硝酸镓联合抗菌药物抑制洋葱伯克霍尔德菌生物膜形成的研究
摘要： 目的 研究硝酸镓单用及联合头孢他啶或(和)美罗培南对洋葱伯克霍尔德菌生物膜形成的抑制作用.方法 收集2017年1月至12月临床分离到的34株洋葱伯克霍尔德菌,微量肉汤稀释法检测其对硝酸镓及头孢他啶、复方磺胺甲恶唑、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦、替加环素、美罗培南、氯霉素、米诺环素、头孢哌酮/舒巴坦9种抗菌药物的低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC).结晶紫染色法定性、定量分析生物膜形成能力,比较不同生物膜形成能力菌株对硝酸镓及这9种抗菌药物的敏感性.将1.0×MIC的硝酸镓和头孢他啶、美罗培南单独应用及联合使用,检测其对洋葱伯克霍尔德生物膜的抑制率.结果 培养48小时34株细菌均能形成稳定的生物膜.其中(弱)阳性10株,占29.4％;强阳性24株,占70.6％,生物膜(弱)阳性和强阳性菌株对头孢哌酮舒巴坦的耐药率差异具有统计学意义.加入硝酸镓前后菌株的生物膜形成光密度(optical density,OD)值、硝酸镓单用与联合头孢他啶后的OD值差异均具有统计学意义,但硝酸镓单用与联合美罗培南后的OD值差异无统计学意义.结论 洋葱伯克霍尔德菌具有较强的生物膜形成能力,硝酸镓单用及联合头孢他啶对菌株生物膜形成具有明显抑制作用.
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食蟹猴精原干细胞分离纯化及鉴定
目的 掌握食蟹猴精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养生长特性,建立食蟹猴精原干细胞分离、纯化、培养及初步鉴定的方法.方法 经手术获取2岁14天食蟹雄猴单侧睾丸,采用三步酶消化法分离获得单细胞悬液和差异贴壁法富集精原干细胞.将细胞培养于经丝裂酶素C处理的STO细胞层上,使用添加神经胶质细胞源性的神经营养因子(GDNF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、GDNF家族受体α(GFRa1)三种重要生长因子的无血清培养液体外培养,20d后采用CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR对培养的食蟹猴细胞进行SSCs初步鉴定.结果 通过差异贴壁法分离纯化富集的SSCs,接种到丝裂霉素C处理的STO饲养层细胞上,第2天开始分裂增殖.用含有生长因子的培养基培养2d细胞形成小集落,5d后细胞集落明显.培养20 d后,SSCs呈葡萄串状细胞簇,符合SSCs的形态特征,这些细胞经CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR均呈阳性表达.结论 本研究成功建立食蟹猴精原干细胞的分离纯化及鉴定体系.基于STO饲养细胞的添加GDNF、bFGF和GFRa1三种生长因子的无血清培养体系可用于食蟹猴精原干细胞培养,CDH1可作为食蟹猴精原干细胞鉴定的标志物.
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中段尿培养1348份标本病原菌分布及其耐药性分析
目的 分析了解尿路感染患者中段尿培养标本中病原菌分布及其耐药性,为临床用药提供参考和依据.方法 对2015年6月至2016年5月期间,南京金域医学检验所收集的来自江苏全省13个地市州的500多家基层医院送检的尿路感染患者1348份标本,采用血琼脂平皿和麦康凯平皿35℃培养箱培养方法进行中段尿培养;然后,用VITEK COMPACT全自动微生物分析系统和API鉴定板条对菌落计数>105 cfu/ml的革兰阴性菌和菌落计数>104 cfu/ml革兰阳性菌进行菌种鉴定,并根据2015年美国临床实验室标准化协会标准判断药敏结果.结果 从1348份中段尿培养标本的450份标本中分离出病原菌,阳性率为33.38％.其中革兰阴性菌358株,占79.56％;革兰阳性菌76株,占16.89％;真菌16株,占3.56％.选取全部菌种中6类主要菌(大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、凝固酶阴性葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌)进行药敏分析,其中大肠埃希菌对氨苄西林、哌拉西林、头孢唑林、头孢呋辛的耐药率分别为84.16％、80.37％、87.12％、93.98％;粪肠球菌对四环素、利福平、奎奴普汀-达福普汀、米诺环素的耐药分别为81.40％、86.67％、100％、83.33％.结论 大肠埃希菌和粪肠球菌是尿路感染的主要致病菌.病原菌对青霉素、头孢类、四环素类和利福霉素类耐药严重.分析尿路感染病原菌抗菌药物敏感性试验结果对指导临床合理使用抗菌药物有着重要意义.
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中性粒细胞与淋巴细胞比率评估胃癌预后的Meta分析
目的 分析探讨中性粒细胞与淋巴细胞比率(neutrophil-lymphocyte ratio,NLR)对胃癌患者预后评估的价值.方法 采用循证医学的meta分析研究.首先,从Embase、Medline和Web of Science数据库中检索关键词gastric cancer、stomach cancer、gastric carcinoma、stomach carcinoma、gastric neoplasm、stomach neoplasm、neutrophil和lymphocyte.然后,根据各纳入研究的总生存率(overall survival,OS)和无进展生存期(progression-free survival,PFS)/无疾病生存期(disease-free survival,DFS)合并生存危险比(hazard ratio,HR)的异质性,决定用固定或随机效应模型计算OS和PFS/DFS的合并HR.若合并HR＞1,且其95％可信区间(confidenceinterval,CI)也＞1,则为NLR升高与胃癌患者OS或PFS/DFS的降低有显著联系.结果 收集18篇文献共纳入5 065例胃癌患者进行meta分析.升高的NLR与OS降低存在显著关联(HR为1.79,95％CI 1.54～2.08).亚组分析中,胃癌多种治疗方案组和化疗组NLR升高均与OS降低存在显著关联[HR分别为1.84,(95％ CI 1.48～2.29)和1.69,(95％ CI 1.41～2.03)];而NLR≤3.2组和NLR＞3.2组亦均与OS的降低存在显著关联[HR分别为1.80,(95％CI 1.46～2.23)和1.93,(95％ CI 1.58～2.36)].在胃癌患者OS的单因素meta回归分析中,发表年份、种族、NLR临界值、治疗方案、患者数、进展期患者比例和男性比例都不是引起胃癌患者异质性来源的可能原因(P值分别为0.585、0.887、0.731、0.697、0.613、0.877、0.775).结论 胃癌患者中升高的NLR与OS降低存在显著的关联,NLR可作为评价胃癌患者预后的标志物.
关键词： 中性粒细胞与淋巴细胞比率 胃癌 预后 标志物 -
建立MALDI-TOF MS鉴定的海洋致病性弧菌数据库样本前处理的适宜条件
目的 探讨建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)鉴定海洋致病性弧菌数据库前样本处理的适宜条件,为完善MALDI-TOF MS鉴定该菌入数据库提供参考.方法 将32株海洋致病性弧菌培养至24、48、72 h时,分别用直接转移法、扩展的直接转移法、甲酸提取法得到上机样品,然后用MALDI-TOF MS进行采图鉴定,用SPSS20.0软件进行统计学分析,对样本不同培养时间及3种处理方法的鉴定结果进行比较评价.结果 培养24 h鉴定分数平均值为2.321,属水平鉴定正确率为96.88％,种水平鉴定正确率为90.63％;培养48 h鉴定分数平均值为2.315,属水平鉴定正确率为93.75％,种水平鉴定正确率为90.63％;培养72 h鉴定分数平均值为2.316,属水平鉴定正确率为93.75％,种水平鉴定正确率为87.50％,3种不同培养时间的前处理方法鉴定至属(P=0.129)、鉴定到种(P=0.078),差异均无统计学意义.直接转移法鉴定分数平均值为1.986,属水平鉴定正确率为78.13％,种水平鉴定分数为59.38％;扩展的直接转移法鉴定分数平均值为2.135,属水平鉴定正确率为90.63％,种水平鉴定正确率为78.13％;甲酸提取法鉴定分数平均值为2.306,属水平鉴定正确率为96.88％,种水平鉴定分数为90.63％,3种不同上机前样本处理方法鉴定到属时差异有统计学意义(P=0.006);鉴定到种时差异有统计学意义(χ2=8.691,P=0.013).结论 建立MALDI-TOF MS海洋致病性弧菌数据库时,选择培养时间24 h的甲酸法提取菌体蛋白的前处理方法较适宜,可得到高质量的蛋白指纹图谱和鉴定正确率.
关键词： 海洋 弧菌 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 细菌数据库 -
两种菌体前处理方法对MALDI-TOF MS鉴定临床分离菌效果的影响
目的 评价2种不同前处理方法对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)鉴定临床分离菌效果的影响.方法 收集临床菌株43株,划线传代后,分别使用提取法和抹板法对微生物样本进行前处理,然后用MALDI-TOF MS鉴定比较两种处理方法的准确率和蛋白指纹图谱特征.结果 以16S rRNA/ITS RNA测序结果为参考标准,待测菌株经提取法处理后,MALDI-TOF MS鉴定革兰阳性菌、革兰阴性菌和真菌的种水平准确率分别为93.8％、100.0％和30.8％,待测菌株经抹板法处理后,MALDI-TOF MS鉴定革兰阳性菌、革兰阴性菌和真菌的种水平准确率分别为75.0％、100％和7.7％.提取法处理菌株后得到的蛋白指纹图谱中特征峰更多,信噪比更高,蛋白指纹图谱重现性更好.结论 推荐采用提取法为MALDI-TOF MS鉴定的常规前处理方法,其对建立标准的微生物检测流程,提高质谱鉴定的正确率,有重要价值.
关键词： 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 蛋白指纹图谱 前处理 提取法 抹板法 -
高通量酶联免疫吸附试验测定血清甲胎蛋白的方法学评价
目的 评价高通量酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)定量检测血清甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)的方法学性能及临床应用价值.方法 收集2013年3月至12月,青岛市中心医院住院的肝癌、肝炎、肝硬化患者新鲜血清标本170份,医院体检中心健康查体者新鲜血清标本200份.参考美国临床和实验室标准化协会EP5-A2、EP15-A2文件及相关文献,评价高通量ELISA测定血清AFP的线性范围、精密度、正确度、参考区间及其对原发性肝癌的诊断性能,并与电化学发光法比对,评价其检测准确度和临床应用价值.结果 高通量ELISA测定AFP的线性范围为0.0～200.0 μg/L.低、中、高浓度的批内变异系数(coefficient of variation,CV)分别为4.9％、3.1％、3.7％,批间CV分别为3.8％、1.5％、2.1％;总CV分别为5.0％、6.0％、5.0％.与电化学发光法比对,相对平均偏倚为7.9％.回收率为91％～109％,平均97.76％.高通量ELISA测定本实验室血清AFP的参考区间为0.00～7.20 μg/L,绘制ROC曲线,确定原发性肝癌的诊断临界值为195.7 μg/L,敏感度39.5％,特异度93.3％.结论 本研究所用的高通量ELISA定量检测血清AFP的标准操作规程,检测血清AFP结果稳定,可用于诊断原发性肝癌.
关键词： 高通量酶联免疫吸附试验 甲胎蛋白 方法学评价 -
评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定临床病原菌的效果
目的 评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对临床细菌的鉴定能力.方法 收集2014年9月至2015年1月苏州市立医院门诊和住院患者临床标本中分离出的4 511株病原菌,包括3 727株常见细菌,784株真菌,32株少见菌,按标准操作流程分离和培养后,用MALDI-TOF MS和Phoenix-100分别鉴定所分离菌株,鉴定结果不一致菌株采用细菌16S rRNA基因测序技术予以确认;采用MALDI-TOFMS和传统手工法鉴定真菌.结果 3 727株常见细菌,MALDI-TOF MS检出率为97.0％,Phoenix-100检出率为98.6％.另有35株黏液性肺炎克雷伯菌和42株黏液性铜绿假单胞菌,MALDI-TOF MS未能鉴定出,而Phoenix-100均可正确鉴定.两者对克雷伯菌属和假单胞菌属的检出率差异有统计学意义(x2值分别为36.219、17.288,P均=0.000),对摩根氏菌属、无色杆菌属、黄杆菌属、变形杆菌属的检出率均为100％,对其余菌属检出率差异均无统计学意义(葡萄球菌属、肠球菌属、埃希氏菌属、肠杆菌属、不动杆菌属、伯克霍尔德氏菌属的x2值分别为2.304、0.000、0.000、1.185、1.343、0.611、0.000,沙雷氏菌属、枸橼酸杆菌属、普罗威登斯菌属、窄食单胞菌属均经fisher检验;P均＞0.05).两系统鉴定结果不一致的80例菌株经16S rRNA基因测序,有47株被MALDI-TOF MS正确鉴定,有28株被Phoenix-100正确鉴定,且差异有统计学意义(x2=9.060,P=0.003).MALDI-TOF MS对念珠菌属、酵母菌属以及丝孢酵母菌属的检出率分别为90.7％、100％和100％.32株临床少见菌(芽孢杆菌属、乳杆菌属、丝孢酵母菌属、莫拉氏菌属、产单核李斯特菌等)经MALDI-TOF MS鉴定均得到可信结果.结论 MALDI-TOF-MS能够对葡萄球菌属、肠球菌属、肠杆菌科、非发酵菌群等临床常见细菌以及念珠菌属、酵母菌属等真菌进行可信鉴定,是临床微生物实验室病原菌诊断的有力工具.
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院内不同标本类型肺炎克雷伯菌耐药性分析
目的 监测院内不同标本类型和不同病区分离肺炎克雷伯菌的耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供理论依据.方法 用WHONET5.6对2016年1月1日至12月31日间我院临床主要标本类型来源分离的非重复肺炎克雷伯菌(痰液445株、尿液118株、血液58株)和不同病区分离的肺炎克雷伯菌(儿科病房143株、ICU病房74株、神经外科病房71株)进行耐药性分析.结果 血液标本、痰液标本和尿液标本类型分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南的耐药率分别为5.17％、6.07％和7.63％.ICU病房、神经外科病房和儿内科病房分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南的耐药率分别为14.86％、8.48％、8.39％.结论 我院不同标本类型和不同病区分离的肺炎克雷伯菌对临床部分常用抗菌药物的耐药率相差较大,临床医师及时了解不同来源肺炎克雷伯菌的耐药性,可提高临床医师经验用药的准确率.
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1507例乙型病毒性肝炎患者对6种核苷类似物的耐药分析
目的 分析乙型病毒性肝炎(简称乙肝)患者应用核苷类似物抗病毒治疗出现的耐药情况.方法 对2016年1月1日至3月25日在广州金域医学检测中心检测的来自全国的1507例乙肝患者进行6种常见的核苷类似物耐药基因检测与耐药分析.结果 1507例乙肝患者中拉米夫定(lamivudine,LAM)、替比夫定(Telbivudine,LDT)和恩曲他滨(emtricitabine,FTC)耐药情况严重,耐药率均为35.24％(531/1507例),阿德福韦(adefovir,ADV)和恩替卡韦(entecavir,ETV)次之,耐药率分别为14.93％(225/150)和7.70％(116/1507).未见对替诺福韦(Tenofovir,TDF)耐药株.结论 拉米夫定、替比夫定和恩曲他滨等"低耐药屏障"药物的耐药形势严峻.核苷酸类似物耐药基因监测对有效制定用药方案、改善患者预后以及耐药形势跟踪调查,以减少或延缓耐药株产生有重要的临床指导意义.
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多发性骨髓瘤患者不同骨髓细胞形态和免疫分型分析
目的 分析多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者骨髓细胞形态和免疫型特征,为临床准确诊断提供依据.方法 采用病例对照研究.收集2007年4月至2013年6月甘肃省人民医院初诊的MM患者88例(MM组),同时以88例增生性贫血患者为对照(贫血组).用免疫固定电泳测定其单克隆抗体.分别用光学显微镜和四色流式细胞术检测分析其骨髓细胞形态和免疫型,并比较不同百分比的骨髓瘤细胞组间免疫型表达,以评价MM组免疫型特征.结果 88例MM患者经免疫固定电泳检测,IgG型52例、IgA型26例、IgM型4例,Kappa轻链型52例、Lambda轻链型30例,6例阴性,贫血组无单克隆抗体表达.MM组形态学与贫血组(中位数0/200个)相比,前者浆细胞中幼稚细胞偏多,外形、胞浆、胞核均发生改变,且骨髓瘤细胞比例明显增高(中位数25/200个,t=14.177,P＜0.05).流式细胞术免疫分型结果:MM组CD38+ 98.86％(87/88例)、CD138+ 97.73％(86/88例)、CD56+ 76.14％(67/88例)、CD184+ 73.86％(65/88例),部分伴HLA-DR、CD19、CD20抗原表达,阳性率分别为44.32％(39/88例)、18.18％(16/88例)、15.91％(14/88例),MM组与贫血组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);其他抗原分子(CD5、CD33、CD11b)不表达.用胞质染色法检出Kappa轻链阳性52例[59.09％(52/88例)]、Lambda轻链阳性30例[34.09％(30/88例)],与贫血组比较[0.00％(0/88例)],差异均有统计学意义(P=0.000),且与免疫固定电泳的结果相一致(Kappa值=-0.199,P=0.03).此外,不同百分比的骨髓瘤细胞组间免疫型表达CD38、CD138、CD56、CD184、HLA-DR、CD19、CD20、Kappa、Lambda抗体的组间差异均无统计学意义(Fisher检验,P值分别为0.227、0.230、0.778、0.789、0.113、0.194、0.292、0.938、0.809).结论 骨髓细胞形态学是MM诊断的基本手段,结合免疫分型检测相关抗原分子,可协助临床客观准确地诊断MM.
