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MDCK、Hep-2和Vero混合细胞体外培养条件的优化
目的 优化MDCK、Hep-2和Vero混合细胞(下文简称MHV-mix细胞)体外共培养的培养条件.方法 在传统培养方法的基础上改进一项或多项,如细胞消化液、培养液及血清含量、气体和酸碱度的变化等,培养MHV-mix细胞,通过观察细胞生长状态,并用台盼蓝染色细胞,通过台盼蓝拒染率计算细胞存活率并绘制细胞生长曲线,从而对各种培养条件的优劣做出综合比较.结果 改进多项培养条件后细胞增殖更快、生长状态更好,细胞存活率从85％升为98％.结论 改进的实验条件更适合MHV-mix细胞的培养,可作为这3种细胞体外共培养的条件.
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刚地弓形虫对HUVEC、Vero和J774A.1、THP-1侵入的比较研究
目的探讨刚地弓形虫对不同类型传代细胞的侵入能力和致凋亡作用及其差异.方法实验中采用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、非洲绿猴肾成纤维细胞(Vero)、小鼠单核巨噬样细胞(J774A.1)和人单核细胞系(THP-1)细胞株.采用透射电镜和吉姆萨染色法,观察刚地弓形虫RH株侵入以上细胞的能力以及细胞骨架抑制剂秋水仙素、细胞松弛素D对其影响.用流式细胞术检测弓形虫引起的细胞凋亡.结果弓形虫RH株能侵入以上4种细胞,在胞内均有纳虫泡形成.其侵入率以J774A.1和THP-1略高.细胞骨架抑制剂细胞松弛素D可以明显降低速殖子对THP-1和J774A.1细胞的侵入率,对速殖子侵入HUVEC和Vero细胞的能力影响较小.弓形虫侵入HUVEC和J774A.1细胞均可不同程度地引起细胞凋亡和坏死,但前者以凋亡为主,后者以坏死为主.结论弓形虫可能通过不同的机制侵入非吞噬性细胞和吞噬性细胞.
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Ei sh单纯疱疹病毒1型ICP34.5在Vero细胞的表达及对Bax/Bcl-2的影响
目的 构建单纯疱疹病毒1型(HSV-1)真核表达载体pmR-mcherry-ICP34.5,验证ICP34.5对宿主细胞Bax、Bcl-2 mRNA相对表达量及对Bax/Bcl-2的影响.方法 以提取HSV-1病毒DNA为模版,PCR扩增HSV-1 ICP34.5序列,双酶切连接至pmR-mcherry真核表达载体上,并对重组真核表达载体进行验证,然后重组载体瞬时转染Vero细胞,mRNA水平表达用逆转录PCR方法检测,融合蛋白的表达的检测用荧光显微镜,MTT检测对Vero的细胞活性,喜树碱诱导凋亡后,实时定量PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA在细胞中的相对表达量.结果 转染后RT-PCR验证有目的基因的转录,荧光显微镜观察到融合蛋白在转染的Vero细胞中表达.重组质粒可以抵消空质粒对细胞的损伤作用,转染重组质粒的Vero细胞和正常细胞的中Bax mRNA表达量和Bcl-2 mRNA表达量相差不大,但Bax/Bcl-2得比值明显低于转染pmR-mcherry空质粒的Vero细胞和正常加药的Vero细胞.结论 pmR-mcherry-ICP34.5真核表达载体能在Vero细胞中高效表达,并能减弱空质粒转染对细胞活性作用,ICP34.5能使Vero细胞中Bax/Bcl-2稳定性增强,使细胞抗凋亡.
