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金雀异黄酮对结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响
目的观察植物雌激素金雀异黄酮(GS)对人结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子生物学作用机制.方法采用MTT比色法和流式细胞术检测GS对HT-29细胞增殖活力和细胞周期分布的影响;Cell Death ELISA和流式细胞术从不同方面检测GS对HT-29细胞凋亡的影响;RT-PCR和Westernhlot技术检测GS对核增殖抗原PCNA、bcl-2和bax mRNA和蛋白质表达的影响.结果与对照组相比,在15～120μmol/L浓度范围内,GS能够抑制HT-29细胞增殖活力;降低S细胞分布比例,将细胞周期滞留在G2/M期;显著性诱导HT-29细胞凋亡(＞30μmol/L,P＜0.05),并呈现出良好的剂量-效应关系.检测GS对PCNA、bcl-2和bax表达的影响显示,GS能够抑制PCNA和bcl-2 mRNA和蛋白质表达,对bax的表达则表现出促进作用.结论GS通过诱导HT-29细胞凋亡而抑制其增殖活力,这些效应与PCNA、bcl-2和bax的表达变化有关.这些资料可为结肠癌的早期预防提供膳食干预新途径,并为临床新药的开发提供新方案.
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化合物209对人结直肠癌细胞HT-29的体内和体外作用
化合物209是一个新合成的氨基二硫代甲酸酯类化合物,它在体外水平可以抑制肿瘤细胞的增殖,但是化合物209的体内抗肿瘤作用及其抗肿瘤机制并不明确.本文探究了化合物209对人结直肠癌细胞HT-29的作用并初步探讨了相关机制.体外研究表明,化合物209可以显著抑制HT-29细胞的增殖；体内研究结果表明,化合物209可以显著抑制裸鼠HT-29移植瘤的生长,但是对裸鼠体重和白细胞无影响.流式细胞分析实验结果表明,化合物209可将HT-29细胞阻滞于细胞周期的G1期.同时,化合物209能上调体外培养HT-29细胞中p27,cyclin E,CDK2,cyclinD1和CDK4的表达.在体内瘤组织中上述蛋白表达情况与体外实验结果一致.这些结果说明,化合物209具有较好的抗肿瘤活性,其抗肿瘤作用与细胞周期阻滞及其相关蛋白的表达变化有关.
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原花青素对大肠癌HT-29细胞增殖及Pim-1、Bcl-2、CyclinD1基因的影响研究
目的 探讨原花青素对大肠癌HT-29细胞增殖及Pim-1、Bcl-2、CyclinD1基因的影响.方法 取对数生长期HT-29细胞,分别加入100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L、800 mg/L原花青素培养,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;采用荧光定量PCR检测Pim-1、Bcl-2、CyclinD1 mRNA表达.结果 24 h时,各浓度组原花青素对HT-29细胞增殖抑制率分别为 (4.28±0.34)%、(10.05±0.61)%、(16.67±0.63)%、(28.16±0.91)%;48 h时,各浓度组原花青素对HT-29细胞增殖抑制率分别为(11.47±1.53)%、(17.65±1.21)%、(30.82±1.99)%、(44.48±2.18)%,对Pim-1、Bcl-2、CyclinD1 mRNA表达有抑制作用(P< 0.05),且作用呈浓度依赖性.结论 原花青素体外可呈浓度依赖性抑制HT-29细胞增殖,其机制可能与抑制Pim-1、Bcl-2、CyclinD1表达有关.
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人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11的构建及其生物学特性探讨
目的:建立耐伊立替康(CPT-11)的人结直肠癌细胞株(HT-29/CPT-11),并研究其生物学特性.方法:采用药物浓度梯度递增间歇诱导法建立人结直肠癌耐药株HT-29/CPT-11;CCK-8法检测CPT-11对亲本细胞HT-29和耐药细胞株HT-29/CPT-11细胞的半数抑制率(IC50);绘制细胞生长曲线,并计算细胞倍增时间;流式细胞术分析细胞周期分布;RT-PCR检测HT-29/CPT-11和HT-29细胞MDR-1 mRNA的表达.结果:(1) 成功建立人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11,耐药指数为6.51.(2) HT-29/CPT-11耐药细胞株倍增时间较原代细胞HT-29延长[分别为(41.29±1.69)h和(27.12±2.73)h,P<0.05].(3) 流式细胞术检测细胞周期结果显示,耐药细胞株HT-29/CPT-11 G1期细胞数目增加,S期细胞数目减少(P<0.05).(4) 耐药细胞HT-29/CPT-11的MDR-1 mRNA表达水平明显高于亲本细胞株HT-29,分别为1.086±0.054和0.416±0.02(P<0.05).结论:成功构建了人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11,为下一步研究耐药机制奠定实验基础.
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ANXA3在结直肠癌细胞株中的表达
目的:探讨膜联蛋白a3(ANXA3)在结直肠癌HT-29细胞株和HT-29奥沙利铂(L-OHP)耐药细胞株中的表达.方法:采用药物浓度梯度递增间歇诱导法建立人结直肠癌耐L-OHP的耐药细胞株HT-29/L-OHP; CCK-8测定L-OHP对HT-29/L-OHP和HT-29细胞株的半数抑制率(IC50);RT-PCR分别检测HT-29细胞和HT-29/L-OHP耐药细胞中ANXA3 RNA的表达水平;蛋白质印迹法检测ANXA3在HT-29细胞和HT-29/L-OHP细胞中的表达差异.结果:(1)成功建立了耐药细胞株HT-29/L-OHP,其耐药指数为3.72;(2) HT-29/L-OHP细胞株的ANXA3 mRNA表达水平(0.897±0.260)高于HT-29细胞株(0.513±0.203)(P＜0.05);(3)耐药细胞株HT-29/L-OHP的ANXA3蛋白表达水平高于亲本细胞株HT-29.结论:ANXA3在耐药细胞株中RNA基因水平和蛋白水平表达显著高于亲本细胞株HT-29.
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奥沙利铂体外干预结直肠癌细胞株HT-29的耐药基因及相关蛋白的表达
目的:检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药细胞株HT-29/L-OHP中多药耐药基因(multidrug resistance gene 1,MDR-1)、多药耐药相关蛋白的基因及他们编码的蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein,MRP)的表达,探讨其在L-OHP耐药中的作用.方法:利用MTT法检测L-OHP对原代细胞HT-29和耐药细胞HT-29/L-OHP的半数抑制率(IC50)；利用RT-PCR及蛋白质印迹法检测HT-29/L-OHP中耐药基因及蛋白的表达情况.结果:L-OHP对HT-29和HT-29/L-OHP细胞的IC50分别为(4.15±0.17) μg·ml-1和(32.01±1.87) μg.ml-1,耐药指数为7.71；与原代细胞相比,HT29/L-OHP中耐药基因及蛋白表达均有所增加.结论:结直肠癌耐药细胞株中MDR-1、MRP基因及其编码的蛋白P-gp、MRP的表达高于原代细胞,这为预测CRC的多药耐药提供了新的依据.
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布氏镜检查丁酸钠影响HT-29细胞动态变化的研究
目的 观察丁酸钠对结肠癌HT-29细胞形态和生物学特性的影响.方法 多功能透射显微镜(布氏镜)动态观察丁酸钠作用前后HT-29细胞的生长状态、细胞运动及贴壁过程的变化.结果 丁酸钠5 mmol/L作用24 h后,HT-29细胞数量明显减少,细胞巢变小,巢内细胞数减少;细胞变成圆形,细胞大小趋于一致;细胞核内染色质呈块状聚集,折光性降低,呈现出凋亡细胞形态;贴壁过程明显变缓.结论 丁酸钠可以改变HT-29的生长状态,抑制其生长;布氏镜可以动态地观察药物作用前后培养细胞的形态、微细结构及运动的变化,是一项先进的、具有实用价值的检查技术.
关键词： 多功能透射显微镜(布氏镜) 丁酸钠 HT-29细胞株 -
pcDNA3.1/DLC-1重组质粒的构建及其在HT-29细胞中的表达
目的 构建和表达DLC-1(deleted in liver cancer)基因重组质粒.方法 用PCR法得到DLC-1基因片段,此基因片段带有Xba I和BamH I两个酶切位点,然后将此片段和真核表达载体pcDNA3.1连接,转化大肠杆菌DH5a,利用脂质体介导将pcDNA3.1/DEC-1重组质粒转染到结肠癌HT-29细胞中,再用RT-PCR法检测重组质粒的表达.结果 重组质粒经Xba I和BamH I双酶切和测序与DLC-1基因序列一致;利用脂质体介导将pcDNA3.1/DLC-1重组质粒导入HT-29细胞,获得了DLC-1基因的表达.结论 成功构建pcDNA3.1/DLC-1重组质粒并在HT-29细胞内表达.
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熊果酸对结肠癌细胞作用机制的初步研究
目的:探讨熊果酸对结肠癌细胞株HT-29凋亡的作用机制.方法:不同浓度的熊果酸处理HT-29细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色检测熊果酸对HT-29细胞的增殖抑制效应,采用形态学、TUNEL法、流式细胞术检测细胞凋亡的发生,应用免疫组织化学法检测凋亡相关基因caspase-9,bax表达的变化.结果:熊果酸对HT-29细胞有中度增殖抑制效应,HT-29细胞出现显著的细胞凋亡征象:TUNEL显示细胞固缩,核染色质聚集或断裂,形成凋亡小体.流式细胞术检测在G1期之前出现sub-G1峰,凋亡率高为11.63%,熊果酸的作用具有浓度和时间依赖性.细胞凋亡过程中,凋亡相关基因caspase-9和bax的表达逐渐增强.结论:熊果酸通过促进caspase-9的活化、上调bax的表达,对HT-29细胞具有凋亡的作用.
