靶向大鼠Nogo受体基因的小发夹RNA慢病毒载体的构建及病毒包装
摘要： 目的 构建靶向大鼠Nogo受体(NgR)的小发夹RNA(shRNA)慢病毒载体并进行病毒颗粒包装及滴度测定.方法 设计合成3对针对大鼠NgR及1对非特异性的寡核苷酸单链,退火后得到shNgR双链,克隆入慢病毒载体pGC-LV,行聚合酶链反应(PCR)并测序鉴定重组体;构建NgR过表达载体,双酶切并测序鉴定插入序列正确性;NgR过表达载体和各慢病毒shRNA干扰载体共转染293T细胞后,定量反转录(RT)-PCR及蛋白印迹法筛选有效的慢病毒shRNA干扰载体;重组NgR慢病毒shRNA干扰载体和病毒包装质粒共转染293T细胞,包装并收集病毒颗粒,进行病毒浓缩液滴度检测.结果 PCR及DNA测序结果均显示慢病毒载体pGC-LV-shNgR构建正确;双酶切及测序亦显示NgR过表达载体插入序列正确;定量RT-PCR及蛋白印迹法结果表明所构建的3个慢病毒载体pGC-LV-shNgR均可以有效干扰NgR的表达,其中pGC-LV-shNgR-A干扰效率高;包装病毒颗粒后,检测病毒浓缩液的滴度为2×107 TU/mL.结论 成功构建靶向大鼠Nogo受体的shRNA慢病毒载体并进行病毒颗粒包装,浓缩的病毒液可以用于后续研究.
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60岁以上心脏病人外科治疗体会
自1989年10月至1999年10月手术治疗60岁以上心脏病人15例,认为老年心脏病人手术应消除相关危险因素,熟练操作技术,重视整个围术期的处理.
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体外循环心内直视手术后出血原因及治疗
我院自1987年10月至1999年9月共完成各种体外循环心内直视手术2 013例,其中大出血 35例(占1.7%)需行急诊再开胸止血术,现总结报告如下.
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甲氨蝶呤肌注治疗输卵管异位妊娠
输卵管异位妊娠的传统治疗方法是手术切除患侧输卵管.自1996年9月至1999年8月,我们采用甲氨蝶呤(MTX)肌注治疗输卵管异位妊娠取得较好疗效,现报道如下.
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MVP方案治疗非小细胞肺癌疗效观察
我们自1997年1月至1998年12月观察硫酸长春地辛加丝裂霉素加顺铂(简称MVP方案)治疗非小细胞肺癌(NSCLC)35例,现总结报告如下.1 资料与方法1.1 病例选择:全部病例均有明确的病理或(和)细胞学诊断,近1个月内未接受抗肿瘤治疗.Karnofsky评分≥70分,治疗前肝肾功能及血常规均正常,预计生存3个月以上,年龄≤70岁,有可测量的临床或X线观察指标,可以评价近期疗效.
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创伤严重度分析研究在临床上的应用
近年来由于国内外创伤科学的飞速发展,临床医学方面对创伤的研究正在从直观的、经验的描述型,向更为深入的、量化的解释型转变,特别是创伤严重度评分的应用,使伤员伤情和预后的评估,尤其是多发伤伤情严重度的评估更趋规范化.因此对创伤临床和基础研究产生了具有重要和深远意义的影响.我们根据美国医学会(AMA),美国机动车医学发展协会(AAAM)和美国汽车工程师协会(SAE)联合发起而建立的损伤定级标准委员会(CIS)制定的新版AIS-90创伤定级标准,结合与创伤有关的许多因素对我院住院的903例创伤病人,分别用ISS和ASCOT创伤严重度计量法应用微机进行了分析研究并应用于临床,为提高我们对创伤科学的进一步认识和提高我们的创伤救治水平提供了重要帮助,分析如下.
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445例剖宫产指征分析
随着剖宫产技术和方式的改进及围产医学的发展,剖宫产指征也在不断放宽.本文对445例剖宫产指征进行了总结分析.1 临床资料1.1 一般资料:本文总结了我院1995年1月至1998年12月4a的剖宫产病例,分娩总数为2239例,其中剖宫产445例,剖宫产率为19.87%.
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施普瑞对癌症患者化疗期间外周血象和免疫功能的影响
施普瑞是云南施普瑞制药厂生产的以纯天然螺旋藻为原料的制剂,我科自1996年开始以施普瑞对实施化疗的癌症病人进行支持疗法,检查其中134例的周围血象及免疫功能,表明该药具有明显的升白细胞和增强免疫功能的作用,现将结果报告如下.
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16例原发性输尿管恶性肿瘤的诊断
原发性输尿管恶性肿瘤是临床上比较少见的疾病,因其缺乏特异性的临床表现和体征,术前确诊较困难.我院自1979年以来共收治16例,均经手术和病理证实,现就其诊断进行分析,报告如下.
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舍格伦综合征24例临床分析
舍格伦综合征(Sj?gre′ssyndrome,SS)亦称口眼干燥和关节炎综合征,多数学者认为是一种累及全身外分泌腺的慢性炎症性的自身免疫病.主要有口干、干燥性角膜炎等眼症状或伴有结缔组织受损.在临床上患者常以口干或眼干痒为初症状就诊于口腔科或眼科,现将我院1988-1998年我科就诊的24例舍格伦综合征患者临床情况分析如下.
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甲状腺肿瘤cyclin E蛋白与PCNA免疫组化的定量研究
近年来,随着人们对细胞周期的研究深入,人们逐渐认识到细胞周期的调控异常与细胞癌变密切相关,细胞周期蛋白(cyclin)及其依赖性激酶(CDKs)形成的复合物是细胞周期的核心调控装置[1],在cyclin家族中,cyclin E是其中较重要的一种[2],其含量异常不仅将导致细胞周期的调控失常,也与肿瘤细胞的增殖、发展相关.Wang以Western Blot法研究38例结直肠癌,发现35例癌组织的cyclin E水平显著高于癌旁粘膜,并同时平行应用增殖细胞核抗原(PCNA)测定增殖指数,发现41%的病例中增殖指数也同时增高,提示cyclin E可作为结直肠癌组织的又一细胞增殖指标.我们利用免疫组化和图像定量分析研究cyclin E在甲状腺"正常"与良恶性病变中的表达情况,并同时平行检测PCNA的表达,将两者对比分析,旨在探讨cyclin E与PCNA在甲状腺肿瘤中的相关性及cyclin E的异常表达.
