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成肌调节因子Myf-5在失神经骨骼肌萎缩不同时段的表达
背景:成肌调节因子Myf-5是参与肌肉发生过程分子调控、启动和维持骨骼肌细胞生长发育的重要基因,可能与失神经骨骼肌萎缩的发生有关.目的:观察不同部位、不同时段骨骼肌失神经支配后成肌调节因子Myf-5基因的表达情况.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-03104在山西医科大学完成.材料:选择健康8周龄雄性SD大鼠24只,随机分成4组,即假手术组(有神经支配)、去神经2 d组、去神经7 d组、去神经28 d组,每组6只.方法:假手术组不切断坐骨神经,仅做假手术.去神经组右下肢后部中段切断坐骨神经1 cm以上,分别于去神经第2,7,28天用脊椎脱臼法处死大鼠,分离出右小腿的胫骨前肌、比目鱼肌、腓肠肌、跖肌标本.主要观察指标:用反转录-聚合酶链反应技术检测各组肌肉Myf5 mRNA表达情况,抗Myf-5多克隆抗体免疫组织化学染色(ABC法),测量灰度值.结果:去神经骨骼肌早期,Myf-5的mRNA在去神经支配后第2,7,28天均表达上调(P<0.05).Myf-5抗体阳性染色细胞核数在SD大鼠骨骼肌失神经28 d时的肌卫星细胞中多.结论:Myf-5在大鼠失神经骨骼肌萎缩早期不同肌肉表达均为上调.大鼠骨骼肌失神经支配后早期肌卫星细胞中Myf-5表达上调.
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功能矫形前伸青春期大鼠下颌后翼外肌MyoD、myogenin的表达
目的:探讨"应力-生长(改建)"在细胞水平上的体现,为功能矫形治疗和矫治效果的保持提供新思路和实验依据.方法:本实验选用20只4周龄,雄性SD大鼠随机分为8组.其中实验组大鼠经戊巴比妥麻醉后佩戴上颌斜面导板,对照组未佩用.依据时间不同又分为四组:ld,7d,14d,21d.采用RT-PCR技术分析各组大鼠翼外肌组织中肌分化相关基因MyoD、myogeni mRNA的表达变化.结果:未施加功能矫形力的大鼠翼外肌组织MyoD表达伴随其生长发育呈现递减趋势,实验组在第7d出现表达上调.同时,力学刺激后实验组动物myogenin的表达与对照组相比较在14d组出现明显上调.结论:功能矫形力作用于翼外肌组织可以诱导MyoD和myogenin的表达上调进而诱导成肌细胞的分化.
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成肌调节因子Myogenin和MRF4在人体失神经骨骼肌中的表达及其临床意义
目的研究人体骨骼肌失神经支配后成肌调节因子Myogenin和MRF4蛋白的表达变化并了解其再生状态. 方法取20例人体失神经后不同时间段的骨骼肌与3例正常骨骼肌标本,HE染色和透射电镜观察肌细胞核变化,抗Myogenin和MRF4多克隆抗体免疫组织化学ABC法染色,统计阳性染色细胞核数,免疫荧光双重标记染色定性观察Myogenin和MRF4蛋白表达方式.结果抗Myogenin和MRF4抗体阳性染色细胞核数在人体骨骼肌失神经支配时即开始升高并在1年内维持在较高水平,1年后快速下降,至失神经2年几乎消失.肌细胞核内移现象在失神经1年内常见且部分居中的细胞核免疫组化染色阳性.结论骨骼肌失神经支配1年内,核内移可作为肌纤维再生的一个标志;Myogenin蛋白表达检测可以作为不可逆肌萎缩的指标;周围神经损伤后,应在1年内尽早修复.
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成肌调节因子MyoD和Myf-5在人体失神经骨骼肌中的表达及其临床意义
目的研究人体骨骼肌失神经支配后成肌调节因子MyoD和Myf-5蛋白的表达变化,了解骨骼肌的再生状态.方法20例不同时间人体失神经骨骼肌与3例正常骨骼肌标本,HE染色和透射电镜观察肌卫星细胞形态变化;抗My.D和Myf.5多克隆抗体免疫组织化学染色(ABC法),统计阳性染色细胞核数.结果抗MyoD和Myf-5抗体阳性染色细胞核数在人体骨骼肌失神经1～2月时的肌卫星细胞中多;3个月后急剧下降,并维持在一低水平;1年后几乎无表达.结论人体骨骼肌失神经支配后早期肌卫星细胞通过MyD和(或)Myf-5途径激活、开始增殖分化并被耗竭.
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MyomiRs 在维甲酸诱导舌发育异常中对舌肌分化调控的机制研究
目的：检测维甲酸（Retinoic acid，RA）诱导小鼠胚胎腭裂模型中胎鼠舌体发育过程中肌相关 microRNAs（MyomiRs）、成肌调节因子（Myogenic regulatory factors，MRFs）以及 Pax 基因的表达变化，探究 MyomiRs 在舌肌分化过程中的调控作用，推测RA 致胎鼠腭裂伴发舌异常的可能机制。方法：建立 RA 诱导小鼠胚胎腭裂模型，分别在 E13．5、E14．5、E15．5收集胎鼠舌体组织，用 SYBR GreenⅠ实时定量 PCR 检测舌体中 MRFs 和 Pax 基因的表达；用 TaqMan 探针实时定量 PCR 检测舌体中 MyomiRs 的表达。结果：胎鼠舌体发育过程中，正常组 miR-1和 miR-206相对表达量均持续上升，RA 诱导组二者变化趋势与正常组相似，但相对表达量均低于正常组，miR-1的结果在 E14．5和 E15．5具有统计学意义（P ＜0．01），miR-206的结果在 E13．5具有统计学意义（P ＜0．05）。正常组和 RA 诱导组胎鼠舌体中 MyoD 和 Myf5相对表达量都在 E14．5达到峰值，随后下降。RA 诱导组 MyoD 的表达在 E14．5显著低于正常组（P ＜0．05），在 E15．5显著高于正常组（P ＜0．01）；RA 诱导组 Myf5的表达在 E15．5显著低于正常组（P ＜0．05）。正常组和 RA 诱导组胎鼠舌体中 Pax3表达均在 E14．5达到峰值，Pax7表达均在 E15．5达到峰值。RA 诱导组 Pax3的表达在 E14．5显著高于正常组（P ＜0．05）；Pax7的表达则在 E13．5显著高于正常组（P ＜0．01）。结论：在舌肌分化过程以及RA 诱导腭裂胎鼠的舌发育异常中，miR-1／miR-206与 Pax3／Pax7及 Myf5／MyoD 的表达趋势具有相关性。RA 可能通过下调 miR-1／miR-206而靶向上调 Pax3／Pax7，进而下调 MyoD ／Myf5表达，从而抑制舌肌分化，导致舌肌发育异常。
关键词： 维甲酸 舌异常 肌相关 microRNA 成肌调节因子 Pax基因 -
成肌调节因子在选择性神经损伤骨骼肌萎缩中的作用
成肌调节因子在失神经支配骨骼肌的再生修复中发挥着突出的影响作用,本实验通过建立大鼠选择性神经损伤模型,观察成肌调节因子MyoD、myogenin在单纯运动神经和感觉神经损伤骨骼肌萎缩中的作用.
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转基因修饰后的自体骨髓间充质干细胞移植治疗mdx鼠后成肌调节因子的表达研究
目的 探讨携带micro-dystrophin基因的自体骨髓间充质干细胞移植mdx鼠后在移植鼠体内分化为肌细胞的可能机制.方法 采用逆转录病毒介导micro-dystrophin基因转染mdx小鼠MSCs(mMSCs),通过尾静脉注射移植治疗mdx鼠.在移植后免疫荧光检测micro-dystrophin的表达并在不同时间点检测MyoD的表达.结果 移植后成功检测到micro-dystrophin,其表达随着移植时间的延长而增加;随移植时间延长MyoD阳性肌纤维比例增加,分别达到9%(4周时)、15%(8周时)、28%(12周时).RT-PCR和Western blot也发现,随着移植时间的延长,MyoD表达增加.结论 自体mMSCs可携带外源性micro-dystrophin基因在受体鼠体内分化为micro-dystrophin阳性肌细胞,移植入的干细胞向肌细胞的分化是一个持久的、连续的过程,成肌调节因子在调节其分化过程中发挥了重大作用.
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成肌调节因子MyoD与myogenin在肌肉损伤修复过程的动态变化
目的探讨成肌调节因子MyoD与myogenin在肌肉损伤修复过程中的动态表达.方法用盐酸布比卡因局部注射制作肌肉损伤模型,在损伤后不同时间点取腓肠肌行冰冻切片,HE染色显示损伤肌肉的病理变化,用SABC法检测MyoD与myogenin的表达.结果 MyoD在肌肉损伤后18 h开始表达,48 h达高峰;myogenin在肌肉损伤后24 h开始表达,72 h达高峰.结论 MyoD与myogenin在肌肉损伤后的再生修复过程中起作用,可作为鉴定肌肉前体细胞和反映肌肉再生的指标.
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肌肉来源干细胞表面抗原-1阳性与阴性细胞体外培养成肌特性的比较
目的 探讨干细胞表面抗原-1(Sea-1)在成肌细胞增殖分化中的作用.方法 采用流式荧光细胞分选技术,从C57BL/6小鼠骨骼肌中分离Sca-1+与Sca-1细胞进行体外培养,使用CCK-8试剂盒检测2种细胞的增殖曲线,Westernblot测定2种细胞在体外培养过程中Sca-1、MyoD、成肌素(Myogenin)的蛋白表达.结果 在体外培养的前3d,Sca-1+与sca-1细胞增殖曲线没有明显差别;3d后,Sca-1细胞增殖比Sca-1+细胞明显加速.同时,2种细胞在体外培养过程中Sca-1均没有明显表达,而Sca-1+细胞的成肌调节因子表达比Sca-1细胞显著增加.结论 Sca-1的表达在细胞生长发育过程中具有时段性,与成肌细胞细胞周期的起止有关.
