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HLA分型中罕见基因的分析报告
PCR-SSP技术是HLA分型常规采用的方法之一,具有简便、快捷等特点.笔者在使用PCR-SSP HLA基因分型试剂盒做HLA常规分型中遇到二份志愿供髓者的DNA样品,与GT公司的PCR-SSP HLA分型试剂产生特殊的反应格局.其中一份(以下称SZ1)在HLA-A座位上,与试剂盒鉴定HLA-A的A2 、A11,66等位基因的PCR引物呈阳性反应,而与鉴定HLA-A·11以及HLA-A·66基因的引物均呈阴性反应,这个特殊的反应格局提示该DNA样品可能是A·1103/08/14或存在与A·11基因相关的碱基突变,经DNA测序,结果是比较罕见的A·1103基因.另一份(以下称SZ2)在HLA-B座位上,与试剂盒鉴定HLA-B的B54L的PCR引物呈阳性反应,而与鉴定HLA-B·54及HLA-B·55、HLA-B·56基因的引物均呈阴性反应,提示可能是B·5610,经PCR-SSP进一步确证是B·5610基因.
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造血干细胞移植志愿捐献者罕见基因人类白细胞抗原C*08：99的测序分析
背景：随着测序技术被广泛应用，器官移植配型的高分辨确认工作逐渐深入开展，人类白细胞抗原新等位基因不断涌现，但由于发现较晚，基因频率还不能准确计算，相关报道甚少，这些基因常被忽视，有时单纯根据基因频率判断分型结果，易造成分型结果的误判。目的：检测与分析1例造血干细胞移植志愿捐献者携带的罕见等位基因人类白细胞抗原C*08：99。方法：采用快速DNA提取试剂盒从全血样本中提取基因组DNA，经人类白细胞抗原C基因商品化测序分型试剂盒扩增，纯化后的扩增产物作为模板由试剂盒配套的第2，3和4外显子常规检测区正反向测序引物及自行研制的非常规检测区第5外显子正反向、第6外显子正向和第7外显子反向测序，经乙醇/醋酸钠/EDTA纯化的测序反应产物于ABI PrismTM 3730测序仪电泳检测，相关的Assign 3.6+分析软件予以人类白细胞抗原高分辨水平基因分型。结果与结论：①将电泳后的数据导入Assign-SBT 3.6+分析软件，得出的分型结果为C*07：04，08：99。②结果证实，临床移植配型人类白细胞抗原C基因分型增加第5，6，7外显子区域外的多态性检测可提高分型结果的准确性，对临床组织配型工作具有重要意义。
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SSOP HD试剂HLA高分辨分型结果不确定的原因分析
目的 使用SBT法对SSOP HD试剂分型结果不确定的22份样本进行检测,分析可能的原因.方法 对血液样本抽提DNA,按照SSOP HD试剂进行分型检测;针对结果不确定的样本采用SBT法复检,根据SBT法的测序结果分析22份样本SSOP结果不确定的可能原因.结果 2 000份样本经SSOP HD试剂检测后,结果不确定样本共有22份,A位点有6份,B位点有12份,DRB1位点有4份;SBT法检测均为明确的高分辨结果;分析原因可能为磁珠的假阳性或假阴性反应影响软件结果判读;或HLA基因型为罕见型;或试剂的局限性导致两种基因型不能区分.结论 SSOP HD可完成大批量样本的HLA高分辨检测工作;对罕见基因型和磁珠假性反应调整后的结果,应结合SBT法进行核实,保证HLA基因高分辨分型结果的准确性.
