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MicroRNA-486和TGF-β1对人主动脉瓣膜钙化的影响及其机制研究

蒋伟坚;方明;苏锦文;王温慧;王雪君;李新明

摘要: 目的 研究microRNA-486(miRNA-486)对人主动脉瓣膜间质细胞(VICs)钙化的影响及作用机制.方法 体外培养VICs,经成骨诱导后用双荧光素报告基因检测miRNA-486靶基因.转染miR-486 mimic、miR-486 Inhibitors后,将细胞分为miR-486 mimic组、miR-486 mimic NC组、miR-486 Inhibitors组、miR-486 Inhibitors NC组.采用茜红素染色、ALP试验分析各组钙化程度,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫荧光试验检测miR-486靶基因及成骨相关因子mRNA和蛋白的表达水平.结果 双荧光素报告基因检测和Western blot检测结果显示,转录生长因子-β1(TGF-β1)为潜在靶基因.茜红素染色、ALP试验结果显示,miR-486 mimic组钙化程度高于miR-486 Inhibitors组.qRT-PCR、免疫荧光试验结果表明,miR-486 mimic组TGF-β1、SMAD3 mRNA和蛋白表达水平较低(P<0.05);miR-486 mimic组RUNX2、骨钙素mRNA表达水平较miR-486 Inhibitors组高(P<0.05).结论 miR-486可通过下调TGF-β1的表达,促进RUNX2、骨钙素的表达和活性,诱导间质细胞向成骨细胞分化.

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