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肿瘤坏死因子α诱导PERK-eIF2α介导的未折叠蛋白反应
目的 研究肿瘤坏死因子α(TNFα)对小鼠纤维母细胞(L929)中elF2α磷酸化及ATF4、CHOP表达的影响,探讨TNFα信号传导通路与内质网应激的相关性.方法 用TNFα作用于L929细胞0、2、4、6、8和10 h.以WesternBlot检测elF2α磷酸化和CHOP的表达;以Northern Blot检测ATF4mRNA的表达.结果 TNFα对L929细胞的杀伤作用呈时间依赖性,TNFα作用于L929细胞可以引起eIF2α磷酸化的增高、CHOP蛋白及ATF4mRNA表达的升高;且CHOP、ATF4表达的升高均发生在TNFα作用的早期(4 h达到高峰).结论 TNFα作用于L929细胞引起的内质网应激,可以通过激活未折叠蛋白反应的PERK-elF2α途经来缓解TNFα对肿瘤细胞的杀伤作用.
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不同脂肪酸饮食对大鼠肝脏磷酸化eIF2α的影响
内质网应激(ERS)是指细胞内质网生理功能发生紊乱的一种亚细胞器病理状态.近年来众多证据表明,ERS与胰岛素抵抗(IR)密切相关.本研究通过观察不同类型的脂肪酸对p-eIF2α有无影响,进一步阐明ERS是否参与了脂肪酸饮食对胰岛素敏感性的影响机制.
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海人藻酸致痫大鼠海马神经元凋亡中caspase-3作用的实验研究
目的阐明癫痫模型大鼠海马神经元凋亡中caspase-3的作用机制.方法以TUNEL法检测KA致痫大鼠海马神经元凋亡情况,以Western Blot方法检测其海马神经元中eIF2α的表达变化.取模型鼠海马组织制备cDNA文库,以caspase-3的大小亚单位构建酵母三杂交诱饵载体,并进行酵母三杂交筛库实验.结果在癫痫发作后12 h海马出现凋亡神经元,72 h达高峰;发作后24 h海马神经元出现eIF2α被caspase-3酶切的片段,逐渐增加至72 h.成功制备癫痫模型大鼠海马组织cDNA文库,构建了caspase-3酵母三杂交诱饵载体,验证了caspase-3与eIF2αt之间的相互作用,并经筛库获得caspase-3的新底物PIAS1.结论在癫痫模型大鼠海马凋亡神经元中eIF2αt被caspase-3酶切.酵母三杂交技术可用于筛库寻找caspase-3下游底物,从癫痫大鼠海马中获得caspase-3的新底物PIAS1,为进一步研究在癫痫发作致神经元损伤中caspase-3的作用建立了基础.
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胃腺癌中eIF2α的表达及意义
目的 观察真核生物翻译起始因子 2α ( eukaryotic translation initiation factor 2α, eIF2α)在胃腺癌中的表达,探讨其在不同临床特征中的表达差异及临床意义.方法 选取华北理工大学附属医院确诊为胃腺癌,并行手术根治的患者48例作为观察组,同时选取距肿物边缘＞5 cm的非肿瘤性胃黏膜组织29例作为对照组,应用免疫组化法检测两组中eIF2α的表达,分析其在不同临床病理特征中的表达差异.结果 eIF2α在观察组中的阳性率为37. 5% (18/48),明显高于其在对照组中的阳性率0(0/29)(P＜0. 05).观察组中eIF2α表达与患者性别、年龄、Lauren分型、分化程度、是否有癌栓、是否有癌结节、淋巴结转移及浸润深度分组中的差异均无统计学意义(P＞0. 05).结论 eIF2α在胃腺癌组织中高表达,其作用可能与去磷酸化有关,对病变的形成可能有一定的促进作用.
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GRP94、EIF2α在原发型闭角性青光眼小梁中的作用研究
目的 通过检测内质网应激的相关因子GRP94、EIF2α在原发性慢性闭角型青光眼(PCACG)患者小梁组织中的表达,研究内质网应激在PCACG小梁组织氧化损伤中的作用,探讨PCACG的发病机制.方法 分别用HE染色法观察实验组及对照组小梁组织镜下显微形态的变化、免疫组化法测定实验组及对照组小梁组织中内质网应激相关因子GRP94、EIF2α的表达水平.结果 HE染色显示,PCACG患者小梁组织排列不规则,小梁网眼窄小,Schlemm管腔变窄且不规则.免疫组化结果显示,对照组的小梁网组织GRP94、EIF2α少量表达,实验组小梁组织中GRP94、EIF2α的表达明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 PCACG患者小梁组织中存在内质网应激,内质网应激EIF2α通道参与了小梁组织的氧化损伤,促进了眼内压的升高.
关键词： GRP94 eIF2α 内质网应激 原发性慢性闭角型青光眼 -
针刺对实验性脑缺血大鼠内质网未折叠蛋白反应通路eIF2α基因表达的影响
目的:观察针刺百会、内关穴对大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠未折叠蛋白反应(UPR)通路eIF2α因子基因表达的影响,探讨针刺抑制细胞凋亡、保护脑神经元的内在机制.方法:将SD大鼠60只随机分为捆绑组、假手术组、模型组、针刺组、依达拉奉组,每组12只.线栓法制备MCAO大鼠脑缺血再灌注模型,RT-PCR法检测缺血侧顶叶大脑皮层eIF'2α基因表达变化.结果:与捆绑组和假手术组比较,模型组、针刺组及依达拉奉组eIF2α表达明显增高(P＜0.01或P＜0.05);与模型组比较,针刺组及依达拉奉组eIF2α基因表达显著降低(P＜0.01);与依达拉奉组比较,针刺组eIF2α表达变化差异无统计学意义(P＞0.05).结论:针刺可以下调脑缺血大鼠未折叠蛋白反应通路eIF2α因子基因的表达,这可能是针刺发挥脑保护作用的内在机制之一.
