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神经血管单元的体外神经模型构建
目的 建立一种可以模拟血脑屏障的体外细胞模型.方法 体外分离培养3种细胞(神经胶质细胞,血管内皮细胞和海马神经元),对培养的细胞进行细胞形态及细胞学鉴定,终建立成包含此3种细胞的三维模型即神经血管单元(NVU).结果 本试验成功培养了了体外神经血管单元并进行相关的细胞学鉴定,同时对模型的完整性和通透性进行了验证.结论 此模型的成功建立不仅可以用于替代体内血脑屏障(BBB),同时对于药物研发及化学物神经毒性的筛选及研究具有重要的意义.
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一株具有急性致瘤特性的马立克氏病病毒的分离与鉴定
应用鸭胚成纤维细胞(DEF)从免疫过CVI988/Rispens疫苗株患马立克氏病(MD)的三黄鸡中分离到一株马立克氏病病毒(MDV)(命名为YL040920株).从该分离株蚀斑克隆获得的9个克隆在蚀斑形成时间及其形态大小上均无明显差别,表明它较为单一;应用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增并测定了毒株的致瘤相关基因meq的核苷酸序列,并与其他MDV-1参考毒株的序列进行比较分析,发现其序列具有MDV-1强毒株的特征;用基于抗MDV-1 MEQ蛋白的单克隆抗体3G12E6的免疫荧光试验(FA)对毒株的DEF培养物进行检测,发现有特异性的荧光定位于细胞核内;应用毒株感染霞烟鸡,早在接种后(PI)21d即可诱发明显的内脏器官,在各器官肿瘤中以心脏、肝脏和皮肤的肿瘤发生率高;用禽肿瘤病三重PCR鉴别诊断技术对毒株的DEF培养物以及感染鸡的内脏器官组织进行检测,均能扩增到MDV-1强毒株的特异性带,而网状内皮增生症病毒(REV)和禽白血病病毒(ALV)的检测则均为阴性.研究的结果表明,分离株YL040920为单一的MDV-1强毒株,无REV、ALV以及疫苗株CVI988/Rispens的混杂,并具有以心脏、肝脏和皮肤肿瘤为主的急性致瘤特性.
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禽呼肠孤病毒分离株P10、P17、δ3蛋白基因的表达及抗血清的制备
禽呼肠孤病毒的感染在我国鸡群中非常普遍,它除了可引起鸡传染性关节炎外,还可能引起矮小综合症和免疫抑制等.从鸡群中分离到的不同毒株ARV的毒力差别较大,抗原性也不尽相同[1].ARV是一种双股RNA病毒,病毒颗粒中的基因组有10个不同的独立节段组成[2].其中对S1节段研究的比较详细,而对其它节段的研究尚不深入.现已知,ARV的S1节段有3个ORF,分别编码P10、P17和δ3三种蛋白质[3,4 ].其中δ3是一种结构蛋白,并可能与病毒吸附宿主细胞及病毒中和反应相关[5].而P10和P17为非结构蛋白,但其中P10与感染细胞后细胞膜融合相关[6].为此,Bodelon等[4]在大肠杆菌中分别表达S1节段的P10、P17和δ3三个基因,同时比较了这三个基因产物对细菌膜通透性的影响.
关键词: 禽呼肠孤病毒 P10、P17、δ3蛋白 表达 免疫荧光试验 抗血清 -
一起突发炭疽疫情的诊断和病原的分离鉴定
2005年6~7月,我国河北省承德市围场县发生了一起疑似炭疽疫情.6月29日,7名村民屠宰一病死牛(死因不明),其中3人有伤口.7月5日,有伤口的3人出现发热,伤口红肿、中心变黑,腋下淋巴结肿大等症状.我所对患者血清标本及病死牛肉、屠宰现场带血土壤、患者伤口结痂等标本进行了检测,现将结果报告如下.
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大鼠细小病毒KRV株培养方法的建立
目的 建立用大鼠胶质瘤细胞系( Rat glial cell line C6)替代大鼠原代胚细胞(Primary rat embryo cells,RE)来培养大鼠细小病毒(Kilham Rat Virus,KRV)的方法.方法 将500 TCID50 KRV培养物接种到75T-C6细胞培养瓶中(细胞接种量为2×105/mL),培养过夜,待细胞病变CPE达++~+++时,分别用免疫荧光(FITC)鉴定所培养病毒的特异抗原,用血球凝集试验(HA)测定培养物上清的效价,用DNA测序鉴定所培养的病毒,后用96孔板培养法测定KRV的TCID50.结果 KRV在接种到C6细胞的第4~5天,细胞发生明显的病变,CPE可达++++,FITC鉴定呈KRV抗原阳性,病毒的培养上清中HA效价为1:5 120,测序结果表明,该病毒序列与NCBI中KRV序列同源性达98%,确定为KRV.收获的KRV的TCID50为104.6/0.1 mL.结论 通过对C6细胞系培养KRV方法的标准化和对所培养病毒的一系列鉴定表明,用大鼠胶质瘤细胞系可以替代大鼠原代胚细胞系进行大鼠细小病毒的培养.
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呼肠孤病毒Ⅲ型免疫荧光检测方法的建立及初步应用
目的 建立呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)免疫荧光(IFA)检测方法,应用于人用动物源性生物材料及生物制品外源Reo3的检测.方法 滴定病毒TCID50,筛选Reo3敏感细胞,依据国标IFA法制备抗原片,方阵法滴定免疫荧光素佳工作浓度.并进行特异性、敏感性和稳定性试验.结果 选取BSC-1细胞作为Reo3敏感细胞,病毒感染力滴度(TCID50)为10-5.8/mL;免疫荧光素佳工作浓度为1:100;与小鼠鼠痘(Ect)病毒、小鼠肝炎(MHV)病毒均无交叉反应;稳定性和敏感性试验显示,不同时间IFA检测灵敏度均为1:1280;可检测到的病毒滴度低为10-4.1/mL.结论 建立的IFA法敏感性、特异性强,稳定性好,可用于人用动物源性生物材料及生物制品Reo3的检测.
关键词: 呼肠孤病毒Ⅲ型 人用动物源性生物材料及生物制品 免疫荧光试验 -
恙虫病48例血常规及C反应蛋白分析
恙虫病属于一种急性自然疫源性疾病,又名丛林斑疹伤寒,为恙螨幼螨叮咬人体后将恙虫病东方立克次体传播给人体而引起发病。苍南县属于此病高发区,基层医院开展外斐试验和免疫荧光试验有一定困难。
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免疫荧光试验与反向被动血凝抑制试验测定乙型脑炎抗体对比分析
目的:比较两种乙型脑炎实验室诊断方法.方法:用间接免疫荧光法和反向被动血凝抑制试验检测疑似乙型脑炎患者的血清标本,用SPSS统计软件分析两者的特异性和敏感性.结果:50份临床疑似乙型脑炎患者的血清两种方法检测结果,IgG抗体检出率均为86%,无统计学意义.IgG抗体几何平均滴度RPHI法略高于IFA,但无统计学意义.IgM抗体阳性率IFA为78%;RPHI为76%.RPHI法的几何平均滴度为31.6,IFA的几何平均滴度为30.3,几何平均滴度无统计学意义.两种方法的相关性检测,相关系数分别为0.835和0.696.结论:IFA和RPHI法用于检测乙型脑炎抗体阳性检出率和几何平均滴度差异均无统计学意义.由于RPHI法无需特殊仪器设备,操作简便易行.IFA法除需要一台较好的荧光显微镜外,其操作简便,适于病人的早期诊断.
关键词: 乙型脑炎 免疫荧光试验 反向被动血凝抑制试验 -
风疹病毒山东地方株的分离与鉴定
目的了解山东省风疹病毒流行情况,进行风疹野病毒山东地方株的分离、鉴定.方法 2001~2002年,从我省的济宁、淄博、济南、德州市风疹爆发流行中,采集53份具有风疹典型症状患者的咽拭子,经Vero,RK-13,BHK-21,MK2细胞分离培养,选出有明显的细胞病变株.结果在Vero细胞上对HSV-1病毒攻击呈干扰现象;风疹免疫荧光阳性者;共分离出9株风疹病毒山东地方野毒株(SDRV),代码为SDRV1、2、3、4、5、6、7、8、9.结论细胞用于风疹病毒的分离培养,免疫荧光实验可作为风疹病毒鉴定、诊断的重要方法.
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多重PCR检测急性反复上呼吸道感染儿童病毒和非典型细菌
急性反复上呼吸道感染是住院儿童中常见的疾病.有报道其发病率占所有儿科住院病人的38%,5岁内儿童的63%[1].引起急性反复上呼吸道感染以细菌和病毒常见.目前诊断病毒感染的常见方法是取鼻咽抽吸物进行免疫荧光试验[2],该方法能诊断数种病原体,如A、B型流感病毒,1、2、3型副流感病毒,呼吸道合胞病毒以及腺病毒等.但此方法检出率低,仅20%左右.另一种方法是分离培养,缺点是耗时,对于难培养的病毒显得无能为力.自从流感病毒H1N1爆发以来,一种快速、高敏感性的诊断方法显得非常迫切.
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新疆出血热病毒免疫荧光试验检测结果报告
目的 了解新疆出血热(XHF)的自然界分布状况.方法 对采自塔里木盆地、准噶尔盆地、伊犁谷地和东疆盆地23个县(市)的96份病原材料分别接种Vero-E6细胞,病原材料经细胞培养后,胰酶消化制备细胞片,应用免疫荧光试验(IFA)对细胞片进行病毒检测.结果 96份病原材料中,检出新疆出血热病毒颗粒阳性材料16份,分布地区包括巴楚、于田、轮台、民丰、尉梨、莫索湾、吐鲁番和木垒.结论 巴楚、于田、轮台、尉梨、莫索湾和木垒地区存在新疆出血热的自然界分布,而民丰和吐鲁番仅从羊血液标本中查出阳性,不能说明该地区存在新疆出血热的自然界分布.
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两种血小板抗体检测方法的比较
血小板抗体可以引起多种临床疾病或症状,如同种或自身免疫性血小板减少症、输血后紫癜、血小板输注无效等.目前,血小板抗体的检测方法,已报道的有多种[1,2],如血小板免疫荧光试验、固相红细胞粘附试验(SPRCA)、单克隆抗体特异性血小板抗原固定术(MAIPA)、改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验(MACE)等.
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戊二醛快速包被血小板的血清学技术研究
血小板血型抗原和抗体在临床医学和输血实践中具有重要意义,传统的检测血小板血型血清学方法有免疫荧光、放射免疫、酶联免疫、混合凝集等,近年来随着免疫学、分子生物学的发展和流式细胞仪在医学领域的应用,检测方法也有了突破性的进展,如血小板粘附免疫荧光试验、磁珠介导的血小板分析、分子生物学方法及固相微板技术(solid-phase microplate assay, SPMA)[1]等也可用于血小板血清学检测.
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云南省大理州恙虫病病人血清分型
采用免疫荧光方法,对云南省大理州199份恙虫病病人血清进行分型,结果120份为Karp型(占60.3%),40份为Gilliam型(占20.1%),31份为Karp+Gilliam两型混合感染(占15.6%),3份为Kato型,3份为Karp+Kato+Gilliam三型混合感染,2份为Karp+Kato两型混合感染.表明当地恙虫病流行型别以Karp型为主,次为Gilliam型和Karp+Gilliam两型混合感染,同时亦有少量的Kato型存在.