首页 > 文献资料
-
人单核细胞对煤焦沥青烟提取物诱导BEAS-2B细胞TRAF2mRNA表达的影响
目的 探讨人单核细胞(THP-1)对煤焦沥青烟提取物(CTPE)诱导BEAS-2B细胞肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)mRNA表达的影响.方法 构建THP-1细胞和BEAS-2B细胞的共培养模型,用终浓度3μg/mL的CTPE处理共培养模型,细胞培养至第9代时加入肿瘤坏死因子-α(TNF-α)中和抗体和C-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125,继续培养至第15代(cc15),设立共培养模型CC15组、TNF-α中和抗体组、JNK激酶抑制剂SP600125组,同代培养的BEAS-2B细胞为对照组,用Real-time PCR方法检测各组细胞中TRAF2 mRNA的相对表达水平.结果 与CC10组相比,TNF-α中和抗体对共培养细胞作用不同时间时TRAF2 mRNA的相对表达量均降低(P ＜0.001),作用48 h时TRAF2 mRNA相对表达水平达到低(0.19 ±0.02).SP600125抑制剂作用共培养细胞不同时间时c-Jun mRNA的相对表达水平与CC10组相比差异均有统计学意义(P ＜0.001),36 h组表达水平低(0.03-±0.02).TNF-α中和抗体组和SP600125抑制剂组TRAF2 mRNA相对表达水平(分别为1.73 ±0.04和1.88 ±0.05)均高于对照组(1.07±0.06),低于CC15组(2.23±0.09),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 THP-1可通过TNF-α上调了CTPE诱导的BEAS-2B细胞中TRAF2 mRNA的表达水平,TRAF2和AP-1之间可能存在负反馈作用.
-
TRAF2在人B淋巴细胞AP-1信号传导系统中的作用
目的 利用人B细胞株模型探讨TRAF2在调控AP-1信号系统中的作用.方法 将融合有黄色荧光素(YFP)的野生型(WT-TRAF2)或功能缺失型(DN-TRAF2)TRAF2质粒,以及小干扰RNA-TRAF2质粒转染至人类B淋巴细胞株,过夜培养后经流式细胞仪或抗生素G418筛选阳性转染细胞,通过Western blot、ELISA等方法研究TRAF2对AP-1通路中ERK、JNK、P38磷酸化和AP-1亚单位的细胞核内转移等的影响.结果 B细胞过度表达WT-TRAF2可增加ERK和P38的磷酸化水平以及C-FOS的核内转录,而过度表达DN-TRAF2或转染小干扰RNA-TRAF2则减少ERK和P38的磷酸化水平以及C-FOS的核内转录.结论 TRAF2可选择性地作用于人B淋巴细胞AP-1信号传导系统中的部分激酶,对B细胞AP-1信号系统的活化有重要作用.
关键词： 人B淋巴细胞 肿瘤坏死因子受体相关因子2 AP-1信号通路 -
莪术醇对梗阻性肾病大鼠IRE1调控TRAF2、XBP1抑制细胞凋亡的影响
目的 探讨莪术醇对梗阻性肾病大鼠肌醇必需酶1(inositol requiring enzymel 1,IRE1)调控肿瘤坏死因子受体相关因子2(tumor necrosis factor receptor-associated factor 2,TRAF2)、X-盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)抑制细胞凋亡的影响.方法建立单侧输尿管梗阻诱导大鼠肾间质纤维化动物模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组、莪术醇高、中、低剂量组;术后14 d处死大鼠并采集血清检测血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平;采用HE染色观察肾脏的病理改变及评定肾小管损伤指数;Masson染色观察肾间质胶原沉积的面积;采用TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡;采用Western blot免疫印迹法检测肾组织糖调节蛋白78(GRP78)、IRE1、p-IRE1、TRAF2、XBP1蛋白表达水平.结果 各治疗组与模型组比较,肾小管损伤指数,肾间质胶原分布相对面积,血清Scr和BUN水平及GRP78、IRE1、p-IRE1、TRAF2、XBP1,表达均有差异(P＜0.05,P＜0.01).莪术醇高剂量组与依那普利组比较,Scr和BUN降低(P＜0.05),肾小管间质损伤、肾间质胶原分布相对面积和肾小管上皮细胞凋亡降低(P＜0.05),肾组织中GRP78、IRE1、p-IRE1、TRAF2、XBP1的表达降低(P＜0.05).结论 莪术醇能够通过抑制IRE1磷酸化介导下游TRAF2蛋白表达,干预IRE1-XBP1信号通路活化,阻止细胞凋亡,从而减缓肾间质纤维化的进程.
-
TRAF2在乳腺癌中的表达及与乳腺癌侵袭性的关系
目的 研究肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)在乳腺癌中表达的变化情况,分析其与乳腺癌侵袭性的关系.方法 应用免疫组化及Western blot方法检测TRAF2在不同侵袭性乳腺癌、不同转移潜能乳腺癌细胞系中的表达.结果 TRAF2在正常乳腺组织中不表达,在乳腺癌中有表达.TRAF2在高、中转移性乳腺癌细胞系的表达量明显高于低转移细胞系,在低转移性乳腺癌细胞系的表达明显高于正常乳腺上皮细胞系.结论 TRAF2表达随乳腺癌侵袭及转移性升高而里上升趋势,提示TRAF2过表达与乳腺癌侵袭、转移有关.
关键词： 肿瘤坏死因子受体相关因子2 乳腺癌 -
TRAF2 K48聚泛素化位点的研究
目的 筛选K48聚泛素链在肿瘤坏死因子受体相关因子2(tumor necrosis factor receptor-associated factor 2,TRAF2)上的主要修饰位点.方法 比较不同物种间的TRAF2氨基酸序列,选出人TRAF2上保守率在90％以上的赖氨酸.构建人野生型TRAF2的表达载体及保守赖氨酸突变为精氨酸的突变表达载体.将不同的TRAF2表达载体与NF-κB荧光素酶报告基因表达载体共转至293FT细胞中,通过荧光素酶检测NF-κB激活情况.结果 人TRAF2上共有8个保守率在90％以上的赖氨酸,酶切及测序结果证明本研究成功构建TRAF2野生型和突变型表达载体.NF-κB荧光素酶报告基因检测证明TRAF2-K320可能是K48聚泛素链的主要修饰位点.结论 TRAF2-K320位点对TRAF2介导的NF-κB激活具有负向调控作用.
关键词： 肿瘤坏死因子受体相关因子2 K48聚泛素化 赖氨酸 NF-κB -
三氧化二砷、VEGF对人骨肉瘤Saos-2细胞TRAF-2和STAT-6表达的影响
目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF-2)和信号转导子与转录激活子6(STAT-6)在骨肉瘤发病机制中的作用,及三氧化二砷(As2O3)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)对其表达的影响.方法:人骨肉瘤Saos-2细胞经分别加入As2O3和VEGF培养48 h后,采用实时荧光定量PCR法和流式细胞术测定TRAF2和STAT-6的表达.结果:100 ng/mL浓度的VEGF能显著上调TRAF-2及STAT-6的表达(P ＜0.05,P＜0.01);2μmol/L以上的As2O3能显著下调TRAF-2及STAT-6的表达(P ＜0.05,P＜0.01),它还能显著降低VEGF诱导作用(P ＜0.05,P＜0.01).结论:TRAF-2和STAT-6在骨肉瘤的发病机制中可能起了重要作用,VEGF具有促进疾病的进展作用,而As2O3则反之,两者具有一定的量-效关系.
-
JNK1、TRAF2在多囊卵巢综合征患者脂肪组织中的表达及意义
目的 研究多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者腹部脂肪组织中c - Jun氨基端激酶1(JNK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)的表达,探讨PCOS发生胰岛素抵抗(insulin resistance IR)的分子机制.方法 分别选择PCOS组(肥胖13例和非肥胖15例)、对照组(肥胖、非肥胖各20例).放射免疫法检测各实验组血清黄体生成激素(1uteinizing hormone LH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone FSH)、睾酮(testosterone T)、血清空腹胰岛素(fasting insulin FINS)的水平;用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(fasting plasma glucose FPG);采用稳态模型胰岛素抵抗(Homeostasis model assessment-insulin resistance HOMA-IR)模型计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测PCOS组和对照组患者腹部脂肪组织中JNK1、TRAF2 mRNA的表达情况.结果 (1)所有PCOS组 LH、LH/FSH、T、FINS、HOMA-IR均高于对照组(均P<0.05); (2)JNK1、TRAF2mRNA的相对表达量在 PCOS肥胖组高于对照肥胖组(均P<0.01),在PCOS非肥胖组高于对照非肥胖组(均P<0.01),且PCOS肥胖组较PCOS非肥胖组高(均P<0.01).结论 JNK1、TRAF2 在多囊卵巢综合征中的高表达可能与PCOS发病机制存在一定关系.
-
胃腺癌组织中TRAF2 mRNA、蛋白的表达变化及其意义
目的 观察胃腺癌组织中肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)mRNA、蛋白的表达变化,并探讨其临床意义.方法 取胃腺癌组织60例份(胃癌组)、癌旁正常胃黏膜组织55例份(对照组).采用qRT-PCR法检测两组中的TRAF2 mRNA.分别采用免疫组化SP法和Western blotting法检测两组中的TRAF2蛋白.分析TRAF2 mRNA及蛋白表达与胃腺癌临床病理参数的关系.结果 胃癌组、对照组TRAF2 mRNA相对表达量分别为6.36(2.05)、0.68(0.95),胃癌组TRAF2 mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05).胃癌组和对照组TRAF2蛋白阳性表达率分别为76.70%、32.10%,TRAF2蛋白相对表达量分别为1.41±0.59、0.48±0.10,胃癌组TRAF2蛋白阳性表达率和相对表达量均高于对照组(P均<0.05).胃腺癌组织中TRAF2 mRNA、蛋白表达与分化程度、淋巴结转移、TNM分期及浸润深度有关(P均<0.05).结论 胃腺癌组织中TRAF2 mRNA及蛋白表达增高,TRAF2异常高表达可能参与了胃腺癌的发生、发展.
关键词： 胃肿瘤 胃腺癌 肿瘤坏死因子受体相关因子2 -
TRAF2基因转染乳腺癌细胞 MCF-7增殖情况观察
目的：观察TRAF2基因转染乳腺癌细胞MCF-7增殖情况。方法转染hTRAF2pLPCX-HA-Flag／P874质粒于MCF-7细胞，以空质粒pcDNA3作为阴性对照。 MTT法检测细胞增殖能力，Western blotting法检测细胞中NF-κB的核表达。结果转染空质粒、转染hTRAF2pLPCX-HA-Flag／P874质粒的MCF-7细胞48 h的吸光度值分别为0．313±0．019、0．606±0．007，72 h分别为0．708±0．193、1．332±0．075，96 h分别为0．936±0．203、1．462±0．231，两者比较，P均＜0．001。转染空质粒、转染hTRAF2pLPCX-HA-Flag／P874质粒的MCF-7细胞NF-κB的核表达分别为0．789±0．236、1．169±0．369，两者比较，P＜0．01。结论 TRAF2基因转染乳腺癌细胞MCF-7增殖能力增强。
关键词： 乳腺肿瘤 肿瘤坏死因子受体相关因子2 核转录因子κB 细胞增殖 -
以TRAF2为样本检验证实的一种通过模式关键位点研究未知蛋白质功能的方法
目的:以肿瘤坏死因子受体相关因子2(TNF receptor-associated factor,TRAF2)为试验对象验证改良的PROSITE计算机模拟生物学法的正确性,用于探测基因组中大量的未知功能基因.方法:修改PROSITE的模式,并创建相应的数据库,选择模式的关键氨基酸来探索TRAF2的功能.通过利用过滤机制排除干扰因素,模式中的关键位点即可探测蛋白质的主要功能.结果:TRAF2的核心氨基酸位于GLN311到LEU501,其单体状态时无功能,三聚体或六聚体时能行使功能.当它行使功能时,活性位点位于三聚体的中央.且其行使信号转导功能时,会出现在膜附近,这有利于通过细胞骨架与膜结合.此外,相对于比较简单的蛋白质,复杂结构的蛋白质拥有更多的模式,即功能更多.结论:改良的PROSITE法能够探测蛋白质的基本结构类型,从而推断和预测蛋白质的功能;结合其他实验证据,可以方便地探测蛋白质的功能,是一种有效的探索未知功能蛋白质的计算机模拟生物学解决方案.
关键词： 肿瘤坏死因子受体相关因子2 活性位点 模式 关键位点 -
肿瘤坏死因子受体相关因子2在言号转导中的研究进展
在JNK信号通路中,TRAF2是不可缺少的信号转导分子.JNK的活化需要TRAF2的寡聚化与K63泛素化.在NF-kB信号途径中,TRAF2活化经典的NF-KB信号途径,但对非经典的NF-KB信号途径具有抑制作用.在p38信号途径中,TRAF2也参与了p38的活化.因此,TRAF2是一个多功能的信号转导分子.
关键词： 肿瘤坏死因子受体相关因子2 NF-kB P38 JNK 信号通路 -
p53/miR-502-5p/TRAF2通路对骨关节炎软骨细胞损伤的影响
目的:探究微小RNA-502-5p(miR-502-5p)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的骨关节炎(OA)软骨细胞损伤的影响.方法:Western blot和RT-qPCR检测骨关节炎患者软骨组织和IL-1β诱导的软骨细胞中p53和miR-502-5p的表达;分离培养软骨,并分组处理细胞,分别用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测炎性因子和细胞外基质(ECM)相关蛋白的表达,另外,萤光素酶报告实验检测miR-502-5p对p53及肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)的调控作用.结果:与正常软骨组织相比,OA患者软骨组织中miR-502-5p的水平显著降低,p53和TRAF2水平则明显升高(P<0.05).IL-1β处理软骨细胞后,细胞活力下降、细胞凋亡率增加、IL-6、IL-8和TNF-α的蛋白表达水平显著上升;II型胶原和蛋白聚糖的蛋白表达显著下调,基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9和MMP-13等的蛋白表达显著上调,miR-502-5p mimic转染反转了IL-1β对软骨细胞的这些作用.此外,p53与miR-502-5p之间存在负反馈调节,同时miR-502-5p能够靶向抑制TRAF2的水平.TRAF2沉默同样反转了IL-1β对软骨细胞增殖、凋亡、炎症反应以及ECM相关蛋白表达的影响.结论:调节p53/miR-502-5p/TRAF2通路能够减轻IL-1β诱导的骨关节软骨细胞损伤.
