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慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中ATF3与ATF4对γ-GCS表达的影响
目的 探究慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺组织中转录活化因子3(ATF3)与转录活化因子4(ATF4)对γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响.方法 本研究采用回顾性分析方法,选择2014 ～2016年收治的160例肺部疾病患者作为研究对象,将经胸部X线或CT检查确诊为COPD者列为观察组(80例),将非COPD者列为对照组(80例).观察两组光镜下肺病理形态学改变、肺功能指标和吸烟史.经原位杂交分析两组肺组织中的ATF3、 ATF4、γ-GCS-HS水平,采用免疫组化法检测肺组织中的ATF3、ATF4、γ-GCS-HS蛋白表达,并采用直线相关法,分析肺组织ATF3、ATF4蛋白与γ-GCS-HS表达的相关性及肺组织ATF3、ATF4、γ-GCS-HS蛋白与肺功能之间的关系.结果 经HE法,光镜下可见观察组肺组织标本有病理形态学改变,而对照组无形态学变化;观察组肺功能指标低于对照组(P＜0.05),观察组吸烟史多于对照组(P＜0.05).经原位杂交法检验,观察组中的ATF3、ATF4、γ-GCSHS的mRNA表达水平高于对照组,差弄有统计学意义(P＜0.05).经免疫组化检测,观察组中的ATF3、ATF4、γ-GCS-HS蛋白的表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).经直线相关法分析,ATF3、ATF4蛋白表达与 GCS-HSmRNA及其蛋白呈正相关关系(P＜0.01);ATF3、ATF4、γ-GCS-HS蛋白与肺功能各指标呈正相关关系(P＜0.01).结论COPD患者的ATF3、ATF4表达明显上调可影响调控γ-GCS表达,从而使γ-GCS表达上调,以发挥抗氧化作用.
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成纤维细胞特异敲除转录因子ATF3基因的小鼠模型构建
目的:构建成纤维细胞特异敲除转录因子ATF3基因的小鼠模型.方法:利用胚胎显微注射法构建在ATF3基因携带loxP位点的小鼠(ATF3fl/fl),以成纤维细胞细胞特异性表达的Col1 a2-Cre介导ATF3条件性敲除,筛选出成纤维细胞条件性敲除ATF3的小鼠(Col1 a2-ERCre:ATF3fl/fl);取鼠尾DNA进行PCR鉴定基因型,腹腔注射他莫昔芬诱导该基因敲除;12只敲除小鼠和12只同窝野生型小鼠各分为心脏缺血再灌注(I/R)组和假手术(sham)组,术后2h取心脏组织研磨后流式细胞分选成纤维细胞,进而提取mRNA并反转为cDNA,采用实时荧光定量PCR检测ATF3的表达;另取4只敲除小鼠和4只同窝野生型小鼠复制I/R模型,术后6h取心脏组织进行免疫荧光染色,观察成纤维细胞ATF3表达.结果:鼠尾DNA PCR鉴定基因型结果显示Cre基因型为阳性,ATF3 loxP基因型为纯合阳性;与假手术组相比,野生型小鼠术后心脏成纤维细胞ATF3表达明显升高[(0.02534±0.002654)vs.(0.5982±0.03495),P＜0.0001],与术后野生型小鼠相比,术后条件性敲除组心脏成纤维细胞ATF3表达明显降低[(0.5982±0.03495)vs.(0.06456±0.005704),P＜0.0001];免疫荧光共定位染色显示野生型小鼠心脏成纤维细胞ATF3蛋白表达,条件性敲除小鼠ATF3蛋白未见表达.结论:成纤维细胞特异敲除ATF3小鼠构建成功,为进一步实验奠定基础.
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绿脓杆菌致急性肺损伤小鼠的ATF3表达规律及意义
目的 探讨绿脓杆菌致急性肺损伤小鼠的ATF3表达规律及意义.方法 以荧光标记的绿脓杆菌(PA)(滴度1.5×108CFU/ml)50μl经鼻滴入C57BL/6野生型小鼠气管构建急性肺损伤模型,通过肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白含量、肺组织干湿比测定肺微血管通透性和肺水肿程度变化;采用组织切片和HE染色观察肺组织病理变化;qRT-PCR检测ATF3在野生型急性肺损伤小鼠肺组织中的表达规律.结果 经鼻滴入绿脓杆菌后导致肺微血管通透性增加和肺水肿加重,小鼠肺组织呈典型急性肺损伤病理改变,结果支持成功构建了经鼻滴入绿脓杆菌致ALI模型.ATF3表达于正常小鼠肺组织,经鼻滴入绿脓杆菌后小鼠肺组织中ATF3 mRNA的表达于0、3、6、12 h及24h时相点分别为1.006±0.136,9.954±0.624,4.578±1.463,2.342±0.122,3.249±0.680,其中在3h时相点达高峰,随之逐渐下降,于24 h时相点基本能回到正常水平.结论 ATF3作为负性调控因子对绿脓杆菌致急性肺损伤小鼠有一定保护作用.
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结直肠癌组织ATF3及其靶基因Cyclin D1与Maspin表达的临床意义分析
目的:检测转录激活因子3 (ATF3)及其靶基因Cyclin D1与Maspin在结直肠癌组织芯片中的表达,探讨ATF3表达在结直肠癌发生、发展中的意义.方法:构建含结直肠癌及癌旁相对正常肠黏膜的组织芯片,应用免疫组织化学检测ATF3、Cyclin D1及Maspin的表达情况.结果:ATF3、Cyclin D1与Maspin在结直肠癌中阳性表达率分别为70.3％、51.4％和59.5％,明显高于癌旁正常组织的21.6％、2.7％和13.5％,差异有统计学意义,x2值分别为35.252、44.411和33.689,P值均为0.000;ATF3与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小及肿瘤分化程度无关,而与浸润程度和淋巴结有无转移有关,浆膜层表达(83.3％)高于肌层(38.9％),有淋巴结转移(92.3％)高于无淋巴结转移(45.7％),x2值分别为13.290和17.110,P值均为0.000; Cyclin D1与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位及肿瘤大小无关,而与病理学分级、浸润程度和淋巴结有无转移有关,低分化组织表达(71.4％)高于高中分化组织(39.1％),浆膜层表达(61.1％)高于肌层(28.8％),有淋巴结转移(69.2％)高于无淋巴结转移(31.4％),x2值分别为7.268、6.019和10.550,P值分别为0.007、0.014和0.001；Maspin与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、肿瘤分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移均无关,P值均＞0.05.ATF3、Cyclin D1与Maspin在结直肠癌中均高表达,ATF3与Cyclin D1在结直肠癌中表达呈正相关(r=0.362,P=0.000),与Maspin表达无明显相关(r=0.075,P=0.513).结论:ATF3表达与结直肠癌的发生密切相关,ATF3可能通过调控Cyclin D1表达而促进结直肠癌的发生发展及侵袭转移.
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ATF3在散发性单纯性尿道下裂患者包皮组织中的表达及意义
目的 检测散发性单纯性尿道下裂患者包皮组织中激活转录因子3(Activating transcription factor 3,ATF3)的表达情况,探索ATF3与散发性单纯性尿道下裂之间的关系.方法 方便选择2014年1月—2017年1月该院收治的散发性单纯性尿道下裂患者在尿道成形术中切除的包皮组织(共35例,其中轻度10例,中度15例,重度10例)作为尿道下裂组样品,单纯包皮过长(含包茎)患者在包皮环切术中去除的多余的包皮组织(共20例)作为对照组样品.通过RT-PCR方法检测实验组和对照组ATF3 mRNA的表达情况.采用SPSS 12.0统计学软件进行数据录入,构建数据库.结果 通过RT-PCR方法测得散发性单纯性尿道下裂患者包皮组织中ATF3 mRNA的相对表达量为:(0.54±0.06),对照组的包皮组织中ATF3 mRNA的相对表达量为:(0.44±0.07),从结果中可以得出在散发性单纯性尿道下裂患者的包皮组织中ATF3的表达情况比正常的尿道组织中明显增加,两组结果比较,差异有统计学意义(t=5.89,P=0.00).比较不同严重程度中尿道下裂患者ATF3 mRNA相对表达量,不同严重程度相对表达量差异无统计学意义(F=0.13,P=0.88).结论 散发性单纯性尿道下裂患者中ATF3的表达水平明显高于正常对照组,这提示ATF3与散发性单纯性尿道下裂存在着密切的关系.为将来研究ATF3在尿道下裂中产生的相关信号转导通路提供相关实验基础,及研究尿道下裂的发病机制提供理论依据.
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ATF3 MMP-2及maspin在肝细胞癌中的表达及意义
目的:检测ATF3、MMP-2及maspin在肝细胞癌(hepatoeellular carcinoma,HCC)组织芯片中的表达情况,探讨ATF3、MMP-2及maspin表达与HCC发生、发展的关系及其意义.方法:对手工制作组织芯片的方法进行改良,构建含HCC、癌旁肝组织、远癌肝组织、正常肝组织及肝内转移灶的组织芯片.应用免疫组织化学和图像分析技术检测ATF3、MMP-2及maspin的相对表达量,并分析其与各临床病理参数的关系及其意义.结果:ATF3及MMP-2在HCC中表达明显高于癌旁肝组织、远癌肝组织及正常肝组织(P<0.01),而maspin在HCC中的表达明显低于癌旁肝组织、远癌肝组织及正常肝组织(P<0.01).ATF3蛋白在女性HCC患者中的表达量高于男性患者(P<0.01),在转移组中表达高于无转移组(P<0.01);MMP-2蛋白随HCC病理学分级的升高,相对表达量降低(P<0.05),MMP-2蛋白在直径大于3cm的HCC中的相对表达量高于直径小于3cm的表达量(P<0.05),包膜侵犯组高于无包膜侵犯组(P<0.05),肝内转移灶表达量高于原发灶(P<0.05);ATF3和MMP-2均随着HCC的进展表达量逐渐增高,maspin却随着HCC病理学分级的升高,相对表达量降低(P<0.05).ATF3蛋白表达与MMP-2表达呈正相关(rs=0.13,P<0.05),与maspin表达呈负相关(rs=0.23,P<0.01);MMP-2蛋白表达与maspin表达呈负相关(rs=0.17,P<0.01).结论:在HCC组织中,ATF3、MMP-2及maspin的表达存在相关关系,ATF3、MMP-2高表达及maspin缺失表达与HCC的发生密切相关,他们可能在HCC发生发展、侵袭转移过程中发挥重要作用.选择性抑制ATF3有可能成为治疗HCC新的靶点.
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喉癌组织中SOX2和ATF3因子的表达及相关性研究
目的:探究喉癌组织中转录因子SOX2和ATF3的表达及其相关性.方法:运用免疫组织化学(S-P)法测定喉癌患者68例和相应癌旁组织20例中SOX2、ATF3蛋白的表达及其病理特性的联系.结果:喉癌中SOX2、ATF3阳性表达率分别为77.9％、72.1％,高于癌旁组织30％、15％ (P＜0.05),二者的表达与喉癌的分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P＜0.05),且二者在喉癌中的表达呈正相关性(r=0.380,P＜0.01).结论:SOX2和ATF3均在喉癌组织中高表达,且具有正相关性,推测二者是喉癌发生机制过程重要的生物学指标.
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基因芯片研究尿道下裂的基因表达差异
目的 筛选出与尿道下裂发病相关的基因.方法 尿道下裂病人的尿道或包皮组织,年龄配对的包皮过长患儿组织作为对照,提取组织mRNA,合成双股cDNA并纯化,再逆转录成cRNA,生物素标记的cRNA打成碎片后与人类基因芯片进行杂交,计算机工作站自动扫描并记录芯片上的信号强度,转化为EXCEL数据库,总共分析了22000个基因的表达差异.结果 发现一组表达有显著差异的基因,包括CYR61,CTGF,ATF3和GADD45.结论 这些表达差异的基因可能参与尿道下裂的发生和发展,为进一步研究关键基因提供了依据.
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大鼠ATF3基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定
目的:构建针对大鼠ATF3(activating transcription factor 3,ATF3)基因的特异性短发卡RNA(small hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒.方法:用DNA重组技术将针对大鼠ATF3基因不同位点所设计的5个shRNA序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中.在酶切分析及序列测定后,用脂质体将5个shRNA分别转染至大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMC),随后用Western blot检测蛋白的相对表达量来筛选佳沉默效率的shRNA.结果:限制性酶切及核酸序列分析证明重组质粒构建正确.Western blot证实在重组质粒中,shATF3-1具有佳的沉默效率.结论:成功构建了针对ATF3基因的shRNA的真核表达质粒,并且该shRNA可以特异性地降低大鼠肾小球系膜细胞ATF3的蛋白表达.
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转录因子Atf3在妊娠期大鼠胰岛中的表达及其意义
目的:探讨Atf3在大鼠妊娠期胰岛β细胞中的表达及其对体外催乳素作用下INS-1细胞增殖的影响.方法:运用RT-PCR,Real-time PCR和Western blotting检测大鼠妊娠期Atf3 mRNA及蛋白的表达;MTF法测定不同浓度催乳素作用下INS-1细胞的增殖情况;RT-PCR检测催乳素作用不同时间后INS-1细胞Atf3 mRNA的表达;Western blotting检测相应蛋白表达.结果:与正常未孕组相比,孕10.5天组Atf3 mRNA表达明显增强,孕14.5天时降至正常未孕组水平.Atf3蛋白在孕期表达亦呈一过性增强,于孕10.5天达高峰.体外不同浓度催乳素(50～1 000 ng/mb作用24 h后,INS-1细胞增殖显著增加,且呈浓度依赖性.200 ng/ml催乳素作用3 h,Aft3 mRNA表达开始增加,6 h达高峰,其后又复降低;蛋白表达则从6 h开始上调,12 h显著增加,一直持续至24 h.结论:转录因子Atf3在大鼠妊娠期表达一过性增强,且时相上早于胰岛增殖的高峰(孕14.5天),提示它可能与胰岛再生相关.另外,催乳素可促进INS-1细胞增殖,并伴随Atf3表达的相应增加,提示Atf3在催乳素介导的细胞增殖效应中发挥重要作用,且于早期即启动.
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非小细胞肺癌组织中ATF3表达及其临床意义
目的:初步探讨非小细胞肺癌中ATF3表达与临床特征及预后的关系.方法:回顾分析我院选取98例术后病理诊断为非小细胞肺癌的患者,于2007年1月～2009年5月在我院行肺癌根治术,选取同一患者距离肺癌组织≥5 cm切缘的正常肺组织作为对照组,同时分别选取正常肺组织30例及炎性肺组织30例分别进行检测.采用免疫组化法及RT-PCR检测肺组织中ATF3表达水平,并结合肺癌患者随访数据运用Kaplan-Meier方法进行生存期分析.结果:ATF3在非小细胞肺癌中呈高表达率,ATF3表达与淋巴结转移及TNM分期有显著差异性(P＜0.05).生存分析提示ATF3的阳性组的生存期较ATF3阴性组的低(P ＜0.001).结论:ATF3蛋白在非小细胞肺癌表达水平与癌旁组、正常肺组织组及炎性肺组织的表达水平有显著差异性;且ATF3蛋白表达在淋巴结转移情况和TNM分期中有相关性;ATF3表达水平可作为肺癌患者术后预后判断的指标之一.
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ATF3与肿瘤的研究进展
正常细胞向肿瘤细胞转化的微环境中,细胞会碰到很多的应激信号,包括遗传毒性的损害,癌基因的激活,端粒的侵蚀,缺氧,营养剥夺等.此时细胞中一些内在的机制就会被激活从而去抑制或减少它们的损害.明显的例子就是P53基因在应答中抑制或杀死这些细胞.还有的例子就是通过癌基因的应激引起c-myc和E2F1来触发细胞凋亡.在研究肿瘤的发生发展的机制中,细胞在自我防卫和消除应激反应基因的研究扮演着重要的角色.下面就ATF3在肿瘤中的研究进展做一综述.
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膀胱尿路上皮癌中ATF3的表达及意义
目的 探讨膀胱尿路上皮癌中转录因子ATF3的表达及其临床意义.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法 检测32例膀胱癌组织和14例正常膀胱粘膜中ATF3 mRNA和ATF3蛋白的表达,分析其表达与肿瘤病理分级、临床分期的关系.结果 膀胱癌组织中ATF3 mRNA相对表达量稍高于正常膀胱粘膜组织,浸润膀胱癌组织中ATF3 mRNA相对表达量稍高于浅表膀胱癌组织,但差别均无显著性.ATF3蛋白在膀胱癌组织和正常膀胱粘膜中的阳性表达率分别为93.7%(30/32)、21.4%(3/14),差异有显著性.结论 ATF3表达参与了膀胱尿路上皮癌的发病过程,进一步研究其功能有可能揭示膀胱癌的发病机制.
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辐射诱导蛋白ATF3功能研究
目的 阐明辐射损伤中ATF3蛋白诱导表达的生物学功能及其调控机制,为探讨辐射损伤防护的新方法提供依据.方法 HCT116(Tet-off)细胞分为4组,即对照组(细胞未进行任何处理)、诱导组(加入诺考达唑诱导ATF3蛋白表达)、照射组(单纯接受射线照射)、照射+诱导组(细胞加入诺考达唑诱导ATF3蛋白表达后接受射线照射).流式细胞术分析细胞周期变化.Caspase decay分析细胞凋亡.克隆形成率测定细胞增殖.结果 与对照组相比较,诱导组细胞周期出现G1期阻滞.表达ATF3蛋白的细胞内出现Caspase 3和多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)裂解,对照组则未出现2种蛋白的裂解.诱导组的细胞克隆形成率(15.09％)低于对照组(21.13％),但高于照射组(2.25％)和照射+诱导组(5.24％).结论 ATF3表达可诱导细胞周期G1阻滞、细胞凋亡和增殖能力下降,且对于受照射的细胞可能有一定的辐射保护作用.
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ABCA1敲低对小鼠巨噬细胞中Pam3CSK4引起的炎症反应的双向调节作用
目的 检测ABCA1敲低对巨噬细胞中Pam3CSK4引起的炎症应答的影响.方法 构建小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的ABCA1敲低的稳定细胞系,以TLR2配体Pam3CSK4刺激该细胞系建立炎症反应细胞模型,在该细胞模型上检测相关促炎和抗炎细胞因子转录水平的表达变化.结果 ABCA1敲低的RAW264.7稳定细胞株在Pam3CSK4刺激后,IL-1β,TNF-α和IL-6表达发生显著上调(P<0.01),而转录抑制因子cAMP依赖性转录因子3(ATF3)也发生显著上调(P<0.01);与此同时,ATF蛋白家族中其它因子ATF1,ATF2,ATF4和ATF5转录水平没有发生显著变化.结论 在巨噬细胞RAW264.7中,ABCA1敲低显著上调Pam3CSK4引起的促炎因子IL-1β,TNF-α和IL-6的表达的同时,也显著上调了具有抗炎效应的ATF3的表达,其对炎症反应的影响可能并非是单向的促炎作用,而是发生双向的调节,而ABCA1参与上调ATF3表达的机制可能也与其ATF蛋白家族其他成员的上游调节机制不同.
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甲基化转移酶G9a介导的组蛋白修饰事件调控ATF3表达及神经元凋亡
目的 探讨协同c-Jun/ATF2调控ATF3表达的染色质重塑事件及对神经元凋亡的作用.方法 小脑颗粒神经元凋亡刺激后检测组蛋白H3乙酰化水平的变化与ATF3表达的变化.G9a抑制剂BIX-01294处理神经元,Western Blot检测ATF3的表达、H3的甲基化变化,核染色检测神经元的凋亡率.结果 神经元凋亡时诱导ATF3表达,H3第4位赖氨酸乙酰化修饰(methyl-H3-K4)增加.BIX-01294浓度依赖地抑制H3第4位赖氨酸甲基化修饰,抑制ATF3表达,抑制神经元凋亡(P＜0.05).结论 神经元凋亡时,G9a介导的H3第4位赖氨酸甲基化修饰调控ATF3表达及凋亡发生.
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大黄芪汤抑制化疗所致Lewis肿瘤肺转移作用及机制研究
目的:研究大黄芪汤抑制化疗所致lewis肿瘤肺转移的作用及机制.方法:40只C57BL/6小鼠随机分为对照组、中药组、化疗组、联合中药组,每组各10只.对照组单予生理盐水腹腔注射,中药组用生理盐水腹腔注射联合大黄芪汤灌胃,化疗组小鼠予顺铂腹腔注射,联合中药组予顺铂腹腔注射联合大黄芪汤灌胃.化疗末次后4d,对所有小鼠尾静脉注射lewis细胞.20 d后检测小鼠肺内转移病灶数、瘤重,并分析瘤周肺组织ATF3、瘤体B7-H3表达.结果:1.肺内转移病灶数:对照组、中药组、化疗组、联合中药组、分别为4.7、4.9、7.6、5.5个,化疗组与其余三组分别比较显著升高,P＜0.01.2.瘤重:对照组、中药组、化疗组、联合中药组分别为1.41、1.47、1.92、1.43g,化疗组与其余三组分别比较显著升高,P＜0.01.3.瘤周正常肺组织ATF3、瘤体B7-H3表达:化疗组均高于对照组,联合中药后其表达均降低.结论:大黄芪汤可以抑制化疗所致的lewis肿瘤肺转移,其机制可能与其降低正常肺组织ATF3及肿瘤组织B7-H3表达有关.
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慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中ATF3与ATF4对γ-GCS表达的影响
目的:探讨慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中ATF3与ATF4对γ-GCS表达的影响.方法:将2017年1月-2017年12月期间在我院接受治疗的60例慢性阻塞性肺疾病患者为研究组,60例非COPD为对照组,经原位杂交分析两组肺组织中的ATF3、ATF4、γ-GCS-HS水平,采用免疫组化法检测肺组织中的ATF3、ATF4、γ-GCS-HS蛋白表达.结果:经原位杂交法检验及免疫组化检测,研究组中的ATF3、ATF4、γ-GCS-HS的mRNA表达水平高于对照组(P<0.05).结论:COPD患者的ATF3、ATF4表达明显上调可影响调控γ-GCS表达,从而使γ-GCS表达上调,以发挥抗氧化作用.
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化疗促肿瘤转移的相关机制
化疗作为肿瘤的重要治疗手段,通过直接杀伤肿瘤细胞可达到抗肿瘤的目的.但化疗在抗肿瘤同时,也有促转移的作用.本文主要从化疗促肿瘤转移相关基因、通路等方面对化疗促肿瘤转移机制进行总结.
