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他克莫司对高糖诱导人肾小管上皮细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制研究

柯本；陈艳霞；吴险峰；黄翀；秦晓华；房向东；涂卫平
关键词： 糖尿病肾病 肾小管上皮细胞 他罗利姆 NF-κB

摘要： 目的：探讨他克莫司（FK506）对高糖诱导人肾小管上皮细胞（ HK-2）增殖、凋亡及其表达相关炎性因子的影响。方法于2014年10月—2015年5月，以人HK-2为研究对象，分为空白对照组、高糖诱导组（30 mmol/ L 高糖）、甘露醇组（24.5 mmol/ L 甘露醇）、20μmol/ L FK506对照组、不同浓度 FK506干预组（30 mmol/ L 高糖+1、5、10、20μmol/ L FK506）及核因子（NF）-κB 信号通路抑制剂组（30μmol/ L Bay11-7082+30 mmol/ L 高糖），各组均培养24 h。应用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组HK-2 NF-κB mRNA 的表达；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测白介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达；CCK-8法测定细胞增殖；流式细胞技术检测细胞凋亡。结果各组NF-κB mRNA 表达水平比较，差异有统计学意义（P <0.001）；其中高糖诱导组NF-κB mRNA 表达水平高于空白对照组；不同浓度 FK506干预组NF-κB mRNA 表达水平低于高糖诱导组，且呈浓度依赖性；NF-κB信号通路抑制剂组NF-κB mRNA 表达水平低于空白对照组、高糖诱导组及1、5、10μmol/ L FK506干预组（P <0.05）。各组IL-6、TNF-α表达水平比较，差异均有统计学意义（P <0.001）；其中高糖诱导组IL-6、TNF-α表达水平高于空白对照组；不同浓度 FK506干预组IL-6、TNF-α表达水平高于空白对照组，低于高糖诱导组，且呈浓度依赖性；NF-κB信号通路抑制剂组IL-6、TNF-α表达水平高于空白对照组，低于高糖诱导组和1、5、10μmol/ L FK506干预组（ P <0.05）。处理方法与时间对HK-2增殖存在交互作用（F交互=16.315，P交互<0.001）；处理方法对HK-2增殖主效应显著（F组间=24.618，P组间<0.001）；时间对HK-2增殖主效应显著（F时间=16.315，P时间<0.001）。各组24 h 凋亡率比较，差异有统计学意义（P <0.001）；其中高糖诱导组24 h 凋亡率高于空白对照组；不同浓度 FK506干预组和NF-κB信号通路抑制剂组24 h 凋亡率低于高糖诱导组（P <0.05）。结论 FK506对正常人HK-2表现为毒性作用，而对高糖环境下的HK-2则表现为保护作用。高糖可通过NF-κB信号通路介导肾脏炎症，而 FK506缓解糖尿病肾病进展的机制可能与NF-κB信号通路有关。

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