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R-spondin1在促进人骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用
目的:研究Wnt信号通路激活剂R-spondin1在人骨髓间充质干细胞(hBMSC)成骨分化中的作用.方法:用0、5、10、20 μg/L R-spondin1处理hBMSC,利用荧光素酶实验检测R-spondin1对hBMSC中Wnt信号通路的作用,Western blot检测R-spondin1对Wnt信号通路下游靶基因β-catenin蛋白表达的影响;在成骨分化培养基中添加20 μg/L R-spondin1诱导hBMSC成骨分化,检测R-spondin1对早期成骨分化指标ALP活性及成骨分化晚期钙沉积、成骨分化标志物OSX、OCN和成骨分化关键转录因子RUNX2表达的影响.结果:R-spondin1增强hBMSC中Wnt信号通路,R-spondin1增强ALP活性和钙沉积,促进OSX、OCN及RUNX2的表达.结论:R-spondin1增强hBMSC中Wnt信号通路的作用,促进hBMSC成骨分化.
关键词： R-Spondin1 Wnt信号通路 人骨髓间充质干细胞 成骨分化 Runx2 -
EPHA2在人骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用
目的:研究EPHA2在人骨髓间充质干细胞(hBMSC)成骨分化过程中表达的动态变化及其在成骨分化中的作用.方法:hBMSC成骨分化诱导0、4、10和14 d后分别收集细胞提取RNA和蛋白,采用Real-timePCR和Western blot方法检测EPHA2mRNA及蛋白表达;使用EPHA2的si-RNA下调EPHA2表达后进行成骨分化诱导,检测下调EPHA2表达对早期成骨分化指标ALP活性及晚期成骨分化指标钙沉积、成骨分化标志物OSX、OCN和成骨分化关键转录因子RUNX2表达的影响.结果:EPHA2在hBMSC成骨分化过程中表达逐渐上升,下调EPHA2表达能抑制ALP活性和钙沉积,抑制OSX、OCN及关键转录因子RUNX2的表达.结论:EPHA2在hBMSC成骨分化过程中表达逐渐上升,EPHA2可能通过增强RUNX2的表达从而促进hBMSC成骨分化.
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不同下颌前伸力对髁突Runx2和X型胶原表达的影响
目的:探讨不同作用方式的下颌前伸力对髁突软骨内成骨的影响.方法:将28只5周龄雄性wistar大鼠随机分配到周期性、静止性、功能性下颌前伸组及阴性对照组(n=7).各组按照设定的相关参数接受下颌前伸力刺激.实验结束时取标本,免疫组织化学染色,对Runx2、X型胶原的表达进行半定量分析.结果:Runx2和X型胶原表达动态组高(与对照组比P＜0.01),静态组和功能组较低(与对照组比P＜0.01).静态组X型胶原表达高于功能组(P＜0.01),Runx2表达静态组与功能组差异无显著性(P＞0.05).结论:不同作用方式及作用时间的下颌前伸力差异性调节髁突软骨细胞Runx2及X型胶原的表达水平.
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Runx2介导TGF-β1调控成釉细胞MMP20基因表达的研究
目的:研究Runx2在TGF-β1调控小鼠成釉细胞金属基质蛋白酶- 20(matrix metalloproteinase 20,MMP20)基因表达中的作用.方法:首先利用双荧光素酶基因报告系统分析TGF-β1对MMP20基因启动子转录活性的影响；然后利用染色体免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)方法观察Runx2与MMP20特异性结合位点之间的相互作用,并利用基因定点突变和双荧光素酶基因报告系统分析Runx2对MMP20基因启动子转录活性的影响；后运用小RNA干扰技术使Runx2基因沉默,实时定量RT-PCR技术观察TGF-β1诱导MMP20基因表达的改变.结果:TGF-β1刺激成釉细胞后,MMP20启动子在-87～+23区域转录活性无明显变化外,其他各区域转录活性均增强.利用ChIP研究发现Runx2与MMP20基因核心启动子的特征性序列“TGTGGG”相互作用；将该特征性序列由“TGTGGG”突变为“TGTAAG”后,利用双荧光素酶基因报告系统发现Runx2对MMP20基因启动子转录活性的影响减弱；利用小RNA干扰技术使Runx2基因沉默后,TGF-β1上调MMP20基因表达的作用减弱.结论:TGF-β1通过转录因子Runx2调控成釉细胞MMP20的表达.
关键词： Runx2 TGF-β1 金属基质蛋白酶-20 -
Runx 2在第三期牙本质形成过程中的分布及其意义
目的:研究Runx 2在牙髓炎症修复中的作用,探讨活髓保存的新途径.方法:建立大鼠第三期牙本质形成动物模型,用免疫组织化学染色方法研究Runx 2的表达变化及其意义.结果:Runx 2于牙髓损伤早期阶段表达于穿髓点下方细胞群;修复性牙本质形成初期于牙髓根尖部强表达,修复性牙本质形成中期表达减弱,而修复性牙本质形成末期表达为阴性.结论:Runx 2在牙髓损伤修复过程中的表达具有明显的时空特异性.
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Runt2相关基因在小鼠牙胚钟状期牙囊细胞中的表达
目的:研究Runt相关基因2(Runx2)在小鼠牙胚钟状期牙囊细胞中的表达.方法:取出生后5~7 d 的BALB/c小鼠含下颌第一磨牙牙胚的下颌骨,并采用原位杂交和免疫组化的方法,观察Runx2 mRNA及其蛋白在牙囊组织中的表达;随后再取小鼠下颌第一磨牙牙胚的牙囊组织,原代培养牙囊细胞后,分别采用RT-PCR和Western blot法检测Runx2 mRNA及其蛋白在体外培养牙囊细胞中的表达.结果:出生后5~7 d 的BALB/c小鼠下颌第一磨牙牙胚处于钟状晚期,经原位杂交和免疫组化染色观察发现,Runx2 mRNA在牙囊细胞的胞浆中有表达,而Runx2蛋白未见表达.体外培养的牙囊细胞经RT-PCR和Western blot检测发现,Runx2 mRNA呈阳性表达,但未检测到Runx2蛋白的表达,与体内牙囊细胞的表达相一致.结论:Runx2对牙根形成前期牙囊的生长发育可能具有一定的潜在作用,但可能并未直接参与.
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MTA诱导牙髓细胞矿化中Notch信号相关基因的表达
目的:通过MTA浸提液作用于人牙髓细胞(hDPCs),探究Notch信号相关基因Notch1、Notch2及Hes1的表达变化.方法:体外培养hDPCs,用0.2 mg/mL MTA浸提液共同培养后,采用Von Kossa 染色法及RT-PCR检测其钙化结节的形成情况和不同时间点Notch信号通路相关基因Notch1、Notch2、Hes1、Runx2 mRNA的表达水平.结果:Von Kossa 染色结果显示,MTA 作用于hDPCs形成钙化结节量明显多于对照组;RT-PCR检测结果显示,Notch1、Notch2 mRNA的表达水平在MTA作用3 d时明显上升(P<0.05);Runx2 mRNA表达水平随培养时间延长而升高,7、14 d时明显高于对照组(0 h)(P<0.05);而Hes1 mRNA的表达水平则一直趋于抑制状态,从培养初期就明显低于对照组(0 h)(P<0.05).结论:Notch信号通路参与了MTA 作用下hDPCs矿化调控.
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Runx2和 Osx 在修复性牙本质形成过程中的表达模式
目的：观察 Runx2和 Osx 在牙髓损伤后表达模式的变化。方法：取雄性 SD 大鼠24只随机抽取4只不作任何处理，用于正常对照；其余20只分别以双侧下颌第一磨牙为对象建立牙髓损伤模型。分别于建模后0、3、12 h 和3、7 d 各时间点从牙髓损伤组中各随机抽取4只大鼠，并取其双侧下颌第一磨牙标本制作组织切片；然后采用 HE 染色法观察各组修复性牙本质的形成情况，并采用免疫荧光染色法检测 Runx2、Osx、DSPP 的表达模式。结果：HE 染色显示，损伤后7 d，在损伤下方可见明显的修复性牙本质形成。免疫荧光染色显示，Runx2、Osx 和 DSPP 主要表达于损伤下方，其中 Runx2的表达呈“抛物线”趋势，即损伤后3 d 时表达为强烈（P ＜0．05），此后逐渐下降；Osx 和 DSPP 的表达均呈逐渐上调的趋势，Osx 的表达在损伤后7 d 时上调为明显（P ＜0．05），而 DSPP 的表达则在损伤后3 d 时即显著增强并持续至损伤后7 d（P ＜0．05）。结论：Runx2、Osx 和 DSPP 在牙髓损伤后的不同时期具有不同的表达模式。
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骨转录因子Runx2和骨桥蛋白OPN在人乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌微钙化的关系
目的 观察骨转录因子Runx2、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在人乳腺癌组织中的表达,并进一步探讨其与乳腺癌微钙化形成间的关系.方法 利用免疫组化方法观察骨转录因子Runx2和骨桥蛋白OPN在62例乳腺癌组织中的表达.根据乳腺癌患者钼靶X线片中微钙化的有无与数量多少,将62例乳腺癌分为3组,即无钙化组、少量钙化组以及大量钙化组,观察Runx2和OPN蛋白表达与不同乳腺癌微钙化之间的关系.结果 Runx2蛋白在人类乳腺癌组织中表达阳性率为72.6％(45/62). OPN蛋白在人类乳腺癌组织中表达阳性率为79.0％(49/62). Runx2和OPN蛋白的阳性表达与乳腺癌钼靶X线片中微钙化的出现和数量密切相关,随着微钙化从无到有以及由少至多,Runx2(x2=15.686,P＜0.05)和OPN(x2=16.161,P＜0.05)蛋白的阳性表达率呈逐步增高的趋势.但Runx2和OPN阳性表达与乳腺癌钼靶片中微钙化形态无关.结论 Runx2和OPN蛋白在人类乳腺癌组织中高表达,其可能参与了乳腺癌微钙化的形成过程.
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miR-34a对人脂肪间充质干细胞成骨向分化的调控
目的 探讨miR-34a对人脂肪间充质干细胞(hASCs)成骨分化中相关蛋白的表达及相关作用机制.方法 从西南医科大学附属医院接受选择性抽脂手术或其他腹部手术的捐赠者获得脂肪组织,并分离培养hASCs.分别使用miR-34a模拟物、抑制剂和阴性对照转染hASCs,并通过逆转录-聚合酶链反应检测miR-34a在hASCs成骨分化各时间点的表达,Western blot检测成骨细胞中RBP2、RNUX2、P27蛋白表达情况,用双荧光素酶报告基因测定系统测定海肾和萤火虫萤光素酶活性.结果 与阴性对照组相比,在转染第0、4、8、12天,miR-34a模拟物组的细胞miR-34a表达水平显著升高(P<0.05),而miR-34a抑制剂组显著降低(P<0.05).miR-34a模拟物组RBP2蛋白表达降低,而miR-34a抑制剂表达增加.双荧光素酶报告测定证实RBP2是miR-34a的直接靶标.此外,miR-34a模拟物组RUNX2和P27蛋白表达上调,而miR-34a抑制剂表达下调.结论 miR-34a在hASCs成骨分化中起促进作用,并可能通过靶向RBP2起作用.
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苯妥英钠对大鼠牙周膜干细胞迁移及成骨分化的影响
目的 在体内微环境中研究局部应用苯妥英钠对大鼠牙周膜干细胞迁移及成骨分化的影响.方法 54只SD雄性大鼠建立下颌骨创伤模型,创伤局部使用预定浓度的苯妥英钠,将大鼠随机分为实验组和对照组.实验组于术后通过舌下静脉注入BrdU标记的大鼠牙周膜干细胞,对照组于术后通过舌下静脉注入等量的PBS,每组每个浓度分别于术后1、2、4周时腹腔麻醉后脱颈处死大鼠3只,采用免疫组织化学染色和图像分析软件测定创伤区BrdU、骨桥蛋白(OPN)、RUNX2的表达,并用SPSS 18.0统计分析软件进行多因素方差分析.结果 40μg/mL PHT+ rPDLSCs组和100μg/mL PHT+rPDLSCs组BrdU阳性细胞数明显多于20 μg/mL PHT+rPDLSCs组与rPDLSCs,差异有统计学意义(P＜0.05);40μg/mL和100 μg/mL PHT+ rPDLSCs与rPDLSCs相比、PHT和空白组相比、PHT+ rPDLSC与PHT相比差异有统计学意义(P＜0.05);40 μg/mL和100 μg/mL PHT组OPN和RUNX2的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 40μg/mL和100 μg/mL PHT在骨组织修复的早期可以促进缺损附近的牙周膜干细胞迁移至缺损区域,并增殖分化为成骨细胞,促进骨组织的愈合.
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Runx2在骨形成中的作用及调控
正常情况下,骨形成和骨吸收处于动态平衡.Runx2(runt-related transcription factor 2)是骨发育过程中重要的转录因子,对成骨细胞的分化、软骨细胞成熟、破骨细胞的分化及细胞外基质的分泌都有重要的调控作用.因此,研究Runx2基因的表达调控、传导通路十分必要,对治疗骨代谢疾病具有重要意义.本文将从Runx2的结构功能和表达调控对成骨细胞的影响进行阐述.
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Runx2基因与骨相关疾病的研究
Runx2是骨发育过程中调节骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化和成熟关键的转录因子,它通过多条途径参与骨代谢的调控,可影响成骨细胞及破骨细胞活动从而控制骨形成与骨吸收,并与很多骨相关疾病的形成有很大关系,Runx2基因多态性的研究为疾病的早发现及治疗提供新的思路及治疗靶点。
关键词： Runx2 锁骨颅骨发育不良综合征 骨质疏松症 骨肉瘤 脊柱后纵韧带骨化 -
唑来膦酸对MC3T3-E1细胞增殖及Runx2、Osterix表达变化的影响
目的 研究唑来膦酸(ZA)对前成骨细胞(MC3T3-E1细胞)增殖及Runx2、Osterix表达的影响.方法 以不同浓度(10-3mol/L、10-8mol/L)ZA处理体外培养的MC3T3-E1细胞,采用四唑蓝比色试验(MTT)检测ZA对MC3T3-E1细胞增殖的影响;以qRT-PCR法检测成骨细胞分化相关基因Runx2、Osterix mRNA表达情况;以Western免疫印迹法检测Runx2、Osterix蛋白表达水平.结果高浓度(10-3 mol/L)ZA能抑制MC3T3-E1细胞增殖,作用48 h后与对照组具有显著性差异(P<0.05),低浓度(10-8mol/L)ZA对MC3T3-E1细胞增殖无明显影响(P>0.05).高浓度(10-3 mol/L)ZA可降低Runx2、Osterix mRNA表达水平,与对照组相比差异具有显著性(Runx2:P<0.05;Osterix:P<0.01),而低浓度(10-8mol/L)ZA可使Runx2、Osterix mRNA表达水平升高,与对照组相比差异具有显著性(Runx2:P<0.01;Osterix:P<0.01).结论高浓度ZA明显抑制MC3T3-E1细胞增殖,通过影响Runx2及其下游基因Osterix表达促进成骨细胞分化.
关键词： 唑来膦酸 MC3T3-E1细胞 增殖 Runx2 Osterix -
橙皮素对体外培养人牙周膜细胞增殖及骨分化能力的影响
目的 探讨在不同浓度橙皮素作用下,人牙周膜细胞增增殖及骨向分化能力的影响.方法 体外培养人牙周膜细胞并进行组织来源鉴fuxiziliao定,取第3代细胞进行实验.MTT四唑盐比色法、ALP碱性磷酸酶检测试剂盒、Q-PCR检测成骨相关基因等方法观察不同浓度橙皮素对牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响.结果 MTT结果显示不同浓度的橙皮素可以促进PDLC增殖,ALP试剂盒检测结果表明橙皮素还可以促进PDLC的ALP活性,且橙皮素浓度为1μM时,PDLC的ALP OD值高.Q-PCR结果显示橙皮素可以上调PDLC内碱性磷酸酶及成骨转录因子mRNA的含量.结论 一定浓度的橙皮素对PDLC增殖及成骨分化能力有一定的促进作用,为未来橙皮素应用于临床治疗牙周疾病提供实验室依据.
