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丁内酯-I对小鼠卵母细胞体外成熟、染色质构型和超微结构的影响
目的观察 100 μmol/L丁内酯-I(BL-I)对小鼠卵母细胞的体外成熟、染色质构型及超微结构的影响. 方法实验组小鼠未成熟卵用"两步法"培养,先用BL-I培养液培养6 h,然后再用成熟培养液培养;对照组直接用成熟培养液培养,观察其生发泡破裂(GVBD)和第一极体形成的过程.将BL-I培养液培养6 h前后的卵母细胞分别固定行Hochest33342染色及制作电子显微镜标本,比较染色质构型及超微结构的变化. 结果 BL-I培养液培养小鼠未成熟卵6 h,实验组卵母细胞GVBD的发生率(21.5%)明显低于对照组(82.3%)(P=0.001).BL-I的抑制作用消除后,实验组卵母细胞GVBD发生率(96.9%)和成熟率(86.1%)与对照组(分别为97.3%和83.3%)无差异,但GVBD和成熟过程明显加速.BL-I抑制卵母细胞核成熟6 h,部分卵母细胞(32.8%)的染色质凝集,染色质围绕核仁型(SN)和非围绕核仁型(NSN)卵母细胞的比例(50.8%和16.4%)较培养前(69.2%和30.8%)明显下降;卵丘颗粒细胞的伸展未受影响,卵母细胞胞质的超微结构未出现明显异常,皮质颗粒和线粒体的形态及分布与对照组相似. 结论 BL-I能可逆性抑制体外培养的小鼠卵母细胞的核成熟,抑制作用消除后,卵母细胞成熟能力不受影响,但GVBD和第一极体的形成过程明显加速;在BL-I抑制卵母细胞核成熟的过程中,染色质构型发生变化,部分NSN型转化为发育能力更高的SN型,而胞质的超微结构未出现明显异常,有待进一步研究.
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香烟烟雾对小鼠卵母细胞染色质构型、DNA甲基化及相关基因表达的影响
目的 探讨香烟烟雾暴露对小鼠卵母细胞染色质构型、全基因组DNA甲基化及相关基因表达的影响.方法 将清洁级健康ICR雌鼠分成3组(对照组和香烟烟雾低剂量组、高剂量组),分别置于点燃0、1、2支香烟的染毒柜(容积18L)中,每天2次,每次1h,共4周.利用Hoechst 33342对细胞核染色,观察卵母细胞质量及染色质构型;间接免疫荧光法分析卵母细胞全基因组DNA甲基化模式,实时荧光定量PCR测定卵母细胞DNA甲基转移酶(DNA methyhransferases,DNMT)1、DNMT3a及DNMT3b基因的mRNA表达水平.结果 随着烟雾浓度的升高,去透明带卵母细胞直径显著减小(P＜0.05),核仁未包围(non surrounded nucleolus,NSN)染色质构型比例明显升高(P＜0.05).高剂量组卵母细胞DNA甲基化水平显著下降(P＜0.05).随烟雾浓度升高DNMT1表达量降低,DNMT3b在高剂量组中表达水平显著降低(P＜0.05).结论 香烟烟雾暴露可能通过改变卵母细胞染色质构型,降低DNA甲基转移酶的表达,使DNA甲基化水平下降,从而降低卵母细胞质量.
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肿瘤表遗传学(六)
第六讲 染色质重塑真核生物染色质是一切遗传学过程的物质基础,是多层次、高度可塑性的核蛋白多聚体.染色质构型局部和整体的动态改变,是基因功能调控的关键因素.
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豚鼠未成熟卵母细胞的形态与体外成熟能力 生发泡染色质构型的相关性研究
本文研究了豚鼠未成熟卵母细胞的形态与体外成熟能力、染色质构型的相关性,结果表明,A形态卵母细胞SN-2构型的比例高于NSN和SN-1构型.B形态卵母细胞SN-1构型的比例高于SN-2和NSN构型,A形态卵母细胞体外成熟率明显优于B形态的卵母细胞.综上可知,卵母细胞的形态可以反映其成熟能力和染色质构型,为人类疾病模型动物以及辅助生殖技术筛选优质卵母细胞提供参考.
