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Bradford法测量不同加工工艺鹿茸蛋白含量研究
目的:通过测定不同加工工艺鹿茸中可溶性蛋白质的含量,为鹿茸加工工艺的优选提供理论依据.方法:采用Bradford法分别测定鲜品鹿茸、鲜品去血鹿茸、煮炸鹿茸、直接冻干鹿茸、匀浆鹿茸、冻干加保护剂鹿茸、冻干未加保护剂鹿茸、冻干加保护剂40℃,10天鹿茸样品中的蛋白质含量,通过Kruskal-Wallis检验进行统计学分析不同加工工艺对鹿茸质量的影响.结果:不同加工工艺鹿茸中的蛋白质含量由大到小依次为鹿茸鲜品、直接冻干、匀浆鹿茸、冻干未加保护剂、冻干加保护剂40℃10天、冻干加保护剂、鲜品去血鹿茸、煮炸鹿茸.经秩和检验统计分析,与鹿茸鲜品相比,其它各组的蛋白质含量均显著降低(P≤0.05);与煮炸鹿茸相比,其它各组的蛋白质含量均显著提高(P≤0.05);此外,鹿茸匀浆组显著低于鹿茸直接冻干组(P≤0.05);鹿茸冻干品组显著低于鹿茸匀浆组和鹿茸直接冻干组(P≤0.05).结论:鹿茸加工过程中的冻干、粉碎、匀浆、加热等工艺均会影响鹿茸中蛋白质的含量.加工工艺的步骤越多,工艺越复杂,对活性蛋白质成分的破坏作用越大.特别是鹿茸传统煮炸工艺中的高温加热与去血操作极易造成鹿茸中活性蛋白质成分的破坏和损失.与传统煮炸工艺相比,冻干工艺在低温下进行,有利于保持鹿茸中蛋白类成分的含量和活性.
关键词： 鹿茸 考马斯亮蓝G-250 蛋白质 含量测定 -
响应面法优化考马斯亮蓝G-250溶液的配制
试验研究了各组分磷酸、乙醇、考马斯亮蓝G-250在考马斯亮蓝G-250溶液中的作用及其对测定蛋白质浓度灵敏度和准确度的影响,结合全波长扫描光谱法分析了溶液配制过程中的变色机理.在此基础上,以一系列牛血清白蛋白溶液标准浓度和测定值之间的差值平方和的均方(S值)为响应值,采用单因素试验和响应面分析法优化考马斯亮蓝G-250溶液的配制条件.结果表明,乙醇是用来降低水溶液的极性环境,促进考马斯亮蓝G-250的溶解；磷酸是为考马斯亮蓝G-250表面电荷发生变化的促进剂；两者构成了影响变色灵敏度的主要因素,考马斯亮蓝G-250分子在溶液中不同的存在形式使反应体系呈现出从蓝色→绿色→棕红色等颜色变化；响应面优化配制条件为:60 mg/L考马斯亮蓝G-250、50 mL/L 95％乙醇、130 mL/L 85％磷酸时,S值小值为2.07,即在此配制条件下的牛血清白蛋白测定值与标准值接近.同时以不同标准蛋白质为试样对所配制的溶液进行准确度和灵敏度试验,结果表明对牛血红蛋白、γ-球蛋白测定准确度和灵敏度较好,对胰蛋白酶、胃蛋白酶灵敏度较差,主要原因是由于蛋白质组成差异所引起的.
关键词： 考马斯亮蓝G-250 磷酸 乙醇 响应面 优化 -
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法
目的 建立一种操作简便、快速、灵敏度高、无毒的蛋白质电泳染色方法.方法 利用考马斯亮蓝G-250(CBB G-250)在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后对蛋白质条带进行染色,对不同染色条件进行探讨,并与考马斯亮蓝R-250(CBB R-250)染色法进行比较.结果 CBB G-250染色法试剂无毒,背景浅,经改良其灵教度与CBB R-250染色法相当,达到0.1～0.5μg.结论 CBB G-250染色方法简单经济,灵敏度能够满足一般要求,适用于蛋白质电泳结果的快速分析.
关键词： SDS-聚丙烯酰胺胶电泳 染色方法 考马斯亮蓝G-250 灵敏度 -
紫外分光光度法测定IL-2靶向5-FURP脂质体中IL-2的含量
目的:建立测定白细胞介素-2(IL-2)靶向5-氟尿苷棕榈酸酯前药(5-FURP)脂质体中IL-2含量的方法.方法:在样品溶液中加入考马斯亮蓝G-250溶液染色,以空白脂质体为空白,在595 nm波长处照分光光度法测定IL-2的吸光度,并计算含量.结果:IL-2检测浓度的线性范围为1～100μg·mL~(-1)(r=0.999 7);平均回收率为99.26%,RSD=0.59%(n=5).结论:本方法操作简便、快速、检测灵敏、重复性好,可用于该脂质体中IL-2的含量测定.
关键词： 白细胞介素-2 考马斯亮蓝G-250 5-氟尿苷棕榈酸酯前药 含量测定
