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糖尿病大鼠肾组织TGF-β1和CTGF的表达及来氟米特的干预作用
目的 研究糖尿病肾损伤大鼠模型TGF-β1、CTGF的表达及来氟米特的干预作用,进一步探讨来氟米特对糖尿病大鼠的保护作用及可能机制.方法 36只健康雄性Wistar大鼠随机分为3组:①对照组;②模型组;③来氟米特干预组.摘除右肾后,模型组与来氟米特组分别以链脲佐菌素(STZ):40mg/kg腹腔注射,对照组腹腔注射等量柠檬酸缓冲液.来氟米特组在成模后以5mg/kg每日灌胃.于8周、12周末测24h尿量及24h尿蛋白定量、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);HE、PAS染色光镜观察肾组织病理改变,免疫组化法检测肾组织TGF-β1、CTGF蛋白的表达.结果 免疫组化结果显示:模型组大鼠肾组织TGF-β1、CTGF的表达明显增加,而经来氟米特治疗后表达显著减少,与同期模型组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 来氟米特对糖尿病大鼠具有一定肾脏保护作用及抗肾小球纤维化的作用,其作用机制可能是通过下调TGF-β1、CTGF的表达而实现的.
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周期性张力对骨髓间充质干细胞分化的血管平滑肌细胞的表型调节
目的 探讨周期性张力对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化的血管平滑肌细胞(VSMCs)的表型的调节机制.方法 原代全骨髓法培养大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定细胞.作成脂、成骨、成平滑肌细胞方向诱导,验证BMSCs的多向分化潜能.将细胞分为4组:A组用含10 μg/L转化生长因子-β1(TGF-β1)的完全培养基培养,B组用幅度10％、频率1 Hz周期性张力诱导,C组采用TGF-β1+周期性张力联合诱导,D组用含10％胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基培养作对照.3d后观察诱导后的细胞形态,并行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肌动蛋白(α-actin)、平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)、钙调节蛋白1(calponin1)、钙调节蛋白3(calponin3)的mRNA表达水平,Western blot观察细胞内α-actin、SM-MHC、calponin1、calponin3蛋白表达水平.结果 经流式细胞术鉴定,所培养细胞为BMSCs.诱导3d后,A、B、C3组的VSMC标志物均较D组明显升高,以SM-MHC和calponin3增加为主.A组(0.919 2±0.028 1)较B组(0.823 6±0.024 6)的SM-MHC蛋白表达水平高,但低于C组(1.043 1±0.090 7),其差异均有统计学意义(P＜0.05).C组中calponin3 mRNA表达量比蛋白表达量变化更明显,而calponin1蛋白表达量和mRNA表达量同步增高.结论 周期性张力能够诱导BMSCs分化为VSMCs,对分化的VSMCs的表型调节还需要细胞因子的参与.
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MicroRNA-486和TGF-β1对人主动脉瓣膜钙化的影响及其机制研究
目的 研究microRNA-486(miRNA-486)对人主动脉瓣膜间质细胞(VICs)钙化的影响及作用机制.方法 体外培养VICs,经成骨诱导后用双荧光素报告基因检测miRNA-486靶基因.转染miR-486 mimic、miR-486 Inhibitors后,将细胞分为miR-486 mimic组、miR-486 mimic NC组、miR-486 Inhibitors组、miR-486 Inhibitors NC组.采用茜红素染色、ALP试验分析各组钙化程度,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫荧光试验检测miR-486靶基因及成骨相关因子mRNA和蛋白的表达水平.结果 双荧光素报告基因检测和Western blot检测结果显示,转录生长因子-β1(TGF-β1)为潜在靶基因.茜红素染色、ALP试验结果显示,miR-486 mimic组钙化程度高于miR-486 Inhibitors组.qRT-PCR、免疫荧光试验结果表明,miR-486 mimic组TGF-β1、SMAD3 mRNA和蛋白表达水平较低(P<0.05);miR-486 mimic组RUNX2、骨钙素mRNA表达水平较miR-486 Inhibitors组高(P<0.05).结论 miR-486可通过下调TGF-β1的表达,促进RUNX2、骨钙素的表达和活性,诱导间质细胞向成骨细胞分化.
