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TLR2及其相关细胞因子在军团菌感染中作用
目的 通过体外实验探讨Toll样受体2(TLR2)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)在军团菌感染中的作用.方法 分离30名健康人外周血单核细胞(PBMC),将每名健康入PBMC分为对照组和军团菌刺激组,军团菌刺激组加入500 μL 2×107/mL军团菌悬液,对照组加入500 μL磷酸盐缓冲液(PBS),分别在18、24、72 h时获取细胞及上清液,采用real-time PCR法测定细胞中TLR2、MyD88 mRNA的表达水平,ELISA法检测细胞培养上清液IL-6、IL-1β及TNF-α含量.结果 与对照组比较,18h军团菌刺激组MyD88mRNA△Ct值(1.414 0±0.044 9)低于对照组(1.684 4±0.042 6),24h军团菌刺激组TLR2 mRNA△Ct值(1.347 9±0.056 2)低于对照组(1.425 9±0.038 7),72h军团菌刺激组TLR2 mRNA和MyD88 mRNA△Ct值[(1.504 9±0.018 9)和(1.5400±0.031 9)]均高于对照组[(1.4105±0.025 5)和(1.339 2±0.032 2)],差异均有统计学意义(均P＜0.05);18、24、72h军团菌刺激组细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6浓度均高于对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 TLR2及TNF-α、IL-1β、IL-6等相关炎性因子可有效抵制军团菌感染,TLR2介导的天然免疫可能是军团菌感染的保护因素.
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亚低温对急性肺损伤大鼠 Toll 样受体2蛋白表达及下游促炎因子的影响
目的：探讨亚低温对急性肺损伤（ALI）大鼠Toll样受体2（TLR2）蛋白表达及下游促炎性因子的影响。方法按随机数字表法将90只雄性SD大鼠分为四组：亚低温组、控温组、非控温组[气管滴入脂多糖（ LPS）制备ALI大鼠模型]及对照组（滴入等量的生理盐水）。建模成功后，亚低温组及控温组分别将体温维持在33～34℃、36～37℃。分别于滴入LPS或生理盐水后2h、7h及13h处死大鼠。分别于术前及术后1h、2h、7h、13h测定动脉血气分析。光镜下观察肺组织形态结构，进行病理评分。分别采用蛋白质印迹法（ Western blot）及逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）检测大鼠肺组织的TLR2蛋白表达及髓样分化因子（MyD88）、肿瘤坏死因子－α（ TNF－α）、诱导型一氧化氮合酶（ iNOS） mRNA的转录。结果 LPS干预后，肺组织病理评分升高；TLR2蛋白及Myd88、TNF－α、iNOS mRNA表达随时间延长呈升高趋势（均P＜0．01）。1 h、6 h亚低温组氧分压好于同时段控温组及非控温组（均P＜0．05），12 h亚低温组氧分压与同时段控温组及非控温组比较差异无统计学意义（均P＞0．05）。同一时段亚低温组肺组织评分低于控温组及非控温组（均P＜0．05），TLR2蛋白表达低于控温组及非控温组（均P＜0．01），MyD88 mRNA （2－ΔΔCT）低于控温组及非控温组（均P＜0．01），TNF－αmRNA（2－ΔΔCT）低于控温组及非控温组（P＜0．01），iNOS mRNA（2－ΔΔCT）低于控温组及非控温组（均P＜0．01）。结论亚低温能降低内毒素诱导的ALI大鼠的TLR2蛋白及下游促炎症因子表达，减轻肺损伤。
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Toll 样受体2在脂多糖诱导的急性肾损伤小鼠肾脏足细胞的表达及其意义
目的：研究脂多糖（ LPS）诱导的脓毒症性急性肾损伤（ AKI）小鼠Toll 样受体2（TLR2）的表达规律、分布特点并对其机制进行初步探讨。方法采用小鼠腹腔注射LPS造成脓毒症性AKI模型，将40只清洁级小鼠随机分为生理盐水（NS）对照组（20只）和LPS模型组（20只），分别测定各组血清尿素氮、肌酐及24 h尿蛋白水平，HE染色观察肾组织病理变化。应用免疫组化染色法观察TLR2在两组肾脏的分布特点。应用实时荧光定量PCR（ real－time quantitative PCR）法检测两组肾组织TLR2 mRNA的表达水平。结果腹腔注射LPS后24 h血清尿素氮、肌酐及24 h尿蛋白水平较对照组明显升高，肾脏病理变化亦支持AKI模型造模成功。应用免疫组化染色法检测TLR2在NS组小鼠肾小球内皮细胞有少量表达，足细胞几乎无表达，而在LPS组肾小球内皮细胞及足细胞表达明显增多，而且实时定量PCR法显示，LPS组肾组织TLR2 mRNA表达较NS组明显增高（5．52±0．21 vs 1．00±0．05，P＜0．01）。结论在LPS诱导的脓毒症性AKI中，肾组织TLR2表达明显上调，尤其足细胞及肾小球内皮细胞表达明显增加。 TLR2信号途径在足细胞和肾小球内皮细胞的激活可能介导脓毒症性AKI的发生。
关键词： Toll样受体2(TLR2) 脂多糖 脓毒症 急性肾损伤(AKI) 足细胞 -
TLRs与NF-kB在大鼠骨关节炎滑膜中的表达及意义
目的:探讨不同造模时间下大鼠滑膜组织中的Toll样受体(Toll-like Receptors,TLRs)和核因子-kB(NF-kB)在骨关节炎(Osteoarthritis,OA)病程中的内在联系,研究其表达特点及变化规律.方法:将80只Wistar大鼠随机分为5组,每组16只.模型组大鼠利用经典Hulth法建立2,4,6周膝OA动物模型,同样方式切开假手术组皮肤及关节囊进入关节腔,空白对照组不予手术.按期提取滑膜样本,对其进行形态学观察并用实时PCR法检测各组滑膜组织中TLR2,TLR4及NF-kB的表达.结果:重度OA模型中的TLR2表达显著增加(P＜0.05);随着造模时间的延长,TLR4的表达逐渐受到抑制(P＜0.05);NF-kB在2,4,6周模型组中均大量袁达(P＜0.05),且表达量与造模时间成正比.结论:大鼠膝关节OA模型造模成功,OA病程时间与TLR2,TLR4和NF-kB的表达之间存在显著的相关性,三者是导致OA发生的重要影响因子.
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TLR2在胶质瘤细胞GL261的高表达及其激活后增强迁移的作用
目的 探讨小鼠胶质瘤细胞系GL261主要高表达的Toll样受体(TLRs)家族成员及其在GL261细胞迁移中的作用.方法 运用实时荧光定量PCR检测TLRs在GL261细胞的表达情况；GL261细胞经TLR2配体Pam3CSK4刺激后,应用Transwell迁移实验检测其对迁移能力的影响；慢病毒稳定干扰TLR2表达后,观察Pam3CSK4刺激对GL261细胞迁移能力的改变.结果 GL261细胞主要高表达TLRs家族中的TLR2;Pam3CSK4激活TLR2后显著增强GL261细胞迁移能力；沉默TLR2基因表达后,Pam3CSK4促进GL261细胞迁移能力的作用消失.结论 小鼠GL261胶质瘤细胞TLRs家族中主要高表达TLR2,其激活具有促进GL261细胞迁移的作用,下调TLR2可抑制该细胞的迁移.
关键词： Toll样受体2(TLR2) 胶质瘤细胞 侵袭 -
强直性脊柱炎患者外周血单核细胞TLR2和TLR4表达及其临床价值
目的 探讨强直性脊柱炎(AS)患者与健康患者外周血单核细胞(PBMC)表面的TLR2和TLR4表达差异及临床意义.方法 根据入选标,LM准选取40例强直性脊柱炎患者和40例健康体检患者.在未给予系统治疗前提取外周血单核细胞进行研究.并对患者红细胞沉降率(ESR)和血浆C-反应蛋白(CRP)进行检测.使用qPCR法对外周血单核细胞TLR2和TLR4 mRNA表达水平进行检测.并使用western blot法对外周血单核细胞TLR2和TLR4蛋白表达水平进行检测.结果 结果显示强直性脊柱炎患者ESR和CRP较对照组明显升高,差异均有显著统计学意义(P均＜0.05).同时我们还发现强直性脊柱炎患者外周血单核细胞(PBMC) TLR2和TLR4 mRNA和蛋白表达水平较健康体检患者显著增加,差异均有显著统计学意义(P均＜0.05).结论 TLR2和TLR4在强直性脊柱炎患者外周血单核细胞表面的表达水平呈显著性升高,提示TLR2和TLR4与强直性脊柱炎发病可能存在密切的相关性.TLR2和TLR4表达水平有作为诊断强直性脊柱炎的潜在价值,但仍需进一步的研究证实.
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Toll样受体2(TLR2)激动剂Pam3Csk4预处理对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌攻击小鼠的保护作用
目的 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染日趋严重,免疫防治被寄予厚望.本研究旨在探索Toll样受体2(TLR2)激动剂Pam3Csk4预处理小鼠对MRSA攻击的保护作用.方法 每只昆明小鼠用(25、50、100) μg Pam3Csk4尾静脉预处理12、24 h,小鼠尾静脉注射7×1010集落形成单位(CFU)/kg的MRSA (ATCC43300).小鼠生存率按前24h每2h观察1次,后续每6h记录小鼠存活情况,共观察1周.感染MRSA(3×108 CFU/只)6h后,菌落计数法观察肝、脾和肾等器官对MRSA的清除能力;3×108 CFU/只MRSA攻击6、12、24h后,ELISA检测小鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)和IL-10含量,实时荧光定量PCR(qPCR)检测MRSA攻击后小鼠脾脏TNF-α、IL-6、IFN-γ和IL-10的mRNA水平,以及Pam3Csk4预处理小鼠24h后,CXC趋化因子配体1(CXCL1)和Fcγ受体Ⅲ(FcγRⅢ)表达量.结果 100 μgPam3Csk4预处理能显著提高MRSA攻击小鼠的生存率,与Pam3C sk4预处理时间呈时间依赖关系;MRSA攻击小鼠的生存时间与Pam3Csk4预处理剂量相关,50μg以上剂量Pam3Csk4预处理能显著提高MRSA攻击小鼠生存率至70％以上;与对照组比较,Pam3Csk4预处理小鼠血清中TNF-α在6h和12 h均显著降低,24 h后2组间无显著差别;IL-6在处理6h内显著降低,12 h和24 h后无显著差异,IFN-γ在24 h内均显著降低,而IL-10则无显著变化;Pam3Csk4预处理24 h后,脾脏中CXCL1和FcγRⅢ表达量均显著高于生理盐水组.结论 Pam3Csk4预处理对MRSA攻击小鼠具有保护作用.
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慢性乙型肝炎病毒感染者CD8+T细胞Toll样受体2表达增强
目的 测定未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者CD8+T细胞中Toll样受体2(TLR2)的水平,探索TLR2在慢性HBV感染者CD8+T细胞中的表达的情况.方法 采用实时荧光定量PCR检测40例样本的血清HBV载量,分为高病毒载量组(HBVDNA＞1×104拷贝/mL)、低病毒载量组(HBV DNA＜1×104拷贝/mL),19例志愿者作为健康对照组;分离外周血单个核细胞,流式细胞术检测CD8+T淋巴细胞亚群中TLR2和CD38、HLA-DR、CD95、程序性死亡蛋白1(PD-1)的表达,并分析TLR2表达情况及与它们之间的相关性.结果 低病毒载量组与高病毒载量组CD8+T细胞TLR2的表达较健康对照组高,低病毒载量组CD8+T细胞TLR2表达高于高病毒载量组;相关性分析结果显示CD8+T细胞亚群中TLR2和CD38、HLA-DR、CD95、PD-1表达缺乏相关性.结论 HBV感染者CD8+T淋巴细胞TLR2的表达增强.
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中国九江汉族人群TLR2基因单核苷酸多态性与Graves病易感关系
目的:研究九江汉族人群TLR2基因多态性与Graves病的易感关系.方法:本研究采用特异性引物PCR方法,基于病例-对照研究的实验设计,对333例甲亢病例和368例正常对照的TLR2基因上的rs3804100和rs5743705位点进行了基因分型.结果:患者男女比例约为1∶2.6,女性有更高的患病风险；所有位点均符合哈迪-温伯格平衡.没有在总体病例、对照之间观察到多态位点基因型和等位基因频率的显著差异.然而,在对发病年龄和性别进行分层分析后发现,在GD早发病人中(≤40岁),SNP位点rs3804100的A/A基因型(P =0.013,OR=1.53,95％CI=1.11-2.12)以及A等位基因频率(P =0.020；OR=1.37；95％ CI=1.05 - 1.79)显著高于正常对照组.结论:TLR2基因rs3804100位点的A/A基因型可能会显著增加人群40岁以前患GD的风险.
