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细胞信号传递研究的进展
随着放射配体技术的发展和分子生物学技术在细胞通讯研究领域中的应用,人们对细胞膜及其细胞内信息传递过程有了更清楚的认识,对机体功能活动调节的分子机制有了更新的了解,细胞信号转导途径的深入研究有助于阐明许多疾病的发生、发展的分子机理,并为寻找新的治疗方案提供了科学依据.现就细胞信号转导的类型、途径及作用的研究进展分述如下:
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冷应激大鼠睾丸细胞AR和ABP的检测
目的 为研究冷应激大鼠睾丸细胞雄激素受体和雄激素结合蛋白的变化,本实验检测了睾丸细胞雄激素受体和雄激素结合蛋白的含量.方法 采用放射配体一3H-睾酮结合分析法.结果 冷应激实验组与对照组比较,雄激素受体大结合量(单位:fmol/mgDNA)为143.38±9.47和87.46±15.11;雄激素结合蛋白(单位:fmol/mgpro.)为34.98±8.16和12.94±3.63;差异有显著性,P<0.05.结论 冷应激导致睾酮水平下降的同时,反馈地引起其受体浓度增加的变化是机体代偿适应性反应.
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Graves病患者褪黑素受体改变及意义
1 材料和方法1.1 研究对象患者组:经检查确诊为Graves病的初发患者39名(男9例,女30例),年龄(42±15)岁;正常组:年龄及性别与患者组相匹配的健康正常人39例(男30例,女9例),年龄(43±13)岁.两组均无糖尿病及脑出血等其他疾病史,实验室检查肝肾功能、血糖、血脂正常,心电图正常.1.2 方法所有试验对象均于12时抽静脉血6 ml,经肝素(20 U/ml)抗凝后行放射配体一点法检测.125I-Mel:33.3 TBq/mmol,中科院上海原子能所产品.
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m1AChR-G11融合蛋白的表达和功能的检测
目的表达m1AChR-G11融合蛋白,检测不同配体对m1AChR与G11间相互作用的影响.方法两步PCR建立m1AChR-G11重组cDNAs,并在Baculovirus-Infected Insect cells (Sf9)细胞内表达.[3H]QNB和[35S]GTPγS结合实验检测m1AChR-G11融合蛋白功能.结果 m1AChR-G11融合蛋白的表达水平为45.39±2.26 pmol*mg-1 protein.不同配体的存在使融合蛋白中G11与GDP的亲和力发生变化.乙酰胆碱,卡巴胆碱,AF-102B,Isopropamide, R-(+)-hyoscyamine和阿托品存在以及无配体存在时,GDP的IC50值分别是131.82、61.66、28.18、3.24、6.02、5.25和16.6 μmol*L-1. 结论 Sf9细胞系统表达的m1AChR-G11融合蛋白具备m受体配体结合的特性和组分间偶联功能.m1AChR-G11融合蛋白对GDP的亲和性决定于m受体配体的性质,分析GDP亲和力的大小有利于筛选和鉴别m1受体亚型特异性药物.