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茶多酚与茶色素对大鼠肝癌前病变组织细胞周期调节因子的影响
目的利用大鼠肝癌前病变模型探讨茶多酚和茶色素对细胞周期因子的影响.方法采用改良的Solt-Farber大鼠肝癌癌前病变模型,分别饮用0.1%或0.1%茶多酚,喂养56 d.采用Western blot方法观察细胞周期素D1、P21WAF1/CIP1、GADD45和PCNA蛋白的表达;用RT-PCR在mRNA水平观察Cdk4的表达.结果茶多酚和茶色素显著抑制细胞周期素D1、Cdk4和PCNA表达,诱导P21WAF1/CIP1和GADD45蛋白表达.结论茶多酚和茶色素通过调节细胞周期调节因子而诱导细胞周期阻滞,抑制细胞过度增殖.
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c-myc、Rb及细胞G1期调控蛋白在乳腺癌中的表达
目的探讨乳腺癌中c-myc、Rb蛋白及cyclin E、cyclin D1等细胞G1期调控蛋白的表达、相互关系及其意义.方法应用免疫组化检测57例乳腺癌患者组织中4种蛋白的表达情况.结果c-myc、cyclin E及cyclin D1在乳腺癌中表达的阳性率均高于乳腺纤维腺瘤(p＜0.05);Rb在乳腺癌中的阳性率低于乳腺纤维腺瘤(P＜0.05).乳腺浸润性导管癌中cyclin E的表达与c-myc蛋白正相关.乳腺导管内癌中cyclin D1的表达与Rb蛋白正相关.结论在乳腺浸润性导管癌发展的不同阶段,细胞周期异常的机制可能不同.cyclin D1在乳腺导管内癌中的过表达可能部分依赖于Rb蛋白的表达.c-myc引起的细胞周期调控异常在乳腺癌发病中为较晚期事件.细胞周期调控成分的异常与乳腺癌的发病机制关系密切.
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益气解毒方对TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻咽黏膜上皮细胞周期相关蛋白的影响
目的 研究益气解毒方对TgN (p53mt-LMP l)/HT转基因小鼠鼻咽黏膜上皮细胞周期相关蛋白p53、p21、CDK2和cyclinD1的影响.方法 TgN (p53mt-LMP1)/HT转基因小鼠随机分为3组,分别为模型组(MG)、益气解毒方干预组(YG)、维甲酸阳性对照组(TG),每组24只;同品系C57BL/6J鼠24只作对照组(CG).各组均用诱癌剂二亚硝基哌嗪进行处理(每次剂量73 mg/kg,每周2次,共28次).采用免疫组织化学染色法检测小鼠鼻咽黏膜上皮细胞周期相关蛋白p53、p21、CDK2和cyclinD1的表达水平,并采用Western blot法进行验证.结果 YG组、TG组及CG组p53蛋白和cyclinD1蛋白表达均显著低于MG组(P＜0.05);YG、TG及CG组p21蛋白表达量高于MG组,差异有统计学意义(P＜0.05)；各组CDK2蛋白表达量差异无统计学意义.结论 益气解毒方逆转鼻咽黏膜癌前病变的发展可能与下调cyclin D1蛋白和上调p21蛋白表达有关.
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儿童未成熟畸胎瘤的临床病理与生物学行为分析
目的 探讨儿童未成熟畸胎瘤病理形态特征、生物学行为的评估及治疗方法的选择.方法 收集39例未成熟畸胎瘤临床资料,观察病理形态,并结合免疫组织化学cyclinD1、p27、Ki-67标记及30例随访资料对预后判断进行分析.结果 39例未成熟畸胎瘤中位于骶尾部12例、睾丸12例、腹膜后5例、卵巢4例、腹部4例、纵隔2例;病理分级1级16例、2级8例、3级15例.7例含灶状卵黄囊瘤结构(YST),用于病理诊断分级的未成熟神经上皮组织主要包括:原始神经管、未成熟的菊形团样结构、未分化的神经母细胞、原始神经外胚层样组织结构.cyclinD1在各病理分级中的阳性表达分别是3、4、9例;p27过表达分别8、3、6例;Ki-67过表达分别是3、4、13例.随访到30例,2例病理分级3级的病例术后复发,其中1例含灶状YST;1例成熟畸胎瘤术后复发.结论 cyclinD1、Ki-67的表达与病理分级有关,可作为预后的判断参考指标;p27的表达与病理分级无相关性,可进行肿瘤细胞的定性观察.儿童未成熟畸胎瘤的预后不同于成人,患者年龄小于1岁的骶尾部单纯性未成熟畸胎瘤,临床手术切除完整,病理分级在2级以下,不进行手术后化疗,但应密切随访;1岁以内的睾丸单纯性未成熟畸胎瘤,临床Ⅰ期,无论病理分级如何,不需要进行术后化疗,但应密切随访.儿童卵巢未成熟畸胎瘤病理分级2级以上,不论年龄,应手术后进行化疗.未成熟畸胎瘤伴有灶状YST结构与复发有关.
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细胞周期蛋白G1在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床病理学意义
目的 探讨喉鳞状细胞癌组织中细胞周期蛋白(cyclin)G1表达与临床病理参数及p53、癌组织微血管密度(MVD)的关系,并分析其作为预测喉鳞状细胞癌预后指标的可能性.方法 采用免疫组织化学(EnVision法)检测81例喉鳞状细胞癌组织中cyclin G1、p53的表达情况,用CD34标记新生血管内皮细胞,在显微镜下观察MVD.同时测它们在20例癌旁正常喉黏膜中的表达.结果 与正常喉黏膜组织相比,肿瘤组织中cyclin G1、p53表达及MVD均明显增加.喉鳞状细胞癌组织中cyclin G1、p53的阳性表达率分别为61.7%(50/81)和65.4%(53/81),在p53蛋白表达阳性和阴性的喉鳞状细胞癌组织标本中,cyclin G1蛋白阳性率分别为71.7%(38/53)和42.9%(12/28),cyclin G1表达与p53有相关性(Kappa值为0.281,P=0.011).cyclin G1蛋白阳性组平均MVD为(51.23±16.46),阴性者(30.74±12.29),其差异有统计学意义(P=0.005).cyclin G1高表达与肿瘤组织分化程度、颈淋巴结转移以及5年生存率均有统计学意义(P值分别为0.002、0.013和0.032).结论 cyclin G1蛋白在喉鳞状细胞癌中存在高表达,并与p53、MVD关系密切,cyclin G1异常表达可能在喉鳞状细胞癌发生、发展及转移过程中发挥重要作用,并可能作为判断患者预后的指标之一.
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原发性肝细胞癌中5种细胞周期蛋白的表达及其临床意义
目的探讨原发性肝细胞癌中5种细胞周期蛋白(cyclin)的表达及其与肝癌细胞的增殖状态、侵袭转移和乙型肝炎病毒(HBV)感染的相关性.方法应用Instrumedics公司生产的组织芯片制作仪,将273例原发性肝癌组织、144例癌旁肝组织和10例尸检非肝病死亡肝组织制成组织芯片,取样针直径2.0 mm,采用免疫组织化学方法分别检测了cyclin A、 cyclin B、 cyclin D1、 cyclin D3及 cyclin E在肝癌、癌旁肝及尸检肝组织的表达率,并分析了肝癌、癌旁肝组织中HBV感染与这5种cyclin表达间的相关性.结果共获得3个肝癌组织芯片蜡块,分别含136、143和148个位点.在273例肝癌组织标本中5种cyclin的阳性表达率分别为cyclin A 52.7%、 cyclin B 45.4%、 cyclin D1 35.9%、 cyclin D3 44.3%和 cyclin E 23.1%;在144例癌旁肝组织中分别为8.3%、5.6%、4.9%、6.3%和1.4%;10例尸检肝组织除1例cyclin D1阳性外,其余均为阴性.5种cyclin在肝癌组织中的阳性表达率均显著高于癌旁肝组织(P<0.01);组织学分级为Ⅱ、Ⅲ级的肝癌组织5种cyclin的表达高于Ⅰ级(P<0.05);除cyclin A外,伴有门静脉癌栓组的阳性率高于无癌栓组(P<0.01);HBV感染与cyclin的表达无明显相关性(P>0.05).结论各个cyclin在肝癌细胞中呈不同程度的高表达,使癌细胞周期缩短,处于细胞增殖活跃状态,并有利于肝癌细胞的侵袭转移;未发现与HBV感染有关.
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组蛋白去乙酰化酶2表达下调对宫颈癌细胞增殖和细胞周期的影响
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)表达下调对宫颈癌细胞增殖和细胞周期的影响,并分析其可能的分子机制.方法 将HDAC2小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA转染宫颈癌HeLa细胞,采用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)分析转染前后细胞增殖的变化,利用流式细胞术检测转染前后细胞周期分布的变化,采用Western blot方法分析与细胞增殖和细胞周期相关蛋白表达的变化.结果 HDAC2 siRNA能明显下调宫颈癌细胞中HDAC2蛋白的表达,其表达下调能明显抑制宫颈癌细胞的增殖.HDAC2 siRNA组中HeLa细胞在G0/G1期的细胞比率为63.3％±2.0％,显著高于未处理组(29.3％±1.7％)和对照siRNA组(29.4％±1.7％),F=354.181,P=0.000.Western blot结果显示,HDAC2表达下调能明显抑制cyclin D1、cyclin E和CDK2蛋白的表达,增加p21蛋白的表达.结论 HDAC2表达下调介导的细胞增殖抑制和周期阻滞可能与cyclin D1、cyclin E和CDK2蛋白表达的下调和p21蛋白表达的升高密切相关.
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DPC4基因转染对结肠癌细胞生长的抑制作用及其作用机制
目的研究DPC4基因转染对结肠癌细胞生长及p21WAF1 mRNA表达的影响.方法构建pcDNA3.1-DPC4真核表达质粒,利用脂质体转染技术将pcDNA3.1质粒和pcDNA3.1-DPC4质粒分别导入结肠癌细胞系SW620;采用免疫细胞化学和Western蛋白印迹检测细胞中DPC4基因的表达;通过检测细胞生长曲线、克隆形成实验研究DPC4基因转染对SW620细胞生长的抑制作用.通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞内p21WAF1 mRNA的表达.结果转染DPC4基因后,在SW620细胞中可检测到高表达的DPC4蛋白;细胞生长倍增时间(74 h)明显延长;细胞克隆形成率(21%)明显降低.DPC4基因转染后SW620细胞p21WAF1mRNA含量增加.结论 DPC4基因的高表达能够抑制结肠癌细胞的生长,DPC4基因可能通过诱导p21WAF1基因的表达而抑制结肠癌细胞的生长.
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乙型肝炎病毒X和p53对肝癌细胞生长的影响
目的探讨乙型肝炎病毒X(HBx)基因与p53在损伤情况下的相互作用及对肝癌细胞生长的影响及作用机制.方法通过构建正义及反义野生型(wt)p53,与HBx分别单转染或共转染含wtp53(+)、HBV(-)的人肝癌细胞株SMMU-7721细胞,在吡柔比星的诱导下,用流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响,及HBx对细胞周期的影响,并通过检测含p53结合位点p21Waf1启动子荧光素酶活性来观察HBx是否通过p53影响p21Waf1的表达,以及绘制细胞生长曲线观察HBx对SMMU-7721细胞生长的影响.结果在吡柔比星的诱导下,HBx能够促进细胞凋亡,转染空载体组及pcDNA3HBx组细胞凋亡率分别为5.32%和12.66%.但HBx对外源性p53诱导的细胞的凋亡具有抑制作用,转染空载体、正义pcDNA3wtp53及正义pcDNA3wtp53+pcDNA3HBx组细胞凋亡率分别为5.32%、11.72%、4.67%.同时处在G0～G1期瞬时表达及稳定转染HBx细胞数较对照组分别减少4.79%,10.25%.而且HBx可抑制p21Waf1启动子荧光素酶的活性(P<0.05)及促进细胞生长.结论细胞在DNA损伤因素的作用下,HBx可能通过抑制p53导致p21Waf1的表达降低,引起停滞在G0～G1期的细胞减少,导致肿瘤细胞仍能继续分裂增殖形成恶性生长.
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人巨细胞病毒感染对宿主细胞周期素依赖性蛋白激酶2的影响
目的 观察HCMV感染细胞周期素依赖性蛋白激酶2(Cdk2)的亚细胞定位,研究HCMV感染对Cdk2蛋白水平及对细胞周期蛋白E(CyclinE)/Cdk2激酶活性的影响.方法 通过密度抑制使细胞同步化于G0/G1期,用HCMV AD169毒株感染人胚肺成纤维细胞(HEL),用免疫细胞化学技术分别测定HCMV感染前及感染后24 h Cdk2亚细胞定位;Western Blot法测定HCMV Cdk2蛋白丰度;用免疫沉淀,激酶活性分析法检测HCMV感染细胞内Cdk2的活性.结果 接触抑制阻止在G0期细胞Cdk2游离在细胞质,HCMV感染24 h内导致Cdk2从细胞质移位到细胞核.同时HCMV感染可引起cyclinE/Cdk2激酶的强烈激活,但HCMV感染并不诱导Cdk2蛋白丰度增加.结论 HCMV感染G0/G1细胞,在24 h内导致Cdk2从细胞质移位到细胞核,使之与细胞核内的调节亚单位CyclinE结合,激活CyclinE/Cdk2激酶,使细胞周期越过G1/S限制点,进展至晚G1期.
关键词： 巨细胞病毒感染 细胞周期蛋白质依赖激酶 细胞周期蛋白类 -
细胞周期蛋白Ⅰ基因在骨髓间质干细胞诱导致瘤过程中的表达
目的 研究人骨髓间质干细胞(MSCs)诱导肿瘤的机制.方法 取18只SCID裸鼠随机分为对照组和实验组,对照组注射MSCs,实验组注射F6细胞,于第4(F6-4)、6(F6-6)、7(F6-7)周取肿瘤组织(每组3只).4例肺癌患者的肺癌标本(Lc)和癌旁标本为分别取自不同部位的手术病理标本.并用荧光差异显示技术(FDD)寻找差异基因;用PCR扩增、蛋白质印迹(WB)加以验证;实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR技术检测诱导致瘤细胞在裸鼠体内致瘤后致瘤组织基因表达水平.用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)诱导MSCs致肿瘤细胞(F6细胞).结果 FDD结果显示,细胞周期蛋白(cyclin)Ⅰ基因高表达,与PCR、WB结果一致.FQ-RT-PCR表明,cyclin Ⅰ基因在MSCs、F6及3组F6致瘤组织细胞之间的表达水平差异有统计学意义(F=12.29,P<0.01),F6组cyclin Ⅰ基因表达水平为4.49±0.40,MSCs基因表达水平为0.04±0.02,增高112倍(P<0.01).裸鼠皮下注射致瘤细胞后,第4,6,7周分离肿瘤组织内cyclin Ⅰ基因表达分别为1.82±0.80、3.30±0.43和3.68±1.67,且呈上升趋势(与MSCs对比,P分别为<0.05或<0.01).4例肺癌患者肺癌组织基因表达分别为0.15±0.02、0.58±0.23、4.82±1.12、1.21±0.60,癌旁组织基因表达分别为0.04±0.02、0.09±0.04、0.94±0.74、0.15±0.08,肺癌组织内cyclin Ⅰ基因表达明显高于癌旁组织(F=12.39,P<0.01).WB证明F6细胞cyclin Ⅰ蛋白表达为0.32±0.08,MSCs蛋白表达为0.09±0.06,增高3.6倍(t=3.86,P<0.05).结论 cyclin Ⅰ基因在MSCs诱导突变到肿瘤细胞形成过程中高表达,且在MSCs诱导肿瘤发生过程中可能发挥重要作用.
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肝癌发生中细胞周期调控的异常
肝细胞癌(HCC)的发病机制目前并不明确.1990年代,随着对细胞周期调控认识的不断深入,一系列细胞周期调节因子被证明与包括肝癌在内的一些实体肿瘤的发生发展有密切瓜礫1-7].现将对近年肝癌发生中细胞周期调节异常的研究做一扼要综述.1 细胞周期的分子调控真核生物的细胞周期进程是由一系列调控因子有序的聚合和激活来调节控制的[8].细胞的正常生长依赖于细胞周期中各种调节因子的平衡调控.参与细胞周期调控的主要因子有:细胞周期蛋白(cyclin),细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin dependent kinases,CDKs)和CDK抑制蛋白(cyclin dependent kinaseinhibitors,CDKIs)[9-16].目前已发现cyclin有A,B,C,D,E五大类和若干亚类,分别在细胞周期的不同时期合成和降解,显示时相特异性.CDKs分为CDK1-CDK7,单独的CDK亚基没有激酶活性,需与相应的cyclin结合,从而构成有蛋白激酶活性的异二聚体分子.
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胃癌雌激素受体与PCNA的关系
目的探讨雌激素在胃癌发生、发展中的作用及临床意义.方法应用流式细胞术检测31例胃癌组织、10例正常胃组织雌激素受体(estrogen receptor,ER)和细胞周期蛋白D1(cyclinD1)表达量;应用免疫组织化学法检测31例胃肠癌组织、10例正常胃肠组织中ER和增殖细胞核抗原(proliferatingcell nuclear,PCNA)蛋白表达.结果流式细胞术定量检测结果表明,胃癌组织ER表达量(FI,1.19±0.23)明显高于正常胃组织(FI,1.00±0.04,P＜0.01);胃癌组织cyclinD1表达量(FI,1.33±0.17)明显高于正常胃组织(FI,1.00±0.09,P＜0.01).胃癌组织ER表达量与cyclinD1表达量存在正相关关系(rs=0.40,P＜0.05).免疫组织化学染色结果表明,胃癌组织ER表达阳性率为45%(14/31),明显高于正常胃组织0%(0/10,P＜0.01);胃癌组织PCNA蛋白表达阳性率为97%(30/31),明显高于正常胃组织0%(0/10,P＜0.01),且胃癌组织ER表达等级与PCNA蛋白表达等级间存在正相关关系(rs=0.44,P＜0.05).结论雌激素在胃癌发生、发展中有促进细胞增殖的作用,部分胃癌很有可能是雌激素依赖性肿瘤.
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RANTES基因启动子区-28C/G多态性与2型糖尿病的相关性研究
目的 探讨正常T细胞表达和分泌的活性调节蛋白(RANTES)基因启动子区-28C/G多态性与T2DM及其慢性并发症相关危险因素的相关性.方法 运用PCR-RFLP技术对178例T2DM患者(T2DM组)和67例正常对照者(NC组)的RANTES基因-28C/G多态性进行检测.结果 NC组和T2DM组间基因型和等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05);RANTES基因-28G等位基因携带者血浆HDL-C浓度较非G等位基因携带者低且差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析:RAN-TES基因启动子区-28C/G多态性与HDL-C水平无关(P=0.228,0R=1.777),BMI与HDL-C异常呈正相关(P=0.000,OR=2.562).结论 RANTES基因启动子区-28C/G多态性可能不是昆明地区汉族T2DM发生的危险因素,超重和肥胖可能是T2DM患者HDL-C异常的危险因素.
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金雀异黄酮对成骨细胞增殖的影响及其可能的分子生物学机制
目的观察金雀异黄酮(GS)对绝经期骨质疏松患者骨膜成骨细胞增殖的影响及其分子生物学机制.方法用噻唑蓝比色法和流式细胞术分别检测GS对成骨细胞增殖活力和细胞周期分布的影响;Western-blot技术分析GS对细胞周期蛋白D和E表达的影响. 结果GS可显著提高成骨细胞增殖活力,与溶剂对照组比较,10-8mol/L、10-7mol/L和10-6mol/L GS时,细胞增殖率分别为137%、155%和161%;提高S期和M/G2期细胞分布比例,并伴有G0/G1期细胞比例降低;它莫西芬可抑制10-7mol/L和10-6mol/L GS促成骨细胞增殖效应.Western-blot的检测结果显示,10-8mol/L和10-7mol/L GS对成骨细胞处理24 h,提高细胞周期蛋白D和E蛋白质的表达(P＜0.05). 结论由于雌激素受体拮抗剂它莫西芬可抑制GS对成骨细胞的促增殖作用,表明金雀异黄酮可通过激活雌激素受体途径,表现出雌激素效应,并促进骨组织代谢中的骨形成作用.
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急性白血病患者细胞周期蛋白B1表达与耐药的关系
目的探讨细胞周期蛋白B1(cyclin B1)在急性白血病(AL)中的表达以及与耐药的关系.方法本研究对85例初治AL患者(其中敏感组47例,耐药组38例)及17例正常人采用流式细胞术检测cyclin B1、p170蛋白表达水平.采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测cyclin B1、多药耐药基因-1(mdr-1)、DNA拓扑异构酶Ⅱ的两个同工酶TOPOⅡα、TOPOⅡβ以及bcl-2的mRNA水平.结果 (1) 耐药组cyclin B1蛋白(M=12.3%)和mRNA (M=0.217)以及TOPOⅡα(M=0.236)、TOPOⅡβ(M=0.328)的mRNA表达水平明显低于敏感组cyclin B1蛋白(M=22.7%)和mRNA (M=0.563)、TOPOⅡα(M=0.514)、TOPOⅡβ(M=0.635) (P＜0.01).全部正常人cyclin B1蛋白的表达水平<5%,在相同条件下未检出cyclin B1、TOPOⅡα、mdr-1的mRNA表达.(2) 耐药组患者的p170蛋白(M=14.3%)及mdr-1(M=1.071)、bcl-2(M=0.941)的mRNA表达水平明显高于敏感组p170蛋白(M=3.6%)、mdr-1(M=0.094)和bcl-2(M=0.153)的mRNA表达水平(P＜0.01).(3) cyclin B1蛋白与TOPOⅡα、TOPOⅡβ的mRNA表达呈正相关(rTOPOⅡα=0.472,P＜0.01);(rTOPOⅡβ=0.683,P＜0.01);cyclin B1mRNA与TOPOⅡα、TOPOⅡβ的mRNA表达呈正相关(rTOPOⅡα=0.319,P＜0.05);(rTOPOⅡβ=0.527,P＜0.05).(4)cyclin B1蛋白和mRNA表达与p170、mdr-1、bcl-2等耐药蛋白、基因无统计学意义上的相关(Pp170=0.17,Pmdr-1=0.35,Pbcl-2=0.24).(5)经Binary逻辑回归分析显示cyclin B1与非典型耐药有关.结论 cyclin B1可以作为判断AL患者耐药的指标,联合TOPOⅡα、TOPOⅡβ对判断预后有价值.
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急性白血病患者细胞周期蛋白E及依赖激酶抑制剂表达的意义
目的探讨细胞周期蛋白E(cyclin E)、细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂(p27 KIP1)对成人初治急性白血病(AL)发展及预后的作用.方法用流式细胞术检测60例AL及17例对照cyclin E、p27 KIP1、多药耐药基因蛋白p170表达及细胞周期分布;逆转录-聚合酶链反应检测46例成人AL患者及17例对照的骨髓cyclin E、p27 KIP1、多药耐药蛋白的mRNA水平.结果 60例AL患者全周期及G2/M期cyclin E表达均高于对照组(P＜0.01或0.05);p27 KIP1全周期表达亦均高于对照组,但G2/M期差异无显著性(P＞0.05);cyclin E与p27 KIP1的表达呈正相关;AL患者cyclin E高表达组缓解率(44.8%)低于正常表达组(77.4%)(P＜0.01);复发率(92.3%)高于正常表达组(41.7%) (P=0.003);p27 KIP1表达对AL缓解率、复发率的影响无统计学意义(P＞0.50,P=0.89).结论 cyclin E在成人AL有异常高表达,并可能促使AL的发展,是AL缓解率、复发率的重要危险因素.
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三氧化二砷对HL60细胞作用后细胞周期素相关基因的表达
目的应用微阵列基因芯片比较三氧化二砷(As2O3)对HL60细胞作用后细胞周期素相关基因表达谱的变化.方法 As2O3作用于HL60细胞,TRIzol试剂一步法提取作用前后HL60细胞的mRNA,经逆转录反应,用Cy3标记的脱氧三磷酸尿苷(Cy3-dUTP)和Cy5-dUTP两种不同的荧光染料将处理前后的HL60细胞mRNA分别标记成两种DNA探针,并与载有一组靶基因的表达谱芯片进行杂交,通过扫描分析筛选As2O3作用前后HL60细胞表达有差异的基因;用电镜和原位凋亡检测法、流式细胞术及DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡.结果筛选出HL60细胞在As2O3作用前后表达有差异的基因共82条,主要涉及细胞周期调控类、凋亡相关蛋白及应激反应蛋白类、信号传导类等基因,其中表达上调的有34条,表达下调的有48条.流式细胞仪检测发现终浓度15 μmol/L的As2O3对HL60 细胞诱导凋亡的作用很强.对照组的细胞凋亡率为1.7%,而实验组细胞的凋亡率为26.1%.结论细胞周期素B1、增殖细胞核抗原、类胰岛素生长因子结合蛋白等可能参与As2O3诱导HL60细胞凋亡的发生机制.
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细胞周期蛋白E和p27kip1在膀胱癌中的表达及意义
目的探讨细胞周期蛋白E(cyclin E)和p27kip1在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义.方法采用免疫组化SP法观察69例膀胱癌石蜡标本中cyclin E和p27kip1的表达情况,结合临床资料进行分析.结果膀胱癌组织中cyclin E和p27kip1阳性表达率分别为42%和51%.cyclin E阳性表达率在复发肿瘤中及随病理分级升高而升高(P＜0.05),但与临床分期无关(P＞0.05);p27kip1阳性表达率随病理分级、临床分期升高及在复发肿瘤中下降(P＜0.01).cyclin E与p27kip1二者的阳性表达有显著相关性(P＜0.01).结论 cyclin E和p27kip1表达可能是判断膀胱癌生物学行为的重要指标.
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细胞周期素G在胃癌组织中的表达及其意义
目的探讨胃癌组织中细胞周期素G1(cyclin G1)和cyclin G2基因的表达及其意义.方法采用逆转录聚合酶链反应检测了55例胃癌组织、正常胃组织中的cyclin G1和cyclin G2基因的mRNA表达,流式细胞术检测cyclin G1蛋白的细胞周期分布和表达水平,对cyclin G基因进行测序分析.结果胃癌组织中cyclin G1mRNA表达的阳性率为58%,明显高于正常胃组织(18%,P<0.05),cyclin G1 mRNA与蛋白表达之间有正相关性(r=0.456,P=0.000);胃癌组织的cyclin G1蛋白表达阳性率为74.3%,正常胃组织为2.3%,二者之间差异有统计学意义(P<0.05).Cyclin G1蛋白表达于G0/G1期开始出现,在G2/M期达到高峰,有高峰延迟现象.Cyclin G2 mRNA在胃癌组织中的表达水平为0.5±0.5,正常胃组织中为2.0±0.4,两者之间差异有统计学意义(P<0.01).Cyclin G1与cyclin G2之间表达无相关性(r=-0.217,P=0.063).Cyclin G基因测序结果与genebank中cDNA序列完全一致,没有发现突变点、缺失点或移位点.结论Cyclin G的异常表达可能与胃癌的恶性程度和发生发展有关.
