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骨髓间充质干细胞分离培养方法及其对CD8+T淋巴细胞的免疫调控
背景:骨髓间充质干细胞具有免疫调节特性,使其在免疫抑制方面有可预期的应用价值。目的:探讨骨髓间充质干细胞的分离培养方法及其对CD8+T淋巴细胞的免疫调控。方法:采用骨髓直接贴壁法获得原代Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,利用差速贴壁结合消化法纯化原代细胞,加入Ⅰ型胶原蛋白作为细胞外基质,扩增骨髓间充质干细胞。取第2代骨髓间充质干细胞,分别将0,1×103,1×104,1×105/wel 的骨髓间充质干细胞与CD8+T淋巴细胞共培养,植物血凝素刺激68 h,荧光CFSE法观察CD8+T淋巴细胞聚集,MTT法检测CD8+T淋巴细胞增殖率。结果与结论:①不同密度骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞均有抑制作用,1×103/wel 组抑制能力弱,形成集落现象;1×105/wel 组抑制能力强,细胞未见明显聚集现象;②1×103,1×104,1×105/wel 组CD8+T淋巴细胞增殖率分别为(44.83±4.92)%、(31.94±6.28)%及(15.77±3.98)%,3组间两两比较差异均有显著性意义(P<0.05);③结果表明,采用全骨髓直接贴壁法能获得原代大鼠骨髓间充质干细胞,采用差速贴壁联合消化控制法能完成细胞纯化,骨髓间充质干细胞浓度依赖性抑制T淋巴细胞增殖。