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软骨藻酸对H4细胞氨基酸释放和Ca2+浓度的影响
目的研究软骨藻酸(domoic acid)对H4细胞的兴奋性、抑制性氨基酸释放和胞内游离Ca2+([Ca2+]i)浓度的影响.方法应用高效液相色谱(HPLC)和荧光分光光度计检测0、0.064、0.64和6.4 μmol/L软骨藻酸作用于细胞2 h后的兴奋性、抑制性氨基酸释放和[Ca2+]i浓度.结果天冬氨酸和谷氨酸:中、高剂量组均高于对照组,差异有显著性(P＜0.05);甘氨酸:仅高剂量组高于对照组,差异有显著性(P＜0.05);γ-氨基丁酸:低、中和高剂量组均低于对照组,差异有显著性(P＜0.05);兴奋性氨基酸/抑制性氨基酸:低、中和高剂量组均高于对照组,差异有显著性(P＜0.05).胞内[Ca2+]i:低、中和高剂量组分别为(208.65±11.01)、(342.31±15.08)和(581.36±17.24)nmol/L,高于对照组[(143.25±11.97)nmol/L],差异有显著性(P＜0.01).兴奋性氨基酸与[Ca2+]i浓度有显著的正相关性(r=0.932 0 P＜0.01).结论软骨藻酸能引起H4细胞兴奋性和抑制性氨基酸释放和胞内[Ca2+]i变化,这种变化可能是软骨藻酸兴奋性神经毒性的重要机制.
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血红素氧化酶在软骨藻酸对细胞DNA损伤中的作用
目的研究血红素氧化酶(heme oxygenase,HO)系统在软骨藻酸(domoic acid,DA)对H4细胞DNA损伤中的作用.方法应用单细胞凝胶电泳法(SCGE)分别测定0、0.064、0.64和6.4 μmol/L DA单独及与HO系统的活性阻断剂ZnPP-9(10-5mol/L)联合作用于H4细胞6、12、24和48 h后彗星拖尾细胞率及拖尾尾长.结果彗星拖尾细胞率:中剂量和高剂量组各时间点均比对照组高,差异有显著性(P＜0.05).中剂量+阻断剂组各时间点均相应高于中剂量组,差异有显著性(P＜0.05).彗星拖尾尾长:中剂量组12、24和48 h比对照组长,24、48 h比低剂量组长,差异均有显著性(P＜0.05).高剂量组各时间点均比对照组、低剂量组和中剂量组长,差异有显著性(P＜0.05).高剂量+阻断剂组和中剂量+阻断剂组24、48 h分别高于高剂量和中剂量组,差异有显著性(P＜0.05).尾长-时间作Regression分析,各剂量组r差异值均有显著性(P＜0.01).结论软骨藻酸能诱导H4细胞DNA损伤,HO系统对这种损伤有一定的保护作用.
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PFKFB3在胶质瘤组织中的表达及其对H4细胞恶性生物学行为的影响
目的:探讨恶性胶质瘤组织中糖酵解限速酶6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3(6-phosphofructo-2-kinase/ fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFB3)的表达水平及PFKFB3抑制剂PFK15对胶质瘤H4细胞增殖、迁移、克隆形成和体内成瘤的影响.方法:采集2015年2月1日至2016年1月31日安康市中医医院神经外科手术切除的31例恶性脑胶质瘤及相应瘤旁组织标本,应用免疫组化技术和Western blotting检测胶质瘤和瘤旁组织中PFKFB3的表达水平.用不同浓度的(1.25、2.5、5.0 μmol/L)PFK15抑制胶质瘤H4细胞的PFKFB3表达,通过MTT法、EdU细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验、克隆形成实验和裸鼠体内成瘤实验分别观察PFK15对H4细胞增殖、迁移、侵袭、克隆形成和体内成瘤的影响.结果:PFKFB3在胶质瘤组织中阳性率显著高于瘤旁组织[(80.60±8.98)％ vs (41.57±10.16)％,P＜0.05].MTT和EdU实验结果显示,PFK15可明显抑制H4的增殖活性(P＜0.05),且抑制作用具有浓度依赖性.PFK15处理后的H4细胞迁移、侵袭和克隆形成能力明显低于对照组(均P＜0.05).注射PFK15的裸鼠H4细胞移植瘤体积明显小于对照组裸鼠[(254.15±154.25) vs (801.52±224.25)mm3,P＜0.01].结论:PFKFB3在恶性胶质瘤组织中高表达,下调PFKB3可显著抑制胶质瘤H4细胞的恶性生物学行为和体内成瘤,PFKFB3可作为恶性胶质瘤生物治疗潜在的分子靶点.
