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辛伐他汀对大鼠肺成纤维细胞功能及其抑制通路的影响
背景:他汀类药物可以通过阻断甲羟戊酸的合成,抑制某些膜联结蛋白的翻译后修饰,从而阻断某些细胞内信号传导通路,抑制多种细胞的增殖.目的:探讨辛伐他汀对肺成纤维细胞的增殖、胶原合成及基质金属蛋白酶2分泌的影响.设计:完全随机设计,对照实验.单位:中国协和医科大学阜外心血管病医院器官移植研究室.材料:实验于2004-06/2004-10在中国协和医科大学北京协和医院心内科实验室完成.培养的新生SD大鼠的肺盛纤维细胞,根据培养液中加入的干预药物浓度不同而分为辛伐他汀0,1,5,10,50μmol/L及辛伐他汀50 μmol/L+甲羟戊酸200 μmol/L组.方法:用消化法培养新生SD大鼠的肺成纤维细胞,给予不同浓度的辛伐他汀干预.四氮唑蓝比色法检测细胞增殖,细胞免疫组化法测定细胞胶原的合成,酶联免疫吸附法测定细胞培养上清液基质金属蛋白酶2的含量.主要观察指标:不同浓度辛伐他汀及辛伐他汀加甲羟戊酸干预后肺成纤维细胞增殖和胶原合成能力,以及基质金属蛋白酶2分泌量.结果:①辛伐他汀5,10,50 μmol/L组四氮唑蓝比色A490值,肺成纤维细胞表达Ⅰ,Ⅲ型胶原的平均吸光度值(A值)及培养上清液中的基质金属蛋白酶2含量明显低于辛伐他汀0 μmol/L组(0.520±0.010,0.334±0.011,0.260±0.012,0.111±0.011;0.508±0.011,0.324±0.014,0.232±0.015,0.083±0.015;0.445±0.017,0.305±0.015,0.216±0.015,0.068±0.012;0.561±0.013,0.361±0.012,0.289±0.012,0.140±0.013,t=3.359～8.111,P＜0.05～0.01).②辛伐他汀50 μmol/L+甲羟戊酸200 μmol/L组四氮唑蓝比色A490值,肺成纤维细胞表达Ⅰ,Ⅲ型胶原的平均吸光度值(A值)及培养上清液中的基质金属蛋白酶2含量明显高于辛伐他汀50 μmol/L组(0.567±0.015,0.354±0.014,0.283±0.012,0.138±0.011,t=4.715～10.950,P＜0.01).结论:辛伐他汀能抑制肺成纤维细胞增殖和胶原合成,并可减少基质金属蛋白酶2的分泌,抑制肺成纤维细胞黏附迁移功能,并可通过影响甲羟戊酸通路而具有抗细胞增殖作用.
关键词： 成纤维细胞/药物作用 肺/细胞学 斯伐他汀/药理学 -
纤维连接蛋白诱导人胚肺成纤维细胞增殖信号转导机制探讨
[目的]探讨纤维连接蛋白(FN)诱导人胚肺成纤维细胞(HFL1)增殖的细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路.[方法]用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况.采用不同浓度FN刺激HFL1并观察不同浓度下细胞 ERK信号转导通路阻断剂PD98059对FN诱导HFL1增殖作用的影响;并用蛋白免疫印记法(Western Blot)观察FN浓度为50 ng/mL时,PD98059对HFL1中磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达的影响.[结果]FN对HFL1诱导增殖作用呈剂量依赖性升高趋势,在50 ng/mL时作用显著;ERK抑制剂 PD98059可抑制FN诱导的HFL1细胞增殖.[结论]FN诱导HFL1的细胞增殖可以通过ERK信号转导途径实现.
关键词： 成纤维细胞/药物作用 肺/细胞学 连接蛋白类 信号传递 -
茶氨酸刺激树突状细胞调节T淋巴细胞抑制抗肺癌A549细胞移植瘤实验研究
目的 探讨茶氨酸通过树突状细胞(DCs)调节T淋巴细胞抗肺癌A549的影响,观察其对SCID小鼠移植瘤的免疫保护和治疗作用.方法 SCID小鼠免疫后,接种A549细胞株,以茶氨酸为受试因素刺激DC,观察其免疫保护作用和免疫治疗作用.结果 肿瘤免疫保护方面,茶氨酸刺激DC组,以及DC组肿瘤形成时间明显延长(F=29.5,P＜0.01),且移植瘤在茶氨酸刺激DC组体积小(F=69.51,P＜0.01),重量轻(F=190.9,P＜0.01).在抗肿瘤治疗方面,其肿瘤比其他对照组更小,其表面光滑,无粘连,光镜下茶氨酸刺激DC组可见大薄片状坏死;茶氨酸刺激后的DC组移植瘤中VEGF的表达水平显著下降(F=31.4,P＜0.01).结论 茶氨酸刺激后DC的抗肿瘤免疫保护和治疗机制,可能是通过茶氨酸刺激DC调节T细胞实现的,也可能与茶氨酸通过DC介导VEGF蛋白表达的下调,从而与抑制肿瘤血管形成有关.
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肺炎链球菌触发肺Ⅱ型上皮细胞微丝肌动蛋白重排的钙信号转导机制
目的通过体外实验研究肺炎链球菌(S.pn)是否可通过肺型上皮细胞(A549)钙信号转导途径触发微丝肌动蛋白(F-actin)细胞骨架重排,进而导致S.pn对A549细胞的侵袭.方法采用F-actin特异性FITC-phalloidin荧光染料,观察S.pn作用A549细胞前后F-actin细胞骨架重排情况,以重排百分率表示:用F-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松弛素D预处理A549细胞,观察S.pn对A549细胞的侵袭;使用Ca2+信号转导抑制剂dantrolene预处理A549细胞,观察其与F-actin细胞骨架重排百分率间是否存在剂量依赖关系;用Fura-2/AM荧光探针负载A549细胞后测定S.pn粘附A549细胞30、60、90 min的胞内[Ca2+].结果S.pn作用A549细胞后,经FITC-phalloidin荧光染色,F-actin细胞骨架呈黄绿色块状聚集;F-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松弛素D可明显降低S.pn对A549细胞的侵袭,在其浓度为0.25μg/ml时,未得到可测的细菌数;Ca2+信号转导抑制剂可部分抑制A549细胞F-actin细胞骨架重排,且与F-actin细胞骨架重排百分率间存在量效关系;S.pn粘附A549细胞30、60、90 min后的胞内[Ca2+]i高于对照[(187.4±173 nmol/L)],并达到饱和,分别为(487.5±38.1)、(548.2±35.6)和(557.2±47.5)nmol/L.结论S.pn可通过Ca2+细胞信号转导途径触发A549细胞F-actin细胞骨架重排,进而导致S.pn侵袭A549细胞.
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组胺对肺上皮细胞Toll样受体表达的上调作用
目的: 观察组胺对肺上皮细胞中Toll样受体(TLR)表达的影响. 方法: 体外培养人肺上皮细胞株A549,用RT-PCR和实时定量PCR检测静息状态或组胺作用下的A549细胞中TLR1～TLR10 mRNA的变化,并用流式细胞术进一步确定组胺对TLR3表达的调节作用. 结果: A549细胞有TLR1～TLR10 mRNA的组成型表达,组胺对TLR3 mRNA和蛋白的上调作用具有时间和剂量依赖性,并且H1受体阻断剂可抑制组胺对TLR3的上调作用. 结论: 组胺可上调肺上皮细胞中TLR3的表达,提示当呼吸道存在变态反应性病变时,增多的组胺可能会增加肺上皮细胞对病毒感染的敏感性.
