和多胎率等的差异。结果：选择性囊胚期比卵裂期移植获得更高的临床妊娠率和种植率（55．6％、47．6％ vs 45．2％、31．1％、P ＜0．05）；移植单囊胚可获得与双囊胚相似的临床妊娠率（57．4％ vs 52．9％，P ＞0．05），但囊胚种植率和多胎妊娠率差异显著（57．4％、4．3％ vs 40．6％、55．6％、P ＜0．05），有优质囊胚和无优质囊胚的种植率和临床妊娠率相似，无统计学差异，多胎率随着移植数增多而增高。年龄越大，囊胚的种植率和妊娠率降低，流产率增高。结论：对预后好的患者行单囊胚移植不降低临床妊娠率，是减少多胎率的有效方法。患者的年龄、卵裂期胚胎的质量等可影响囊胚形成及其质量。
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低级别胚胎囊胚培养及临床结局的研究
目的：探讨低级别胚胎（Ⅲ、Ⅳ级胚胎）的发育潜能、移植新鲜囊胚及冻融囊胚的临床结局，为低级别胚胎的培养及移植奠定基础。方法：收集本助孕中心656个体外受精－胚胎移植（IVF／ICSI-ET）治疗周期中受精后第3天（D3）移植、冷冻后剩余的3026枚低级别胚胎继续培养至 D5／D6囊胚的形成情况及临床结局。若患者下一周期进行囊胚解冻移植，探讨冻融囊胚与冻融卵裂胚的临床结局。结果：D3非优质胚胎的囊胚率为35．06％。有囊胚形成组的临床妊娠率显著高于无囊胚形成组（52．62％ vs．35．86％，P ＜0．05）；冻融囊胚组的临床妊娠率也显著高于卵裂胚解冻后移植胚胎的临床妊娠率（56．27％ vs．38．91％，P ＜0．05），流产率差异无统计学意义。结论：囊胚培养可筛选出低级别胚胎中具发育潜能的胚胎，移植冻融囊胚能提高种植率和临床妊娠率，提高患者胚胎的利用率。
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IVF/ICSI周期中≥3PN胚胎用于囊胚培养方案优化的探讨
目的 探讨单个囊胚培养滴中培养的胚胎数目和囊胚培养滴体积对囊胚形成的影响.方法 选择助孕治疗过程中细胞数≥6、碎片≤30％、原核数≥3的多原核(≥3PN)异常受精胚胎进行囊胚培养,将授精第3日3PN胚胎随机分为1、2、3、4个的组合分别置于体积为30μl的单个囊胚培养滴中,或将授精第3日3PN胚胎随机置于体积为10、20、30、40、50μl的囊胚培养滴中培养,观察囊胚形成情况并进行比较.结果 不同胚胎数目组间的3期以上囊胚或早期以上囊胚的形成率比较差异均无统计学意义(P均>0.05).不同囊胚培养滴体积组间的3期以上囊胚和早期以上囊胚形成率比较差异亦无统计学意义(P均>0.05).结论 单个囊胚培养滴中培养的胚胎数目和培养滴体积对囊胚形成无影响.
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健康宣教在选择性囊胚培养-单囊胚移植中应用的效果观察
目的：探讨健康宣教在选择性囊胚培养-单囊胚移植中的应用效果。方法对行体外受精胚胎移植和卵胞浆内单精子注射助孕的1412对不孕夫妇进行健康宣教，观察宣教后患者对选择性囊胚培养-单囊胚移植的接受情况及累积临床妊娠结局。结果宣教后，有1085例患者接受单囊胚移植（76．84％），拒绝接受单囊胚移植327例（23．16％）。接受组与拒绝组的累积妊娠率分别为75．08％、80．47％，两组比较差异无统计学意义（P ＞0．05）；接受组累积多胎妊娠率为2．62％，明显低于拒绝组的37．66％（P ＜0．01）。结论健康宣教有助于不孕症患者选择接受单囊胚移植，从而降低多胎妊娠率。
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冻融周期囊胚移植的临床价值
目的：探讨冻融囊胚移植、冻融卵裂期胚胎复苏后行囊胚移植的临床价值。方法回顾性分析2012年9月至2013年8月在该院生殖医学中心接受冻融胚胎移植治疗患者共518个周期的临床资料，按移植冻融胚胎类型分为3组。A组：冻融囊胚移植，共129个周期；B组：卵裂期胚胎复苏后行囊胚培养后移植，共123个周期；C组（对照）：冻融卵裂胚移植，共266个周期。比较各组的临床结局及 A、B两组间新鲜周期胚胎和冻融周期的囊胚形成率和取消率。结果 A、B组的生化妊娠率、临床妊娠率和胚胎种植率（70．5％、61．2％、42．3％；67．5％、58．2％、40．2％）显著高于 C组（53．0％、42．5％、23．1％）（P＜0．05）；3组间流产率、异位妊娠率、多胎妊娠率差异无统计学意义（P＞0．05）。新鲜周期第3天优质胚胎与冻融胚胎复苏后的囊胚形成率（62．5％vs．57．7％）差异无统计学意义（P＞0．05），均显著高于新鲜周期第3天非优质胚胎的囊胚形成率（20．3％）（P＜0．05）。结论冻融周期行囊胚移植可以获得较满意的临床结局；冻融卵裂期胚胎行囊胚培养后可获得较高的囊胚形成率和临床结局。
