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稳定表达人热休克蛋白22内皮细胞株的构建和鉴定
背景:热休克蛋白22的应激表达可能对缺氧复氧内皮具有一定的保护作用.目的:建立稳定表达人热休克蛋白22基因的内皮细胞株.方法:EcoRⅠ/kpnⅠ双酶切鉴定真核表达重组质粒pEGFP-N1-HSP22.脂质体法以重组质粒pEGFP-N1-HSP22转染人脐静脉内皮细胞,G418筛选,获得G418抗性单克隆细胞.用荧光显微镜、RT-PCR及Western-blot检测热休克蛋白22在人脐静脉内皮细胞中的表达.结果与结论:经双酶切电泳检测重组质粒pEGFP-N1-HSP22符合预期大小片段.稳定转染的单克隆人脐静脉内皮细胞中,荧光显微镜观察到每个细胞均有绿色荧光蛋白表达,RT-PCR和Western-blot检测到热休克蛋白22mRNA和蛋白表达.说明成功获得稳定表达人热休克蛋白22基因的内皮细胞株.
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退行性心脏瓣膜病患者血清中MHC、IRF-4、HSP70、HSP22mRNA表达的变化及意义
目的 研究肌球蛋白重链(MHC)、干扰素调节因子-4(IRF-4)、热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白22(HSP22)mRNA在老年退行性心脏瓣膜病(SDHVD)患者血清中的表达,探讨SDHVD的可能发病机制.方法 根据彩色多普勒检查结果将所有入选者分为单纯主动脉瓣钙化组(AVC组,n=25)、单纯二尖瓣钙化组(MVC组,n二19)、主动脉瓣钙化合并二尖瓣钙化组(AVC+MVC组,n=21),24例心脏瓣膜无钙化的老年患者设为对照组(NVC).应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测入选者血清MHC、IRF-4、HSP70、HSP22 mRNA的表达.结果 SDHVD组与对照组相比MHC和IRF-4 mRNA表达量明显降低(P＜0.01),HSP70和HSP22 mRNA表达量则明显增高(P<0.01),不同瓣膜钙化损伤间无明显差异(P＞0.05).SDHVD患者血清MHC mRNA、IRF4 mR-NA表达与LVEF呈正相关(r分别为0.394、0.427,P＜0.05),HSP70 mRNA,HSP22 mRNA表达量与LVEF呈负相关(r分别为-0.409,-0.422,P＜0.05).结论 SDHVD患者血清MHC、IRF-4、HSP70、HSP22 mRNA表达及心功能较心脏瓣膜无钙化者有明显变化,提示免疫炎性损伤参与SDHVD的发生发展.
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小分子热休克蛋白22研究进展
小分子热休克蛋白是一组理化性质相对保守的蛋白质,在应激反应中发挥重要作用.作为小热休克蛋白(small heat shock protein,sHSP)亚家族成员之一的热休克蛋白22(heat shock proteins,HSP22),在细胞的生长,增殖和凋亡的调节过程中发挥着分子伴侣、激酶活性等多种生物学作用.现阶段,HSP22被发现与肿瘤、心血管疾病、神经系统疾病,细胞骨架疾病以及某些免疫性疾病的发生与发展紧密相关.HSP22由于其在生物学和医学领域的特殊作用和功能,已经成为众多科学家追捧的对象之一.本文将总结近期有关HSP22的结构、功能及在生物医学上的新研究进展.
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热休克蛋白22在心血管疾病中的价值
热休克蛋白22(heat shock protein 22,HSP22)属于小热休克蛋白(sHSP)家族成员,广泛存在于人和哺乳动物的各种组织中,可迅速在各种不良环境下进行应答,从而增强机体对各种应激的抵抗能力.本文对HSP22的生理功能及其在心房颤动、冠心病、心力衰竭中的保护作用的相关研究进展进行综述,旨在为心血管疾病的预防及治疗提供新方向.
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热休克蛋白22的胞外释放途径及信号转导对动脉粥样硬化的影响
热休克蛋白22(HSP22)通常被认为是一个内在伴侣蛋白,通过调节肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、核因子κB(NF-κB)等细胞因子的表达,改善动脉粥样硬化.HSP22还存在于胞外,本综述以HSP22的细胞外分泌为切入点,提出HSP22可能通过溶酶体途径、外泌体途径或直接蛋白易位的方式分泌出胞;探讨胞外HSP22可能通过激活TLRs信号通路,调节细胞因子的分泌;分析HSP22通过调节炎症反应和氧化应激从而起心血管保护作用,并提出热休克蛋白诱导剂可能给动脉粥样硬化的治疗提供全新的思路.
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不同剂量辛伐他汀对慢性心力衰竭兔左室重塑及心功能的影响
目的:通过观察不同剂量辛伐他汀对慢性心力衰竭(CHF)左室重塑及心功能的影响,探讨辛伐他汀对慢性心力衰竭兔心肌细胞发挥保护作用的机制.方法:雄性大耳白兔60只,随机分成5组,正常对照(CON)组,慢性心力衰竭(CHF)组,低剂量辛伐他汀(SD-SIM组),中剂量辛伐他汀(MD-SIM)组,高剂量辛伐他汀(HD-SIM)组.耳缘静脉注射阿霉素(ADR),制作CHF模型.行心脏彩超检查,测量左室结构、功能,测定血流动力学指标.处死动物后,留取左心室室壁多聚甲醛固定,染色后进行免疫组化检测热休克蛋白22 (HSP22)表达水平.结果:心功能检查显示,与CON组相比SD-SIM、MD-SIM、HD-SIM、CHF组左心室射血分数(LVEF)明显下降(P＜0.05),与MD-SIM组相比,SD-SIM组、HD-SIM组明显下降(P＜0.05);与CON组相比SD-SIM、MD-SIM、HD-SIM、CHF组左室舒张末内径(LVEDD)、左室收缩末内径(LVESD)显著增加(P＜0.05),与MD-SIM组相比,SD-SIM组和HD-SIM组明显增大(P＜0.05);血流动力学检测显示:与CON组相比,SD-SIM组、MD-SIM组、HD-SIM组、CHF组的+dp/dtmax、-dp/dtmax及LVSP明显下降(P＜0.05),SD-SIM组、HD-SIM组与MD-SIM组相比明显下降(P＜0.05).HSP22的表达:与CON组相比SD-SIM组、MD-SIM组、HD-SIM组、CHF组HSP22蛋白的表达明显增多(P＜0.01),SD-SIM组、MD-SIM组、HD-SIM组与CHF组相比表达明显减少(P＜0.05),其中MD-SIM组表达少(P＜0.05).结论:辛伐他汀可明显改善慢性心力衰竭兔左室重塑,改善心功能,其中MD-SIM组效果好,其机制可能与辛伐他汀抑制HSP22的表达有关.
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HSP22在心血管疾病中作用的研究进展
热休克蛋白22(HSP22)是小分子HSP家族中的重要成员,细胞在外界各种物理、化学、微生物以及精神等应激下可诱导其表达,在各种组织中特别是脑、心肌、骨骼肌中呈高表达.HSP22在保护心肌细胞生存、抗缺血损伤、抗心肌重构以及炎性反应中都有着积极的作用,有望成为心血管疾病治疗方式的潜在途径.
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热休克蛋白22研究进展
热休克蛋白22(HSP22)属于小热休克蛋白(sHSP)亚家族成员,它与sHSP家族C-末端的α-晶体蛋白有同源性,分子量为22 kD.HSP22具有丝/苏氨酸激酶活性,广泛分布于哺乳动物的各种组织中,如肌肉、心肌、胎盘等.初步的研究发现HSP22在肿瘤细胞凋亡、心肌细胞肥大和凋亡中可能发挥着一定的作用,同时它还具有促进细胞生长和转化及分子伴侣的作用.
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HSP22 在高脂致动脉粥样硬化病变中的作用及对他汀干预的影响
目的:研究热休克蛋白22(heat shock protein 22,HSP22)在高脂饮食诱导的小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)病变中的作用,及其对阿托伐他汀(atorvastatin,Ator)干预的影响.方法:8~9周龄ApoE-/-和HSP22-/-ApoE-/-和HSP22 +ApoE-/-雄性小鼠各18只,每种小鼠分为2个亚组,分别为对照组与他汀干预组(Ator组),HSP22-/-组(KO组)与HSP22-/-他汀干预组(KO+Ator组)及HSP22 +组(Tg组)与HSP22 +他汀干预组(Tg+Ator组),各干预组从第5周开始给予Ator(10 mg· kg-1· d-1)干预,各对照组给予等量生理盐水,共饲养13周.采用油红O及苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察AS病变程度,免疫组化法、Western blot法和ELISA法检测主动脉和血清中HSP22、NF-κB、eNOS、ICAM-1及IL-6的表达.结果:油红O及HE染色示Tg组主动脉斑块相对面积低于KO组(P<0.05).KO组的血清和主动脉中HSP22的蛋白表达显著低于对照组和Tg组,对照组显著低于Tg组.Tg组及对照组的主动脉eNOS蛋白的表达显著高于KO组.对照组的主动脉NF-κB及ICAM-1蛋白表达较KO组显著降低,较Tg组显著升高.对照组、KO 组及Tg组血清IL-6水平的差异无统计学显著性.结论:HSP22基因缺失可上调NF-κB和ICAM-1的表达,降低eNOS的表达,加速AS的进展;HSP22基因过表达可降低NF-κB和ICAM-1的表达,从而改善AS.HSP22基因缺失部分限制了他汀下调NF-κB和ICAM-1及上调eNOS表达的作用;其过表达可促进他汀下调ICAM-1表达,进一步改善AS.
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高脂血症大鼠主动脉 HSP22、TNF-α和 eNOS 的表达及阿托伐他汀的影响
目的：研究高脂血症大鼠主动脉热休克蛋白22（HSP22）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及内皮型一氧化氮合酶（ eNOS）的表达，以及阿托伐他汀对其的影响。方法：复制高脂血症大鼠模型后，实验分为正常对照组、高脂对照组和高脂＋阿托伐他汀干预组。免疫组化法检测大鼠主动脉HSP22及TNF-α表达，Western blotting检测eNOS蛋白表达。结果：正常对照组未见HSP22和TNF-α阳性表达；高脂对照组与他汀干预组可见HSP22和TNF-α阳性表达；他汀干预组HSP22和TNF-α平均吸光度值明显低于高脂对照组（0.211±0.014 vs 0.345±0.042，0.218±0.090 vs 0.377±0.094，均P＜0.05）。高脂对照组和他汀干预组eNOS表达均较正常对照组明显降低（ P＜0.01），高脂对照组和他汀干预组差异无显著。结论： HSP22和TNF-α在高脂血症大鼠主动脉中的表达升高，而eNOS的表达降低，阿托伐他汀的干预可降低HSP22和TNF-α的表达，但未能改变eNOS的表达。
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JAK/STAT信号通路与小分子热休克蛋白22在心力衰竭中的研究
JAK/STAT信号通路通过参与心肌细胞肥大、心肌血管生成、心肌缺血、细胞凋亡及心肌保护等多种生理及病理生理改变,从而影响慢性心力衰竭的发生、发展.热休克蛋白22(HSP22)可间接激活STAT蛋白,对抗心肌缺血,抑制心肌细胞凋亡,改善心肌代谢,发挥心肌保护作用,延缓心力衰竭的进程.对JAK/STAT信号通路及热休克蛋白22的进一步研究将从细胞分子角度阐述心力衰竭发病机制,为心力衰竭的防治提供新的思路.
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从保护线粒体角度谈热休克蛋白22的心肌保护作用
线粒体是真核生物细胞内能量代谢和信号转导的关键细胞器.线粒体功能障碍会导致ATP合成障碍和氧化呼吸链结构异常,与许多疾病的发生发展存在密切联系.热休克蛋白22 (heat shock protein 22,HSP22)属于小分子热休克蛋白超家族成员之一.哺乳动物心肌在各种应激(如缺血、压力超负荷)情况下,可诱导其表达上调并通过调节线粒体功能发挥促进心肌生存及维持心肌功能等重要心肌保护作用.因此,HSP22有望成为治疗以线粒体功能障碍为病理学基础疾病的潜在途径.同时,HSP22在延缓心脏衰老中可能发挥重要作用.本文从保护线粒体功能方面综述在各种病理生理情况下HSP22的心肌保护作用.
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地西他滨对造血系统肿瘤细胞热休克蛋白22表达的影响
目的 探讨地两他滨(Aza-C)对造血系统肿瘤细胞热休克蛋白22(HSP22)表达的影响及可能的机制.方法 半定量反转录聚合酶链反应(PCR)法检测HSP22在造血系统肿瘤细胞系以及造血系统肿瘤患者骨髓单个核细胞中的表达水平；去甲基化药物Aza-C(2μmol/L)诱导上述细胞HSP22的表达；甲基化特异PCR法检测造血系统肿瘤细胞系、造血系统肿瘤患者和健康供者的骨髓单个核细胞中HSP22基因启动子甲基化状态.结果 在检测的13个造血系统肿瘤细胞系、20例不同类型的造血系统肿瘤患者以及10名健康供者骨髓单个核细胞中均未发现HSP22基因的表达；Aza-C能诱导造血系统肿瘤细胞系及造血系统肿瘤患者骨髓单个核细胞中的HSP22表达；Aza-C处理过的造血系统肿瘤细胞系中HSP22基因启动子处于部分去甲基化状态,健康供者及造血系统肿瘤患者骨髓单个核细胞HSP22基因启动子处于高甲基化状态.结论 Aza-C通过使HSP22基因启动子去甲基化诱导造血系统肿瘤细胞HSP22的表达.
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过表达热休克蛋白22抑制造血系统恶性肿瘤细胞生长的研究
目的 探讨过表达热休克蛋白22(HSP22)对造血系统恶性肿瘤细胞生长和凋亡的影响.方法 构建含HSP22或空载体的慢病毒表达载体,感染K562和Namalwa细胞;荧光显微镜及流式细胞术观察感染效率;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot鉴定HSP22表达.采用细胞计数法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,甲基纤维素半固体集落形成实验测定集落数,Annexin VPE／7-AAD流式细胞术检测细胞凋亡.在裸鼠皮下注射K562和Namalwa细胞进行成瘤实验以观察成瘤体积.结果 与转导空载体的对照细胞相比,HSP22过表达能抑制Namalwa和K562细胞集落形成,每孔平均集落数转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFP空载体的K562细胞为108,转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFPHSP22的K562细胞为72,两者差异有统计学意义(P=0.000 16);转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFP空载体的Namalwa细胞为125,转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFP-HSP22的Namalwa细胞为80,两者差异有统计学意义(P=0.000 37).HSP22还能抑制Namalwa细胞体外增殖(第5天,P=0.015;第6天,P=0.042;第7天,P=0.048),抑制K562细胞体内增殖(第21天,P=0.022).K562、Namalwa细胞HSP22转导组与对照组间G0～G1期、G2～M期及S期细胞所占百分比差异均无统计学意义(均P＞ 0.05).结论 过表达HSP22能够抑制造血系统恶性肿瘤K562和Namalwa细胞的生长.
