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甲状腺癌中miR-106b负性调控FAM129A基因表达的作用及机制
目的 研究甲状腺癌中miR-106b的表达及其调控靶基因FAM129A表达的作用及分子机制.方法 实时定量PCR法检测miR-106b及FAM 129A基因的表达.将miR-106b的前体(agomiR-106b)转染甲状腺乳头状癌TPC-1细胞,Western blot法检测FAM129A蛋白表达,荧光素酶实验验证miR-106b与FAM 129A基因3'菲翻译区的特异性结合.结果 相对于癌旁组织,MiR-106b在甲状腺癌组织表达较癌旁组织下调明显,而FAM129A在甲状腺癌组织表达显著上调,二者呈明显的负性相关.AgomiR-106b能够显著抑制甲状腺癌TPC-1细胞中FAM 129A蛋白的表达,miR-106b能够特异性地结合FAM 129A基因的3'UTR,并抑制荧光素酶活性.结论 miR-106b与FAM129A基因的表达异常与甲状腺癌的发生相关,miR-106b在甲状腺癌细胞能靶向沉默FAM 129A基因.
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姜黄素对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞侵袭和迁移的影响
目的 姜黄素对甲状腺乳头状癌(PTC)细胞株TPC-1的侵袭和迁移影响研究较少.文中旨在探究姜黄素对PTC TPC-1细胞侵袭和迁移的影响,并探讨可能的机制.方法 将TPC-1细胞制成单细胞悬液,分别给予含不同姜黄素浓度的培养基干预分为:0μmol/L组(DMSO溶剂)以及10、20、40、60、80、100μmol/L组.CCK8法检测各组细胞存活率的抑制效应;采用划痕和Transwell实验检测姜黄素对TPC-1细胞迁移和侵袭的影响;采用RT-PCR和Western blot方法检测各组细胞葡萄糖转运蛋白1(Glut1)和膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)mRNA及蛋白的表达水平.结果 各组间细胞存活率比较差异均有统计学意义(P＜0.05).24 h后,0、10、20、40μmol/L组细胞迁徙力分别为:[(0.842±0.096)、(0.911±0.049)、(0.926±0.107)、(1.076±0.093)mm],两两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);48 h后,组间比较差异亦有统计学意义(P＜0.05).0、10、20、40μmol/L组迁移的细胞数量分别为196、142、57和17个/100倍视野,两两组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).各组间Glut1和MT1-MMP mRNA及蛋白的相对表达量组间比较差异亦有统计学意义(P＜0.05).结论 姜黄素具有抑制PTC TPC-1细胞侵袭和迁移能力,可能与降低Glut1和MT1-MMP蛋白表达有关.
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微小RNA-1243直接靶向丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2调节甲状腺乳头状癌TPC-1细胞迁移
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-1243调节丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(Akt1)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(Akt2)在人甲状腺乳头状癌细胞TPC-1中的表达及对细胞迁移的影响.方法 利用TargetScan和miRanda对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞株的miR-1243靶基因进行预测,采用双荧光素酶报告基因验证miR-1243对靶基因的直接调控.Western blot检测miR-1243对Akt1和Akt2蛋白表达的调节.迁移小室(Transwell)检测1×105个对数生长期的TPC-1细胞的迁移能力.结果 TargetScan和miRanda软件预测显示Akt1和Akt2基因是miR-1243的潜在靶基因.双荧光报告基因的相对荧光值显示,与空载体组和突变组比较,分别共转染miR-1243模拟物的Akt1或Akt2野生型组荧光素酶活性显著下降(t=3.595,P=0.009),而空载体组和突变组的荧光素酶活性差异无统计学意义(t=1.655,P=0.213).与对照处理组比较,miR-1243模拟物处理组显著抑制而miR-1243抑制物处理组促进TPC-1细胞Akt1和Akt2蛋白水平的表达(t=4.810,P=0.018),而内参基因蛋白水平均无明显变化(P=0.235).Transwell实验结果显示,miR-1243模拟物转染组迁移细胞数[(9.83±3.51)个]低于对照模拟物处理组[(18.67±4.24)个],差异均有统计学意义(t =2.692,P=0.039).与对照抑制物处理组比较[(21.33±5.35)个],miR-1243抑制物转染组迁移细胞数[(37.17±7.33)个]显著增加(t=2.472,P=0.022).结论 miR-1243通过靶向抑制Akt1和Akt2的表达进而调节TPC-1细胞迁移.
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siRNA干扰膜联蛋白AI表达对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞凋亡的影响
目的 通过小干扰RNAs(siRNA)干扰膜联蛋白A1(ANX A1)在甲状腺乳头状癌(PTC)细胞中的表达,探讨ANXA1对PTC细胞的生物学特性的影响.方法 设计并筛选使用高效的siRNA在PTC TPC-1细胞株特异性干扰ANX A1的表达,然后用流式细胞术观察ANX A1干扰后对PTC细胞TPC-1凋亡的影响.结果 筛选的siRNA可高效沉默ANX A1在PTC细胞中的表达,促进PTC细胞的凋亡.结论 siRNA干扰ANX A1表达,可促进PTC细胞的凋亡,提示ANX A1可能是PTC治疗的一个重要的生物学靶标.
