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原肌球蛋白-4抗体靶向标记合成型血管平滑肌细胞MR体外成像的实验研究

尚松安；马占龙；陈相汛；陈宇辰；安艳丽；滕皋军

关键词：肌平滑血管磁共振成像细胞

摘要： 目的分离、培养并鉴定合成型血管平滑肌细胞(VSMC),检测靶向标记原肌球蛋白-4(TPM-4),并采用免疫分子成像技术构建TPM-4抗体靶向型MRI探针,探讨靶向合成型VSMC体外MR成像的可行性.方法体外分离培养合成型VSMC与内皮细胞(EC),采用SMA、Ⅷ因子免疫细胞化学染色方法分别行细胞鉴定;免疫荧光双重染色验证合成型VSMC高表达TPM-4蛋白;应用化学交联法合成靶向TPM-4 MRI分子探针,TPM-4标记探针(TPM4-USPIO)为实验探针组、IgG标记探针(IgG-USPIO)为阴性探针组、未标记探针(USPIO)为对照探针组,PBS为空白组,实验组探针分别与合成型VSMC及EC共孵育,阴性组、对照组探针与VSMC EC共孵育.采用普鲁士蓝染色分析探针特异靶向性,噻唑蓝(MTT)比色法分析不同铁浓度条件下(含铁浓度梯度分别为0、5、10、20、40 μg/ml)对细胞体外生物学活性的影响;采用7.0TMR扫描仪检测探针磁学特性,并对不同探针组标记的合成型VSMC(n=3)以及1×103、5×103、1 × 104、5 ×104、1×105个/管(n=3)不同浓度梯度TPM4-USPIO标记细胞行体外细胞T2WI成像分析.T2信号数据以及MTT结果数据组间比较先行单因素方差分析(ANOVA),若差异有统计学意义,再用LSD法行组间两两比较.结果成功分离并培养了合成型VSMC,合成型VSMC中TPM-4呈高表达;成功构建TPM-4、IgG抗体标记靶向型探针,TPM4-USPIO、IgG-USPIO探针弛豫率分别为0.0350×106、0.0316×106 mol/s,同USPIO(0.0292×106 mol/s)磁学特性相似,稳定性高;普鲁士蓝染色结果显示实验组探针与合成型VSMC呈特异性结合,与EC无特异性结合,MTT结果表明铁浓度≤40 μg/ml范围内对合成型VSMC增殖活性无影响;实验探针组标记细胞T2WI呈低信号,较阴性探针组、对照探针组及空白组信号变化明显,T2弛豫时间为(116.67 ±2.08) ms,明显短于以上3组探针[(217.67±2.52)、(219.33±2.08)及(205.33±1.53) ms],差异具有统计学意义(F=1670.43,,＜0.01);1×103、1 ×104、1×105 3种浓度细胞之间T2弛豫时间分别为(184.33±2.08)、(169.67±1.15)、(116.67±2.08) ms,差异具有统计学意义(F=684.35,P＜0.01),T2 WI信号梯度减低,同一数量级细胞之间T2值变化差异无统计学意义(P值均＞0.05).结论血小板衍化生长因子(PDGF)-BB处理后可获得合成型VSMC,TPM4-USPIO探针能够高效、靶向性结合合成型VSMC,高场强MRI T2WI信号变化显著,为血管性疾病在体靶向合成型VSMC的相关分子影像学研究提供了新的切入点.

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