首页 > 文献资料
-
抑制骨髓基质干细胞雌激素受体β基因表达的有效序列
背景:雌激素受体β是否参与介导骨髓间充质干细胞的增殖与分化需进一步实验论证.目的:以RNAi技术寻找和验证对大鼠骨髓基质干细胞雌激素受体β基因表达抑制的有效序列.方法:根据GeneBank 数据库提供的SD大鼠雌激素受体β基因核苷酸序列,选择设计能转录小发卡结构RNA (Small hairpin RNAs,shRNA)的DNA 序列.再在两条互补碱基序列的5'端分别加上BamH Ⅰ(GATCC)和Hind Ⅲ (AGCTT)酶的酶切位点,后形成两条互补的克隆入pSilencer 3.1-H1载体的发夹状siRNA模板序列,进行重组载体的碱基序列测定.结果与结论:重组质粒碱基序列鉴定后,证实真核表达载构建正确.雌激素受体β特异性siRNA真核表达载体构建成功.
关键词： 雌激素受体β RNA干扰 骨髓基质干细胞 siRNA真核表达载体 基因 -
hnRNP B1 siRNA对肺癌组织hnRNP B1表达干扰效果的体内研究
目的 在体内实验中观察所构建的核内不均一核糖核蛋白B1(hnRNP B1)特异性的siRNA真核细胞表达载体对肺癌组织hnRNP B1表达的干扰作用.方法 选取转染本课题组已构建并经体外实验证实有较好干扰效果的两对hnRNP B1特异性的siRNA真核细胞表达载体(重组质粒A和B)的人肺腺癌细胞株A549,将其接种于BALB/C nu/nu裸鼠右前腋下,构建肺癌动物模型.分别应用RT-PCR和免疫组织化学的方法检测接种40、60 d时肿瘤组织中的hnRNP B1 mRNA和蛋白质表达水平.结果 hnRNP B1特异性的siRNA真核细胞表达载体在体内表达40 d时均能较稳定而明显地抑制肿瘤组织中hnRNP B1 mRNA的表达,免疫组织化学从蛋白表达方面也予以证实,而且重组质粒A和B两组间的表达的差异无统计学意义.但是随着时间的延长(接种60 d时),siRNA的干扰效果会逐渐减弱,与未转染A549细胞比较无明显差异.结论 hnRNP B1特异性的siRNA在体内可以稳定的表达,并且能特异、高效地抑制肺腺癌细胞A549 hnRNP B1基因的表达,有望成为肺癌基因治疗的合理策略之一.
关键词： 肺癌 核内不均一核糖核蛋白B1 siRNA真核表达载体
