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HCG11靶向结合miR-543调节血肿瘤屏障通透性
目的 研究HCG11和miR-543对血肿瘤屏障通透性的作用及可能机制.方法 应用Real-time PCR检测人脑微血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)和人胶质瘤微血管内皮细胞(glioma endothelial cells,GECs)中HCG 11和miR-543的表达以及二者的结合作用.应用Lipo3000将HCG11表达沉默和/或miR-543过表达质粒载体分别转染GECs,验证转染效率后,通过测量跨内皮细胞阻抗值(transendothelial electric resistance,TEER)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)渗透量,检测血肿瘤屏障通透性.应用Real-time PCR和Western blot检测紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的表达.荧光素梅报告基因系统分析miR-543与HCG11的结合作用.结果 HCG11在GECs中表达显著增加,miR-543在GECs中表达显著降低;HCG11表达沉默、miR-543过表达均显著降低TEER值,增加HRP渗透量,降低ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表达水平.MiR-543与HCG11存在靶向结合作用.HCG11表达沉默显著增加miR-543的表达,增加血肿瘤屏障通透性.结论 HCG11通过靶向结合miR-543调节血肿瘤屏障通透性.
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miR-543对胶质瘤细胞SHG-44增殖和凋亡的影响
目的:观察miR-543对人胶质瘤细胞SHG-44增殖和凋亡的作用.方法:设计并合成miR-543寡核苷酸模拟物(miR-543 mimic)及阴性对照mimic NC序列、寡核苷酸抑制物(miR-543 inhibitor)及阴性对照inhibi-tor NC序列,将人胶质瘤细胞SHG-44株分为Control(对照组)、mimic NC组、inhibitor NC组、miR-543 mimic组和miR-543 inhibitor组,各组细胞转染相应序列;Real-time PCR检测miR-543及其靶基因氨酰基-tRNA合成酶相互作用多功能蛋白3(AIMP3) mRNA的表达,应用噻唑蓝细胞增殖实验(MTT)评估SHG-44细胞的增殖,应用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,应用Western Blot检测细胞周期蛋白cyclin D1、cyclinE与细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、bax的表达变化.结果:与对照组相比,转染miR-543 mimic后,SHG-44细胞中miR-543 RNA表达水平显著上调(P＜0.01),其靶基因A1MP3 mRNA表达水平显著下调(P＜0.0l);转染miR-543 inhibitor后,细胞中miR-543 RNA表达水平显著下调(P＜0.01),AIMP3 mRNA表达水平显著上调(P＜0.01);转染miR-543 mimic后,细胞增殖水平显著降低(P＜0.0l);转染miR-543 inhibitor后,细胞增殖水平显著升高(P＜0.01);转染miR-543 mimic后,细胞处于G1期的细胞数量明显增加(P＜0.0l),同时细胞凋亡率也显著增加(P＜0.0l),而转染miR-543 inhibitor后细胞凋亡率显著减少(P＜0.0l);Westm Blot结果显示,与对照组相比,转染miR-543 mimic后,细胞周期蛋白cyclin D1、cyclinE及抗凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达显著下调(P＜0.01),促凋亡相关基因bax蛋白表达显著上调(P＜0.01);转染miR-543 inhibitor后,细胞中cyclin D1、cyclin E、Bcl-2蛋白表达显著上调(P＜0.01),bax蛋白表达显著下调(P＜0.0l).结论:miR-543可能通过下调细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin E及抗凋亡相关基因Bcl-2的表达,上调促凋亡基因bax的表达进而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.
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miR-543在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞侵袭与转移的影响
目的:研究微小RNA-543(microRNA-543,miR-543)在宫颈癌组织中的表达,以及miR-543对宫颈癌细胞转移及侵袭的影响.方法:应用荧光实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测正常宫颈组织及宫颈癌组织中miR-543的表达水平.沉默宫颈癌细胞中miR-543的表达后,应用划痕实验检测miR-543对宫颈癌细胞迁移距离的影响,应用Transwell实验检测miR-543对宫颈癌细胞转移和侵袭的影响.结果:miR-543在宫颈癌组织中的表达显著高于正常宫颈组织.沉默宫颈癌细胞中miR-543的表达,宫颈癌细胞的迁移距离显著缩短、细胞转移及侵袭能力受到明显抑制.结论:miR-543在宫颈癌组织中表达升高,并可促进宫颈癌细胞转移与侵袭.
