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在MRSA系统性感染模型中Pam3 CSK4预处理降低小鼠肾组织的炎症反应
目的:在耐甲氧西林金葡菌(MRSA)系统性感染模型中,观察低剂量TLR2激动剂Pam3CSK4预处理对小鼠肾组织中炎症反应的影响并初步探讨其机制.方法:于感染前48 h、24 h对BALB/c小鼠行尾静脉注射Pam3CSK4(10μg/100μl/只);2×107 CFU/只MRSA经静脉感染小鼠,ELISA和荧光实时定量PCR(Q-PCR)检测细胞因子水平,Q-PCR检测TLR2、IRAKs等相对表达量,Western blot检测NF-κB p65磷酸化、IRAK-M及A20表达.结果:与对照组相比,预处理组在感染6 h后肾组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、CCL3和IFN-γ含量显著减少,iNOS表达量降低,IL-10和TGF-β表达量增高,TLR2表达下降;处理组肾组织在感染12 h后IRAK-1表达无明显增加,而IRAK-M表达量显著增加;Western blot结果显示Pam3CSK4预处理组NF-κBp65磷酸化降低,IRAK-M表达明显增高.结论:Pam3CSK4预处理降低MRSA系统性感染小鼠肾组织的炎症反应,这可能与诱导IRAK-M表达相关.
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ABCA1敲低对小鼠巨噬细胞中Pam3CSK4引起的炎症反应的双向调节作用
目的 检测ABCA1敲低对巨噬细胞中Pam3CSK4引起的炎症应答的影响.方法 构建小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的ABCA1敲低的稳定细胞系,以TLR2配体Pam3CSK4刺激该细胞系建立炎症反应细胞模型,在该细胞模型上检测相关促炎和抗炎细胞因子转录水平的表达变化.结果 ABCA1敲低的RAW264.7稳定细胞株在Pam3CSK4刺激后,IL-1β,TNF-α和IL-6表达发生显著上调(P<0.01),而转录抑制因子cAMP依赖性转录因子3(ATF3)也发生显著上调(P<0.01);与此同时,ATF蛋白家族中其它因子ATF1,ATF2,ATF4和ATF5转录水平没有发生显著变化.结论 在巨噬细胞RAW264.7中,ABCA1敲低显著上调Pam3CSK4引起的促炎因子IL-1β,TNF-α和IL-6的表达的同时,也显著上调了具有抗炎效应的ATF3的表达,其对炎症反应的影响可能并非是单向的促炎作用,而是发生双向的调节,而ABCA1参与上调ATF3表达的机制可能也与其ATF蛋白家族其他成员的上游调节机制不同.
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Toll样受体2配体对刀豆蛋白A诱导小鼠肝脏损伤的保护作用
目的:研究Toll样受体2配体(Pam3CSK4)对刀豆蛋白A(Con A)诱导小鼠免疫性肝损伤的干预效果及机制.方法:尾静脉注射Con A(15mg/kg)诱导小鼠肝损伤模型,在Con A注射前24h腹腔注射Pam3CSK4.检测血清谷丙转氨酶(ALT)和γ-干扰素水平,并观察肝组织的病理改变.结果:与Con A模型组比,Pam3CSK4预处理组血清ALT水平明显降低(P<0.01),肝脏病理损伤明显减轻,血清γ-干扰素水平明显下降(P<0.01).结论:Pam3CSK4对Con A诱导小鼠肝损伤具有保护作用,该作用可能与γ-干扰素水平的下调有关.
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Pam3Csk4预处理对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染小鼠肾脓肿影响研究
目的 研究TLR2激动剂Pam3Csk4预处理后耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)攻击小鼠肾脏的保护作用.方法 将雌性SPF级昆明小鼠共分为未处理正常小鼠组、生理盐水组和Pam3Csk4处理组3组,每组4只.Pam3Csk4处理组用Pam3Csk4尾静脉注射预处理小鼠24 h,每只50 μg,分别于MRSA感染3、7d后观察肾脏脓肿的形成情况;流式法检测MRSA攻击12h后肾脏中性粒细胞的浸润;Q-PCR法检测MR-SA攻击6、12h后小鼠肾脏肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1和IL-10的基因表达,以及高迁移蛋白B1 (HGMP1)、热休克蛋白70 (HSP70)、FcγⅢ受体(FcγRⅢ)、补体受体3(CR3)及趋化因子CXCL1/2受体的表达情况.结果 与生理盐水组比较,Pam3Csk4预处理能抑制MRSA攻击小鼠后肾脓肿的形成,减少肾脏中性粒细胞的浸润(P＜0.01),降低趋化因子受体CXCL1/2基因的表达(P＜0.05);Pam3Csk4预处理小鼠肾脏TNF-α、IL-6和IL-1表达水平降低,而IL-10则增加(P＜0.05);HSP70和HGMP1基因在MRSA感染6h内两组比较差异无统计学意义(P＞0.05),但12h后HSP70和HGMP1基因均降低(P＜0.01);Pam3Csk4预处理小鼠肾脏CR3和FCγⅢ受体表达水平均高于生理盐水组(P＜0.05).结论 Pam3Csk4预处理降低MRSA导致的炎性反应并对MRSA所致肾脓肿具有抑制作用.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 Pam3CSK4 肾脓肿 -
TLR2配基Pam3CSK4对小鼠中性粒细胞吞噬耐甲氧西林金黄色葡萄球菌功能的影响
目的 探讨Toll样受体2(TLR2)配基Pam3CSK4对小鼠骨髓来源中性粒细胞吞菌功能的影响.方法 取小鼠骨髓中性粒细胞,给予Pam3CSK4或LTA刺激,采用流式细胞术检测中性粒细胞对热灭活的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌(CR-AB),耐碳青霉烯类的肺炎克雷伯菌(CR-KP)的吞噬作用;磁珠分选中性粒细胞,给予Pam3CSK4刺激24h、48 h后,q-PCR检测中性粒细胞IL-1β,IL-6,IL10,TNF-α,FcγyRⅢ,iNOS,COX-2等基因表达水平的改变;Pam3CSK4刺激中性粒细胞不同时间后再给予热灭活的MRSA刺激,收集培养上清液,ELISA检测IL-1,IL-6,TNF-α细胞因子的表达水平.结果 Pam3CSK4刺激组的中性粒细胞对热灭活MRSA的吞噬率为41.1％,明显高于PBS对照组(18.4％),但Pam3CSK4刺激组对CR-AB和CR-KP的吞噬率与对照组相比没有明显改变.Pam3CSK4刺激中性粒细胞12h,24 h后IL-6和TNF-α的表达与PBS对照组相比明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05),此外,Pam3CSK4刺激组增强中性粒细胞IL-1β、IL-6、IL10、TNF-α、Fc γ RⅢ、iNOS、COX-2的mRNA的表达(P＜0.05).结论 Pam3CSK4可以增强中性粒细胞对MRSA的吞噬作用.
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Pam3CSK4诱导肥大细胞产生IL-6的效应研究
目的 探讨Pam3CSK4对肥大细胞产生IL-6的影响及其涉及的机制.方法 体外诱导培养小鼠骨髓来源的肥大细胞(bone marrow-derived mast cells,BMMCs),通过RT-PCR、Western blot检测BMMCs Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)基因和蛋白的表达;在有或无SB203580预处理的情况下,Pam3CSK4刺激BMMCs 24 h后,ELISA检测上清中IL-6的含量;同时应用Western blot对Pam3CSK4作用后BMMCs p38MAPK磷酸化的情况进行检测.结果 BMMCs存在TLR2的表达;BMMCs受Pam3CSK4(10～100 ng/ml)刺激后,IL-6的分泌明显增加(P＜0.01),并且出现了明显的p38MAPK磷酸化;与Pam3CSK4单刺激组相比,SB203580与Pam3CSK4联合刺激组IL-6的含量明显降低(P＜0.01).结论 Pam3CSK4诱导肥大细胞产生IL-6,这一效应涉及p38MAPK信号途径.
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Toll样受体2(TLR2)激动剂Pam3Csk4预处理对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌攻击小鼠的保护作用
目的 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染日趋严重,免疫防治被寄予厚望.本研究旨在探索Toll样受体2(TLR2)激动剂Pam3Csk4预处理小鼠对MRSA攻击的保护作用.方法 每只昆明小鼠用(25、50、100) μg Pam3Csk4尾静脉预处理12、24 h,小鼠尾静脉注射7×1010集落形成单位(CFU)/kg的MRSA (ATCC43300).小鼠生存率按前24h每2h观察1次,后续每6h记录小鼠存活情况,共观察1周.感染MRSA(3×108 CFU/只)6h后,菌落计数法观察肝、脾和肾等器官对MRSA的清除能力;3×108 CFU/只MRSA攻击6、12、24h后,ELISA检测小鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)和IL-10含量,实时荧光定量PCR(qPCR)检测MRSA攻击后小鼠脾脏TNF-α、IL-6、IFN-γ和IL-10的mRNA水平,以及Pam3Csk4预处理小鼠24h后,CXC趋化因子配体1(CXCL1)和Fcγ受体Ⅲ(FcγRⅢ)表达量.结果 100 μgPam3Csk4预处理能显著提高MRSA攻击小鼠的生存率,与Pam3C sk4预处理时间呈时间依赖关系;MRSA攻击小鼠的生存时间与Pam3Csk4预处理剂量相关,50μg以上剂量Pam3Csk4预处理能显著提高MRSA攻击小鼠生存率至70％以上;与对照组比较,Pam3Csk4预处理小鼠血清中TNF-α在6h和12 h均显著降低,24 h后2组间无显著差别;IL-6在处理6h内显著降低,12 h和24 h后无显著差异,IFN-γ在24 h内均显著降低,而IL-10则无显著变化;Pam3Csk4预处理24 h后,脾脏中CXCL1和FcγRⅢ表达量均显著高于生理盐水组.结论 Pam3Csk4预处理对MRSA攻击小鼠具有保护作用.
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二甲双胍对D-氨基半乳糖联合Pam3CSK4诱导的SD大鼠的急性肝损伤及炎症反应的作用及机制
目的 研究二甲双胍在D-氨基半乳糖联合Pam3CSK4(以下简称DP)诱导的SD大鼠急性肝损伤动物模型中的抗损伤及抗炎作用.方法 选取18只雄性SD大鼠腹腔注射D-氨基半乳糖(350 mg/kg)和Pam3CSK4(50μg/kg)混合液构建急性肝损伤大鼠模型,干预组大鼠分别给予PBS与二甲双胍.分别称量大鼠肝重、体质量并评估肝/体质量比变化;通过HE染色观察大鼠肝脏病理改变;收集大鼠空腹血清用于检测血清转氨酶(ALT、AST)水平;同时通过ELISA与RT-qPCR检测肝组织中促炎因子(IL-6与TNF-α)的表达水平;后通过Western blotting检测大鼠肝脏中MAPK信号通路的活化情况.结果 与对照组相比,两干预组的肝重比、血清转氨酶以及促炎因子IL-6与TNF-α的表达水平均显著升高;同时肝细胞水样变性与肝间质渗出表明DP成功构建了SD大鼠急性肝损伤模型.与PBS干预组相比,二甲双胍干预组肝重比降低,肝细胞损伤明显减轻;血清转氨酶与促炎因子的表达水平均显著下降;同时肝组织中p-ERK1/2、p-SAPK/JNK、p-P38 MAPK的蛋白表达降低,提示二甲双胍可能通过抑制MAPK信号通路发挥抗炎作用.结论 二甲双胍在DP成功诱导的SD大鼠急性肝损伤动物模型中减轻了炎症反应.
