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人脐静脉血管内皮细胞缺氧复氧损伤时黏结合蛋白多糖1及细胞外信号调节酶表达与肝素酶Ⅰ的调节
背景:研究发现肝素酶可以促使肿瘤细胞的syndecan-1脱落,而且低氧增加的巨噬细胞运动也可能与硫酸已酰肝素蛋白多糖的生物合成调节相关.目的:观察肝素酶Ⅰ对缺氧复氧损伤人脐静脉血管内皮细胞黏结合蛋白多糖1及细胞外信号调节酶的调节作用.方法:采用缺氧复氧处理肝素酶Ⅰ预培养的人脐静脉血管内皮细胞,用免疫组织化学、RT-PCR及western blot枪测人脐静脉血管内皮细胞细胞黏结合蛋白多糖1、ERK2的表达.结果与结论:单纯缺氧复氧后人脐静脉血管内皮细胞的黏结合蛋白多糖1和ERK2表达轻度上调.缺氧复氧处理肝素酶预培养人脐静脉血管内皮细胞的黏结合蛋白多糖1和ERK2明显上调,与单纯缺氰复氧处理人脐静脉血管内皮细胞相比差异有显著性意义.黏结合蛋白多糖1与ERK2上调表达成正相关.结果表明,黏结合蛋白多糖1和细胞外信号调节酶参与了人脐静脉血管内皮细胞缺氧复氧损伤的病理生理过程,肝素酶Ⅰ可能通过调节黏结合蛋白多糖1来影响细胞外信号调节酶的表达.
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15-HETE参与的脑缺血再灌注损伤中p-ERK1/2表达变化的研究
目的:通过应用15-脂氧化酶(15-Lipoxygenase,15-LOX)抑制剂去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)抑制15-羟基-二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetraenoic acid,15-HETE)的生成,观察缺血再灌注损伤中大鼠脑组织磷酸化细胞外信号调节酶(phosphor-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK1/2)表达的变化,探讨p-ERK1/2在15-HETE参与的脑缺血再灌注损伤中的作用及其表达变化.方法:应用大脑中动脉线栓栓塞法(MCAO)制作大鼠脑梗死2小时再灌注模型.将大鼠随机分为三组:假手术组(sham组)、DMSO对照组、NDGA处理组.后两组再根据不同的灌注时间分为三个亚组:再灌注1小时组、再灌注6小时组、再灌注24小时组.采用TTC染色法检测再灌注24小时大鼠脑梗死体积;免疫印迹(Western blot)法测定梗死后再灌注不同时间点梗死核心区和梗死周围区的p-ERK1/2的表达.结果:假手术组仅有少量p-ERK1/2的表达.DMSO对照组梗死核心区p-ERK1/2的表达从梗死再灌注后1小时即开始逐渐升高(1.43± 0.06),6小时达高峰(2.02±0.14),24小时有所下降(1.16±0.21),与假手术组(0.62± 0.08)比较P值均＜0.01;梗死周围区p-ERK1/2表现出相同的变化趋势.与DMSO对照组比较,NDGA处理组大鼠脑梗死体积显著减小(20.10± 0.12％vs 17.24± 0.16％,P=0.009,P ＜0.05),各时间点p-ERK1/2的表达均下降.与梗死核心区相比较,梗死周围区24小时仍可检测到较高含量的p-ERK1/2(1.16± 0.21 vs 1.86±0.14),但梗死核心区表达相对较少.结论:脑缺血再灌注损伤中,p-ERK 1/2的表达增加,说明p-ERK1/2参与其中;应用NDGA后,p-ERK1/2的表达降低,脑梗死体积减小,证实p-ERK1/2参与了15-HETE介导的脑缺血再灌注损伤,并在此过程中可能参与了细胞的凋亡.
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实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经损害与脑组织中丝裂原活化蛋白激酶表达的关系
目的 观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠脑组织中丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)表达变化及其与神经损害的关系.方法 C57BL/6小鼠随机分为:EAE组(n=12),采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽(MOG35-55)制备成抗原乳剂免疫小鼠;对照组(n=10),用生理盐水处理小鼠.每日观察两组小鼠的行为学变化,并进行神经功能障碍评分.于高峰期处死小鼠,冰冻处理脑与脊髓,行苏木精-伊红染色观察脊髓组织的炎症细胞浸润,LFB染色观察脊髓组织的髓鞘脱失,蛋白印迹法检测小鼠脑组织中MAPKs表达.分析EAE小鼠神经功能障碍改变与中枢神经组织MAPKs表达量的相关性.结果 EAE组与对照组比较:日均神经行为学评分增加(P＜0.01);脊髓炎症细胞浸润增多(P＜0.001),髓鞘脱失增多(P＜0.001).P-ERK(42)、P-ERK(44)、P-JNK(54)表达量均增多(P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05).神经功能障碍与P-ERK(42)、P-ERK(44)、P-JNK(54)表达呈正相关.结论 EAE高峰期神经损伤程度与中枢神经组织中的P-ERK(42)、P-ERK(44)、P-JNK(54)表达增加相平行,提示MOG35-55诱导的EAE中枢神经损伤可能与MAPKs所激活的信号通路有关.
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石仙桃多糖对哮喘大鼠肺部炎症、细胞外信号调节酶和蛋白激酶B表达水平的影响
目的 探讨石仙桃多糖(PCLP)对哮喘大鼠肺部炎症细胞外信号调节酶(ERK)和蛋白激酶B(Akt)蛋白表达水平的影响.方法 将48只大鼠随机分为正常组、哮喘模型组、地塞米松组、PCLP组各12只.除正常组外,其他3组建立哮喘大鼠模型.建模第16天,地塞米松组、PCLP组分别给予地塞米松及PCLP灌胃,正常组、哮喘模型组给予生理盐水灌胃,干预28 d后取4组大鼠肺泡灌洗液进行细胞分类及计数,观察大鼠肺组织病理情况,比较4组大鼠ERK1/2、 磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平.结果 其他3组大鼠肺泡灌洗液中白细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞计数均高于正常组(均P<0.05).地塞米松组和PCLP组的肺泡灌洗液中白细胞数和嗜酸性粒细胞数低于哮喘模型组(均P<0.05).地塞米松组和PCLP组大鼠肺组织炎症症状轻于哮喘模型组.PCLP组和地塞米松组肺组织中ERK1/2和p-Akt蛋白表达水平均低于哮喘模型组(均P<0.05).结论 PCLP可以减轻哮喘大鼠肺部炎症,机制可能是其抑制ERK1/2的磷酸化和降低p-Akt蛋白表达从而抑制气道平滑肌细胞增殖.
