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试验性非特异性免疫反应对大鼠睾丸功能的影响
目的 探讨碳粒诱导的全身非特异性免疫反应对大鼠血清激素以及睾丸生精细胞增殖变化的影响.方法 利用磁分离均相酶联免疫技术检测血清睾酮、黄体生成素(LH)水平,运用免疫组织化学技术观察睾丸内增殖细胞核抗原(PCNA)、α-catenin表达的变化,另外用原位杂交技术检测动物睾丸内雄激素结合蛋白(ABP)mRNA量的改变.结果 与对照组相比实验组血清睾酮、LH含量显著降低(P＜0.05)以及睾丸内PCNA、α-catenin表达明显减少(P＜0.05),而ABP mRNA表达差异无显著性.结论 印度墨水(碳粒)诱发的试验性全身非特异性免疫反应可影响血清LH以及睾酮的水平,进而导致生精细胞的发生、发展成熟障碍.
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睾丸支持细胞的功能及其应用的探讨
睾丸支持细胞(sertoli cell, SC)及其结构是由德国人Enricol Sertoli在1865年首先描述.多年来SC的功能被认为是生精细胞的支架,为生精细胞提供必需的营养物质,能合成与分泌雄激素结合蛋白(androgen binding protein, ABP),为生精细胞提供高浓度的雄激素环境等.近年来SC生物特性的研究揭示了SC还能分泌多种物质,而且众多研究者在SC的应用性方面开始进行探索.
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性激素对良性前列腺增生组织二氢睾酮结合容量的影响
目的 探讨睾酮(T)、雌二醇(E2)、孕酮(Po)对良性前列腺增生(BPH)组织二氢睾酮(DHT)结合容量的影响作用以及与BPH发生发展的关系.方法 27例BPH组织取自耻骨上经膀胱前列腺摘除术,制备组织提取液,乙醚萃取去除提取液中内源性类固醇激素,加入3H-DHT测定DHT结合蛋白的结合容量,并以3H-DHT等量和10倍量的T、E2、Po竞争结合蛋白从而影响组织DHT结合容,观察结合容量的变化,分析结合容量变化与BPH的关系.结果 BPH组织胞质单纯DHT结合容量为(0.0160±0.0031)nmol/g湿组织,等量T、E2、Po作用的DHT结合容量分别为(0.0107±0.0011)、(0.0093±0.0017)和(0.0145±0.0033)nmol/g湿组织,T、E2组结合容量低于单纯DHT组,差异均有统计学意义(P＜0.01).Po组DHT结合容量与单纯DHT组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).10倍量T、E2、Po作用的DHT结合容量分别为(0.0102±0.0014)、(0.0096±0.0006)和(0.0121±0.001 6)nmol/g湿组织,低于单纯DHT组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 BPH组织胞质有很高的DHT结合容量,T、E2、Po可以影响结合容量,继而作用于BPH的发生和发展过程.
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实验性精索静脉曲张对大鼠睾丸结构及内分泌功能变化的影响
目的：揭示精索静脉曲张导致男性不育的机制。方法将SD( Sprayue-Dawley)三级雄性大鼠40只随机分为精索静脉曲张组、假手术组,每组20只。按Turner法建立精索静脉曲张动物模型,造模后12周将两组大鼠分别脱颈处死,摘取左侧睾丸,以透射电镜观察睾丸的超微结构；摘取两组大鼠的附睾分离出精子观察其形态；检测睾丸组织内雄激素结合蛋白、抑制素B,计算出免疫组化评分( IHS)；检测睾丸组织内睾酮水平。结果精索静脉曲张组与假手术组比较,支持细胞、间质细胞及精子细胞微观结构发生明显变化；睾丸组织雄激素结合蛋白IHS差异无统计学意义(P>0．05)；抑制素B IHS及睾酮水平差异有统计学意义(P<0．05,P<0．01)。结论精索静脉曲张通过影响大鼠睾丸间质细胞、支持细胞的结构改变其功能,通过影响生殖系统内分泌环境及性激素水平影响精子的成熟与发育使精子数量和形态发生改变,造成不育。
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重铬酸钾对大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白、转铁蛋白和抑制素mRNA表达的影响
目的 探讨重铬酸钾( K2Cr2O7)对雄性生殖系统的影响,为进一步研究K2Cr2O7的雄性生殖毒性机制提供理论依据.方法 建立SD大鼠睾丸支持细胞(SC)的体外原代培养模型.利用噻唑蓝(MTT)比色试验测定K2Cr2O7对SC增殖活性的影响,确定染毒浓度.用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测SC雄激素结合蛋白(ABP)、转铁蛋白(Tf)和抑制素(INH) mRNA的表达.结果 ABP、Tf的mRNA相对表达量随K2Cr2O7浓度增加而升高,与对照组比较,ABP的mRNA相对表达量在K2Cr2O7浓度为10-7和10-6mol/L时,Tf的mRNA相对表达量在K2Cr2O7浓度为10-6 mol/L时,差异有统计学意义(P＜0.05).INH的mRNA相对表达量随K2Cr2O7浓度升高而降低,在浓度为10-8 mol/L时,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论K2Cr2O7能够引起大鼠SC分泌功能的改变,产生生殖毒性作用.
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邻苯二甲酸二丁酯雄性生殖毒性分子作用机制
目的 研究邻苯二甲酸酯类对大鼠睾丸毒性作用的分子机制.方法 运用RT-PCR方法观察邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对大鼠子代不同发育阶段睾丸的苗勒氏管抑制物质(MIS)、雄激素结合蛋白(ABP)和抑制素(inhibin)表达水平的影响,并采用ELISA法检测DBP染毒后大鼠睾酮水平的变化情况.结果 与对照组比较,各DBP染毒组大鼠睾丸中MIS表达差异无统计学意义,血清总睾酮水平差异无统计学意义,但高剂量DBP(1000 mg/kg)组睾丸支持细胞中ABP和抑制素(inhibin)的mRNA表达量显著减少,且与睾丸损害呈时间-效应关系.结论 环境内分泌干扰物DBP可干扰大鼠发育过程中睾丸支持细胞ABP和inhibin的表达,其对性腺发育的影响可能是DBP雄性生殖毒性的主要作用机制之一.
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冷应激大鼠睾丸细胞AR和ABP的检测
目的 为研究冷应激大鼠睾丸细胞雄激素受体和雄激素结合蛋白的变化,本实验检测了睾丸细胞雄激素受体和雄激素结合蛋白的含量.方法 采用放射配体一3H-睾酮结合分析法.结果 冷应激实验组与对照组比较,雄激素受体大结合量(单位:fmol/mgDNA)为143.38±9.47和87.46±15.11;雄激素结合蛋白(单位:fmol/mgpro.)为34.98±8.16和12.94±3.63;差异有显著性,P＜0.05.结论 冷应激导致睾酮水平下降的同时,反馈地引起其受体浓度增加的变化是机体代偿适应性反应.
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壬基酚母鼠染毒对仔鼠睾丸支持细胞功能的影响
[目的]研究壬基酚(NP)对性成熟期F1雄性SD大鼠睾丸支持细胞功能的影响机制. [方法]设50、100、200mg/kg NP 3个剂量染毒组和1个对照组,对母鼠从妊娠第7天至断乳期灌胃染毒,产后55天处死雄性子代,取睾丸固定制片后,分别作病理组织学观察,作波形蛋白(vimentin)、广谱钙黏附蛋白(pan-cadherin)、信号转换和转录激活因子3(STAT3)的免疫组化分析和雄激素结合蛋白(ABP)、白细胞介素-6(1L-6)的原位杂交试验. [结果]睾丸组织病理学检查显示,各剂量染毒组发育异常的生精小管数增多,支持细胞数量减少;200mg/kg组波形蛋白、广谱钙黏附蛋白的表达低于对照组(P<0.05);各染毒组STAT3的表达与对照组相比差异无统计学意义;100mg/kg和200mg/kg组ABP mRNA和IL-6mRNA的表达低于对照组(P<0.05). [结论]200mg/kg NP可抑制性成熟期F1雄性sD大鼠支持细胞的波形蛋白、广谱钙黏附蛋白、IL-6、ABP的表达,影响支持细胞功能.
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P,P'-DDE对睾丸支持细胞雄激素结合蛋白表达的影响
[目的]研究雄激素结合蛋白在p,p'-DDE致雄性大鼠生殖内分泌干扰过程中的作用机制.[方法]对大鼠睾丸支持细胞离体原代培养4～5 d;设溶剂(DMSO)及阴性对照,以终浓度为30、50、80、100μmol/L的p,p'-DDE作用于支持细胞24h,计数200个细胞,计算支持细胞存活率;分别以浓度为10、30、50μmol/Lp,p'-DDE作用于支持细胞24h,运用一步法RT-PCR检测支持细胞内雄激素结合蛋白基因mRNA水平.[结果]p,p-DDE在50 μmol/L及以下浓度作用24 h后,支持细胞存活率＞90%,而80 μmol/L组仅45%;染毒24 h后,对照组及10、30、50 μmol/L的p,p-DDE组支持细胞内雄激素结合蛋白mRNA灰度比值分别为0.3140±0.102 0、0.392 0±0.094 9、0.583 7±0.122 1、0.649 0±0.171 8,随p,p'-DDE所给浓度的增高而逐渐升高,且30、50 μmol/L组与对照组差异存在显著性(P＜0.05),呈剂量依赖关系.[结论]p,p-DDE作用于睾丸支持细胞后,雄激素结合蛋白基因转录水平可明显升高,从而表达增强,促进雄激素结合蛋白的生成,代偿性地维持生精过程.
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丙烯腈对大鼠睾丸中雄激素结合蛋白和抑制素基因表达的影响
[目的]研究丙烯腈(acrylonitrile,ACN)对大鼠睾丸中雄激素结合蛋白(Androgen Binding Protein,ABP)和抑制素基因表达的影响.[方法]SD雄性大鼠随机分为4组,1组为对照组,另3组为染毒组,剂量分别为7.5、15.0和30.0 mg/kg体重,每天腹腔注射染毒1次,每周5次,连续13周,分别于4、8和13周末分批处死,取睾丸组织50～100mg,加1 ml Trizol磨成匀浆,加氯仿振摇,12 000 r/min,4℃下离心,取上清液,加异丙醇沉淀,75%乙醇洗涤,得到的RNA用紫外分光光度法测定其纯度,用一步法逆转录扩增(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)目的基因,用内参标进行半定量检测.[结果]ACN染毒未引起ABP和抑制素基因表达缺失.低、中剂量组睾丸中ABP和抑制素基因表达水平无明显变化.高剂量组,染毒4周后,ABP基因表达水平显著升高(P＜0.05),染毒8周后下降,但与其他组无明显差异,13周后显著下降,与其他组有显著性差异(P＜0.05).高剂量组染毒4周后,抑制素基因表达水平有下降趋势,且随染毒时间延长下降显著;中、高组在染毒8周后,抑制素基因表达水平下降显著,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01).[结论]ACN对大鼠睾丸中ABP和抑制素基因表达水平有影响,提示丙烯腈对睾丸中支持细胞可能有损伤作用.
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前列腺增生组织双氢睾酮结合容量的研究
目的探讨组织双氢睾酮(DHT)结合能力在良性前列腺增生(BPH)病因中的作用.方法32例BPH患者的前列腺组织取自耻骨上经膀胱前列腺摘除术,制备组织胞浆、胞核提取液,以乙醚萃取的方法去除提取液中所有的内源性类固醇激素,加入3H-DHT测定结合的3H-DHT的含量.结果BPH组织中DHT结合蛋白的总DHT结合容量均数约为0.024nmol/g湿组织,胞浆、胞核DHT结合容量分别为(0.0128±0.0020)nmol/g湿组织和(0.0112±0.0059)nmol/g湿组织,两者比较差异无显著性(P＞0.05).结论BPH组织中的DHT结合蛋白具有较高的DHT结合容量,维持局部DHT的高浓度,有利于DHT在前列腺组织增生过程中的作用.
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小鼠睾丸支持细胞的分离培养与鉴定
目的:分离培养小鼠睾丸支持细胞并进行鉴定.方法:取18～20 d雄性小鼠的睾丸,酶消化法原代培养.用RT-PCR的方法克隆带有锌指结构域的支持细胞基因SERZ,与pcDNA3.0连接后构建重组质粒pcDNA3.0-SERZ.用Kpn Ⅰ和XbaⅠ分别酶切质粒pcDNA3.0-SERZ,获得线性化模板进而合成探针.原位杂交检测SERZ mRNA在培养细胞中的表达;用RT-PCR的方法检测雄激素结合蛋白(ABP)在支持细胞中的表达.结果:支持细胞多为多边形,核呈三角形或不规则形,染色浅,核仁明显,细胞完全铺开,成膜状,相邻细胞之间交织连接,细胞纯度为(85.1±2.5)%.SERZ mRNA在培养细胞的胞质中高水平表达.RT-PCR结果表明我们分离的支持细胞能够表达ABP mRNA.结论:我们成功分离和鉴定了小鼠睾丸支持细胞,纯度为(85.1±2.5)%.
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p,p'-DDE对大鼠睾丸Sertoli细胞雄激素结合蛋白、转铁蛋白和抑制素B mRNA表达的影响
目的:研究p,p′-DDE对大鼠睾丸Sertoli细胞雄激素结合蛋白(ABP)、转铁蛋白(Tf)和抑制素B(INH B)转录水平的影响. 方法:建立Sertoli细胞体外培养模型,以不同浓度(10、30、50 μmol/L)的p,p'-DDE染毒细胞,RT-PCR方法检测ABP、Tf和INH B mRNA的表达水平. 结果:①随着p,p′-DDE染毒剂量的加大,引起ABP表达上调的同时Tf和INH B mRNA表达下调,且均呈剂量依赖性关系(P<0.05).② ABP、Tf和INH B的相关性分析表明,ABP与Tf、INH B均呈负相关(r=-0.391 3,P=0.032 5;r=-0.235 2,P=0.015 8),而Tf和INH B呈正相关(r=0.451 6,P=0.004 7). 结论:p,p′-DDE对大鼠睾丸Sertoli细胞有生殖毒性作用,干扰ABP、Tf和INH B的转录水平,从而损伤支持细胞的功能,导致生殖障碍.
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前列腺组织双氢睾酮结合容量的研究
目的:探讨前列腺组织双氢睾酮(DHT)结合能力对前列腺生理的作用.方法:22例正常前列腺组织取自无严重疾患的急性意外死亡的尸体,制备胞质、胞核提取液,以乙醚萃取的方法去除提取液中所有的内源性类固醇激素,加入3H-DHT测定结合的3H-DHT含量.结果:前列腺组织中DHT结合蛋白的总DHT结合容量均值为(0.026 3±0.004 7)nmol/g湿组织,胞质、胞核DHT结合容量分别为(0.010 3±0.001 5)nmol/g湿组织和(0.015 5±0.003 5)nmol/g湿组织,两者比较差异有极显著性(P＜0.01).结论:前列腺组织中的DHT结合蛋白具有较高的DHT结合容量,维持局部DHT的高浓度,利于DHT作用的发挥.
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前列腺组织二氢睾酮结合蛋白与性激素作用的研究
目的 测定前列腺组织中DHT结合蛋白的DHT结合容量,研究睾酮、雌二醇、孕酮对DHT结合容量的影响,初步分析DHT结合蛋白与性激素作用的性质.方法 20例正常前列腺组织,制备组织胞浆提取液,乙醚萃取去除提取液中所有的内源性类固醇激素,加入3H-DHT测定结合容量,并以等量和10倍量的T、E2、Po与3H-DHT竞争DHT结合容量.结果 前列腺组织胞浆单纯DHT结合容量是(0.0143±0.0022)nmol/g湿组织,T、E2与DHT竞争结合蛋白的作用较强,降低DHT结合容量的作用比较明显,Po的结合作用较弱,对结合容量的影响较小. 结论 前列腺组织胞浆中的DHT结合蛋白组成复杂,性质各异,有很强的结合DHT能力,与T、E2、Po相互作用,共同影响前列腺组织中DHT的状态.
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山茱萸多糖对亚急性衰老大鼠下丘脑-腺垂体-性腺轴的影响
目的 观察山茱萸多糖对亚急性衰老大鼠下丘脑-腺垂体-性腺轴的影响.方法 2014年3-6月开展实验,取雄性SD大鼠40只,随机数字表法分为对照组、模型组、山茱萸多糖组、雄激素组,每组10只.采用D-半乳糖(200mg·kg-1·d-1)腹腔注射6周建立大鼠亚急性衰老模型,同时对照组、模型组每天给予生理盐水,药物组分别给予山茱萸多糖(50mg·kg-1·d-1)灌胃、雄激素(5mg·kg-1·d-1)肌肉注射6周.放射免疫(放免)法检测下丘脑促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteotropic hormone,LH)、睾酮(testosterone,T)的含量.免疫组织化学法检测睾丸支持细胞雄激素结合蛋白(androgen binding protein,ABP)表达情况.计量资料多组间比较用方差分析,组间两两比较用LSD-t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 山茱萸多糖组GnRH、FSH、LH水平较模型组明显下降,T水平明显升高,ABP表达的光密度水平明显增强,对比差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 山茱萸多糖对衰老大鼠睾丸功能具有改善作用,其可能的机制与改善下丘脑-腺垂体-性腺轴的功能、增加睾丸组织ABP的表达有关.
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饮水氟暴露对成年男性血清睾酮及雄激素结合蛋白的影响
目的：探讨男性睾酮（T）及雄激素结合蛋白（ABP）与饮水氟暴露的关系。方法：应用现况调查研究，在河南省某县随机选择7个村庄作为调查点，分别为高氟村2个、改水村2个和对照村3个；采集各调查点生活饮用水。整群抽取所选调查点本地出生的18～50岁男性作为调查对象，分别采集晨尿和空腹静脉血。应用氟离子选择电极法测定饮用水和尿中氟含量，采用ELISA法测定血清 ABP水平，采用化学发光免疫分析法测定血清T。结果：高氟组饮水氟浓度为（2．44±1．88） mg/L，高于对照组的（0．37±0．15） mg/L和改水组的（0．36±0．30） mg/L （F＝12．289，P＜0．001）。高氟组尿氟浓度为（2．49±1．40） mg/L，高于对照组的（1．04±0．49） mg/L 及改水组的（1．38±0．67） mg/L（F＝71．563， P＜0．001），改水组亦高于对照组（P＜0．05）。高氟组血清ABP含量为（16．01±10．83） nmol/L，低于对照组的（27．94±31．90） nmol/L 及改水组的（22．42±28．12） nmol/L（F＝28．807， P＜0．001）。对照组、改水组、高氟组血清T含量为（4．31±1．30）、（4．42±1．37）和（4．74±2．17） nmol/L，差异无统计学意义（F＝0．268， P＝0．765）。在对照组和改水组中，血清T含量与年龄呈负相关（β＝-0．238、-0．262，P均＜0．05）。结论：环境氟暴露可影响男性血清ABP水平。
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重铬酸钾对大鼠睾丸支持细胞中雄激素结合蛋白、转铁蛋白和抑制素蛋白表达的影响
目的:研究重铬酸钾对大鼠睾丸支持细胞中雄激素结合蛋白(ABP)、转铁蛋白(Tf) 和抑制素(INH)蛋白的表达的影响.方法:建立大鼠睾丸支持细胞体外原代培养模型,分为0 mol/L、10-7 mol/L、10-6 mol/L重铬酸钾染毒组,Western blot法检测重铬酸钾作用24 h后各组睾丸支持细胞中ABP、Tf和INH蛋白表达水平的变化.结果:ABP蛋白的表达量随重铬酸钾浓度的升高而升高(0.39±0.19、0.51±0.18及0.81±0.19),差异有统计学意义(F=10.738,P<0.001);Tf蛋白的表达量也随重铬酸钾浓度的升高而增加(0.56±0.19、1.21±0.19及1.19±0.17),差异有统计学意义(F=32.435,P<0.001);而INH蛋白表达却呈下降趋势(1.06±0.19、1.20±0.19及0.71±0.19),差异有统计学意义(F=14.116,P<0.001).结论:重铬酸钾能够引起大鼠睾丸支持细胞分泌功能的变化,产生生殖毒性作用.
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醋酸铅对大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白、抑制素和转铁蛋白mRNA表达的影响
目的：观察醋酸铅对体外培养大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白(ABP)、转铁蛋白(Tf)和抑制素(INH)mRNA表达水平的影响。方法：体外培养大鼠睾丸支持细胞，分离纯化经鉴定后，分别给予不同浓度(0、10-8、10-7、10-6和10-5moL/L)的醋酸铅处理，培养24 h后采用MTT法测定细胞活性，采用RT-PCR检测细胞ABP、Tf和INH mRNA的表达。结果：10-8～10-5mol/L的醋酸铅对睾丸支持细胞活性无影响(F=2.592,P=0.053)。5组细胞中INH mRNA表达量差异有统计学意义(F=562.901，P＜0.001)，INH mRNA在10-5和10-7mol/L剂量组的相对表达量低于对照组(P＜0.05)。5组细胞中Tf和ABP mRNA表达量差异无统计学意义(F=2.296和1.960，P=0.087和0.131)。结论：10-8mol/L和10-7mol/L醋酸铅可能通过减少支持细胞中INH mRNA的表达来提高细胞的适应能力。
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铝对大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白mRNA表达的影响
目的:研究氯化铝对体外培养大鼠睾丸支持细胞的雄激素结合蛋白(ABP) mRNA表达的影响.方法:体外培养大鼠睾丸支持细胞为模型,分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组(0,300,400,500 μmol/L)氯化铝染毒睾丸支持细胞,培养24 h后采取MTT法检测细胞活性,RT-PCR法检测ABP mRNA的表达水平.结果:随着氯化铝染毒剂量的增大,ABP mRNA的表达下降.高剂量染毒组与对照组相比较,ABP mRNA的表达差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:氯化铝对体外培养的睾丸支持细胞具有毒性作用,抑制ABP mRNA的表达,从而损伤支持细胞功能,导致生殖功能障碍.
