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RhoE基因与肿瘤
RhoE又称为Rnd3.是Foster等[1]于1996年采用酵母双杂交方法鉴定并命名的,是Rho家族的主要成员之一.近来有研究揭示RhoE在多种肿瘤细胞中表达失调,参与调节肿瘤细胞形态及迁移能力,与肿瘤细胞的生长、增殖、转移及耐药等多种生物学行为密切相关.
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Rnd3通过对p65的泛素化调节诱导胶质瘤细胞凋亡
目的 探讨Rnd3在胶质瘤细胞凋亡中的作用及机制.方法 通过Myc-Rnd3真核表达质粒转染,以Myc真核表达质粒转染作为对照,调控胶质瘤细胞株U251中Rnd3的表达;采用流式细胞术检测转染后U251细胞凋亡率;用Western blot技术检测细胞内Rnd3、p65、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)以及裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)的表达;以Flag真核表达质粒转染作为对照,通过Flag-p65真核表达质粒转染恢复p65表达后,用Western blot技术检测其下游bcl-2以及cleaved-Caspase-3蛋白的表达;Myc-Rnd3转染后,用MG-132抑制蛋白泛素化,检测细胞内p65蛋白表达.结果 经真核表达质粒转染后,Myc-Rnd3组细胞Rnd3蛋白表达量较Myc组显著提高(P＜0.05);Myc-Rnd3组细胞凋亡由U251-Myc组7.28％(5.36±0.1、1.92±0.12)增加至U251-Myc-Rnd3组的19.93％(13.51 ±0.32、6.42 ±0.21),细胞凋亡率明显高于Myc组,差异有统计学意义(P＜0.05);与U251-Myc组比较,U25 1-Myc-Rnd3组p65蛋白表达量降低,高表达的Rnd3使p65表达下调,进而引起bcl-2下调和cleaved-Caspase-3上调,差异有统计学意义(P＜0.05);逆转p65蛋白功能后(p65+,Rnd3-)组较(p65-,Rnd3-)组p65表达量升高(P＜0.05),bcl-2表达量升高(P＜0.05),cleaved-Caspase-3表达量降低(P＜0.05);(p65+,Rnd3+)组较(p65+,Rnd3-)组p65表达量差异无统计学意义;(p65-,Rnd3+)组较(p65-,Rnd3-)Rnd3表达量升高(P＜0.05),p65表达量降低(P＜0.05),bcl-2表达量降低(P＜0.05),cleaved-Caspase-3表达量升高(P ＜0.05);MG-132抑制细胞内蛋白泛素化途径结果显示,随着Rnd3蛋白表达量升高,p65蛋白表达量依次降低;而在MG-132处理组,随着Rnd3蛋白表达量升高,p65蛋白表达量差异无统计学意义.结论 Rnd3可能通过促进p65泛素化诱导U251胶质瘤细胞凋亡.
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RND3对PC12细胞凋亡的作用及其机制研究
目的 探讨RND3对PC12细胞凋亡的作用及机制.方法 通过质粒转染PC12细胞建立RND3在PC12细胞中高表达模型,采用Western blot检测RND3高表达组及对照组RND3蛋白、caspase-3活化蛋白及P65蛋白表达水平.采用荧光定量PCR检测RND3基因的表达水平.应用流式细胞计术(FCM)检测各组细胞凋亡率.结果 RND3高表达组的PC12 FCM提示细胞凋亡率增高,western blot显示caspase-3活化蛋白表达水平增高,P65蛋白表达水平降低.结论 RND3蛋白促进PC12细胞凋亡,并可能与NF-κB信号通路有关.
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miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控RND3促进肝癌细胞增殖
目的 检测MicroRNA-128a(miR-128a)在肝细胞癌中的表达情况并探讨其在肝癌细胞中的生物学功能及机制.方法 收集19例肝细胞癌及对应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-128a在肝细胞癌和对应癌旁组织及肝癌细胞株中的表达;应用miR-128amimics或inhibitor转染人肝癌细胞,MTT检测转染后细胞增殖活力变化;软件预测miR-128a的潜在靶点RND3,并用双荧光素酶报告实验证实miR-128a与RND3 3'UTR结合,qRT-PCR和Western blot检测miR-128a潜在靶点RND3的表达变化;Western blot检测细胞周期蛋白变化.结果 在肝细胞癌组织中miR-128a的表达显著高于对应的癌旁组织(P＜0.05);miR-128a促进肝癌细胞增殖(P＜0.05);在肝癌细胞中miR-128a通过与RND3 3'URT结合下调RND3 mRNA和蛋白的表达(P＜0.05);抑制miR-128a的表达可以导致cyclin B1、cyclin D1和CDK4表达下调.结论 miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控RND3促进肝癌细胞增殖.
关键词： MicroRNA-128a Rnd3 肝细胞癌 细胞增殖
