首页 > 文献资料
-
新型地氯雷他定衍生物的合成,生物活性与分子对接
以三环类组胺H1受体拮抗剂地氯雷他定为先导化合物,设计并合成了7个地氯雷他定衍生物,其结构均通过核磁共振氢谱和高分辨质谱表征确定.豚鼠回肠收缩实验显示:两性化合物9a拮抗组胺H1受体的活性高于阳性对照药物地氯雷他定.化合物9a对hERG的抑制活性较弱,并且对豚鼠心率以及心电图各个间期的影响较小,提示其不具有潜在的心脏毒性.
-
药物与hERG钾通道相互作用预测的研究进展
不少药物因临床发现有抑制hERG钾离子通道导致心律失常而被撤出市场,本文从hERG钾通道的生物学基础,阻断hERG钾离子通道的高危险性及采用计算机虚拟预测药物对hERG钾离子通道阻滞活性的研究方法分别进行了介绍和综述,并分别从基于受体和基于配体两个角度对各种预测药物阻滞hERG钾离子通道活性的方法的研究进行阐述和比较.
关键词： hERG 钾离子通道 基于受体的阻滞活性预测 基于配体的阻滞活性预测 -
Drug-Induced Long QT Syndrome and Arrhythmia
Genetic defects associated with profound increases in Q-TC have frequently been associated with either a reduction in an outward potassium current （via Iks:LQT1 and LQT5; or via Ikr: LQT2 and LQT6）or augmentation of an inward sodium current（INa: LQT3）or calcium current.Most clinically relevant drug-related Q-TC prolongation occurs via inhibition of Ikr, a potassium current mediated in humans by the ion channel KCNH2 encoded by the human ether-a-go-go-related gene（HERG）1, analogous to the genetic LQT2 form of the disease.
-
EAG1和 HERG 在卵巢癌中的表达及其意义
目的：探讨EAG1和HERG在卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法检测75例卵巢癌组织、42例卵巢良性肿瘤组织和10例正常卵巢组织中EAG1和HERG的表达情况。结果卵巢癌组EAG1和HERG的阳性表达率显著高于良性组和正常组（P均＜0．01）；卵巢癌低分化、有淋巴结转移组EAG1的阳性表达率高于高中分化组和无淋巴结转移组（ P均＜0．05）；卵巢癌有淋巴结转移组HERG的阳性表达率高于无淋巴结转移组（P＜0．05）。结论 EAG1和HERG在卵巢癌的发生发展中可能起重要作用。
-
阿司咪唑阻断HERG通道的生物学特性及分子机制
目的 观察阿司咪唑对野生型和Y652突变型HERG通道阻断的生物物理学特性,探讨HERG通道分子位点改变对阻断的影响.方法 将HERG通道表达于非洲爪蟾卵母细胞,利用双电极电压钳技术测量其电流,观察阿司咪唑不同浓度、不同电压、不同作用时间下,对野生型和Y652A、Y652R突变型HERG通道电流的阻断作用.结果 阿司咪唑以电压、浓度、时间依赖性阻断HERG通道电流;与野生型比较,Y652A和Y652R突变型可显著减弱阿司咪唑对HERG通道的阻断作用.结论 阿司咪唑优先阻断开放状态的HERG通道,Y652是阿司咪唑与通道结合的关键位点,其极性和侧链长度改变可影响阿司咪唑与通道结合.
-
乌头碱阻断表达在卵母细胞上的HERG通道的电药理特性
目的 观察乌头碱对表达在卵母细胞上的HERG电流的影响.方法 HERG通道表达在非洲爪蟾卵母细胞上,利用双电极电压钳技术测量其电流.结果 ①HERG通道可以稳定表达在卵母细胞上;②乌头碱以浓度和电压依赖性方式阻断表达在卵母细胞上的野生型HERG通道,阻断的半数抑制浓度值是1.801±0.332 μmol/L;③乌头碱对HERG电流的阻断呈时间依赖性;④峰电流幅值被1 μmol/L乌头碱显著降低,而稳态失活的半数失活电压(-39.10±1.04 mV vs -41.61±2.66 mV, P>0.05, n=6) 没有被乌头碱的阻断显著改变,而斜率k(32.37±1.04 mV vs 41.05±4.19 mV,P<0.05,n=6)出现正向移动.结论 乌头碱对HERG电流呈浓度、电压和时间依赖性阻断,而其对失活状态下的HERG通道无明显阻断作用,HERG通道可能是乌头碱致心律失常的关键离子靶点之一.
-
致LQT2的无义突变的HERG通道的表达和药物拯救研究
目的 本研究旨在探讨氨基糖苷类抗生素庆大霉素在异源表达系统中对导致长QT综合征2型的无义突变的HERG通道的作用.方法 采用聚合酶链反应法制备相关突变体--W927X、R863X和E698X,并克隆到真核细胞表达载体中.将突变体的cDNA瞬时转染至HEK293细胞,应用全细胞膜片钳技术记录通道电流.药物拯救采用将转染24 h后的HEK293细胞在含庆大霉素(400 μg/mL)的培养液中孵育24h.结果 W927X能表达典型的HERG电流,尽管与野生型HERG相比,电流幅值明显下降;R863X和E698X仅表达与未转染细胞上类似的内生性电流,说明未能形成功能性的HERG通道.庆大霉素能增强W927X的功能性表达,使其大尾电流密度由11.6±2.4 pA/pF(n=8)增至19.5±2.7 pA/pF(n=7, P<0.05).通道激活动力学特征在野生型HERG、W927X和W927X加庆大霉素干预组均没有明显差异.然而,庆大霉素对R863X和E698X并无明显作用.结论 氨基糖苷类抗生素能部分恢复无义突变的HERG通道的功能性表达,且对不同的突变体其作用效应不同.
-
遗传性长QT综合征HERG基因真核表达载体的构建和在HEK293细胞中的表达
目的 构建HERG基因的真核表达载体,并在人胚胎肾细胞(HEK293)中进行表达.方法 先将pGH19-HEKG通过限制性酶sac I和EcoR I酶切得到HERG cDNA,将pIRES2-EGFP用sac I和EcoR I进行双酶切,把HERGcDNA定向克隆到plRES2-EGFP中,即构建了HERG基因的真核表达裁体pIRES2-EGFP-HERG.然后利用电穿孔法将plRES2-EGFP-HERG转染HEK293细胞.结果 在卵母细胞异源表达载体pGH19-HERG基础上,获得了真核表达载体plRES2-EGFP-HERG,并在HEK293细胞中成功进行了表达.结论 在HERG基因卵母细胞异源表达载体的基础上,构建了HERG基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-HERG,利用电穿孔法将其转染至HEK293细胞中并成功地进行了表达,为下一步进行膜片钳的研究奠定基础.
-
遗传性长QT综合征HERG基因及SCN5A基因新突变
目的:研究长QT综合征患者基因突变、致病机制及其与临床表型之间的关系.方法:分析长QT综合征患者的临床表脱、心电图特点,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增长QT综合征的常见突变基因KCNQ1,HERG,SCN5A的全部外显了及外显子与内含子连接部位,DNA直接测序检测基因突变位点.应用实时定量PCR方法测定一个家系的成员基因表达量,以探讨其可能的致病机制.结果:在5个长QT综合征家系中,发现2个HERG基因突变位点及1个SCN5A基因突变位点,分别为HERG基因C1848A、G1120T和SCN5A基因G638T.其中HERG基因C1848A突变引起616位酪氨酸转变为终止密码子(Y616X),G1120T突变引起374位缬氨酸转变为苯丙氨酸(V374F);SCN5A基因G638T突变引起213位甘氨酸转变为缬氨酸(G213V).HERG基因Y616X突变患者家族成员外周血mRNA表达量分析,发现其HERG基因mRNA表达量明显低于无突变者.结论:发现3个长QT综合征相关的基因新突变位点,两个突变位于HERG基因,另一个位于SCN5A基因.基中HERG基因无义突变Y616X引起mRNA表达量减少,可能受无义突变介导的RNA降解(Nonsense Mediated Decay,NMD)机制有关,从而引起较轻微的临床症状.
-
急性髓性白血病患者herg mRNA的表达及临床意义
目的:了解herg mRNA在急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中的表达情况,并初步分析其临床意义.方法:通过实时荧光定量PCR方法检测48例初诊AML患者和15例正常人外周血 herg mRNA的表达情况,分析herg mRNA的表达水平与AML患者的临床与实验室特征以及患者的疗效和复发的关系.结果:48例初诊AML患者检测到38例(79.17%)外周血表达herg mRNA,初诊AML患者及正常人外周血herg mRNA表达水平的中位值分别为0.03(0.00～2.49)%和0.35(0.04～1.09)%,AML患者明显低于正常人(P=0.00),AML患者外周血herg mRNA的表达水平与其临床和实验室特征无明显相关性.不表达herg mRNA患者的完全缓解率(9/10,90%)高于表达的患者(31/38,81.58%),复发率前者低于后者,但差异无统计学意义(P=0.53,0.27).结论:初诊AML患者外周血herg mRNA的表达水平明显低于正常人,尚未发现herg mRNA的表达情况与疾病预后的明确关系.
-
HERG基因与心律失常
人类果蝇相关基因--HERG是从人类海马cDNA文库中鉴定出来,与果蝇EAG基因具有同源性.HERG基因编码延迟整流钾通道的α亚单位,这一类钾通道属电压依赖性通道.实验研究发现HERG基因突变引起其编码的通道结构及功能改变,从而引起心肌细胞动作电位时程改变,临床上表现为心律失常.HERG基因已被证实与心律失常发病有关,尤其是与长QT综合征LQT2的发生有密切关系.现就HERG基因的结构,HERG钾通道的结构、特性及其与心律失常的关系作一综述.
-
钾离子通道β亚单位KCNE4对KCNQ1及HERG电流的影响
目的:研究钾离子通道β亚单位KCNE4对KCNQ1及HERG通道电流的影响.方法:构建离子通道细胞模型,单独表达基因KCNQ1、HERG,以及联合表达基因KCNQ1+ KCNE4、HERG+ KCNE4.采用全细胞膜片钳方法记录通道电流曲线,比较组间电流的大小及通道的动力学特征.采用免疫荧光细胞定位方法,检测KCNF4对通道蛋白表达的影响.结果:KCNF4与KCNQ1共表达显著减低KCNQ1通道电流.单独表达KCNQ1通道的细胞,膜电位+60 mV时,平均电流密度为(24±2.9)pA/pF,共表达KCNQ1+ KCNF4时,细胞电流密度降至(7.3±1.1) pA/pF.与KCNQ1电流相比,+40 mV时KCNQ1/KCNF4激活时间常数的快成分(Tfast)增加,但慢成分(Tslow)减慢,KCNQ1/KCNF4无尾电流产生,表明KCNE4参与了KCNQ1通道动力学的调整.单独表达KCNF4亚单位的细胞没有产生任何电流.当KCNF4与HERG共表达时,电流的大小、电流电压关系曲线及通道稳态激活曲线都与HERG通道无明显差异,电流密度为(26.7±3.9) pA/pF,半数激活电压(V1/2)为(-3.10±0.68)mV,斜率因子为8.89±0.33.从通道的失活时间常数以及失活后恢复时间常数与测试电压的关系曲线可见,KCNF4对HERG通道的动力学特征均无影响.免疫荧光染色结果显示,KCNF4没有影响KCNQ1蛋白的表达.结论:KCNF4亚单位可显著改变KCNQ1通道的电压敏感性,表现出抑制作用,KCNE4对KCNQ1蛋白在细胞膜上的表达及HERG通道电流均无影响.
-
与HERG钾通道相互作用的FHL2蛋白对该通道功能的调控
目的 筛选与心脏人类果蝇相关基因(HERG)的编码蛋白钾通道存在相互作用的蛋白质,并进一步研究该相互作用蛋白对HERG钾通道的调控作用.方法 ①以带有编码人类心脏HERG钾通道的cDNA为模板,通过PCR方法得到编码人类心脏HERG钾通道氨基末端(404个氨基酸)的DNA片段.将该片段克隆入pGBKT7/载体,构建"诱饵"质粒pGBKT7-HERG-NT.②应用酵母双杂交技术筛选人类心脏cDNA文库.③以PCR法扩增4个半LIM结构域(FHL2)基因的开放读框片段(ORF),并克隆入pcDNA3.0载体.④以pcDNA3.0-herg转染HEK293细胞,应用G418筛选得到HEK293/HERG细胞株.以pcDNA3.0-FHL2转染HEK293细胞,筛选得到HEK293/FHL2细胞株后,再将pcDNA3.0-herg转染入该细胞株.⑤应用膜片钳技术,研究FHL2对HERG通道功能的影响.结果 ①用酵母双杂交技术筛选得到37个阳性克隆,其中含有表达FHL2蛋白的克隆.②膜片钳检测发现.FHL2蛋白在增加HERG电流幅度的同时并调节其激活过程.结论 FHL2蛋白能与HERG氨基末端相互作用而影响HERG钾通道的功能.
-
HEK293细胞中杂合状态下无义突变体L539fs/47对野生型HERG电流的作用
目的：研究单独表达无功能的无义突变体 L539fs/47在 HEK293细胞中杂合状态下对野生型 HERG电流的作用。方法用脂质体转染法将野生型 HERG 及突变体 HERG-L539fs/47分别转染 HEK293细胞36 h 后,RT-PCR检测 HERG mRNA表达,免疫荧光及免疫印迹检测 HERG蛋白定位及表达量,全细胞膜片钳检测 IHERG电流密度。结果野生组 HERG的mRNA表达量高于L539fs/47突变组(1.066±0.612 vs.0.254±0.397,P<0.01)。免疫荧光检测发现野生型 HERG蛋白多于突变体,野生型 HERG 蛋白主要分布在细胞膜上；而 HERG 突变体蛋白大部分滞留胞质。免疫印迹显示：不同于野生型 HERG135 ku及155 ku 2个条带,突变体仅60 ku 1个条带。全细胞膜片钳检测 WT+MT组IHERG较WT组下降55.23%(22.03±2.62 vs.49.20±2.31 pApF,P<0.01)。结论 HEK293细胞中杂合状态下截断突变体 L539fs/47对野生型 HERG电流的不完全负显性抑制作用。
关键词： hERG 无义突变 不完全负显性抑制作用 HEK293 细胞 -
HERG钾通道与疾病
HERG是筛选人类海马的cDNA文库而分离得到的。hERG编码快速型延迟整流钾电流（Ikr）的α亚基，在人脑、心肌、肝脏和脾脏等多种组织中均有表达。越来越多的临床研究表明许多药物引起的心血管不良反应与抑制hERG钾通道有关。另外，hERG在一些肿瘤细胞中的高表达也提示hERG很可能在肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用。
