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miR-378对缺血缺氧条件下骨髓间充质干细胞增殖及凋亡的影响
背景：研究miR-378对缺血缺氧条件下骨髓间充质干细胞生长增殖、细胞凋亡等生物学行为的影响，为进一步改善骨髓间充质干细胞在梗死心肌中的生存提供新方法。
目的：观察miR-378转染后的骨髓间充质干细胞耐受缺血缺氧及促进血管形成的能力。
方法：体外培养的骨髓间充质干细胞分为未转染组和转染组，未转染组为未转染miR-378的骨髓间充质干细胞，转染组则采用化学合成的miR-378模拟物转染SD大鼠骨髓间充质干细胞；将两组骨髓间充质干细胞置于缺血缺氧(无血清，体积分数为1%O2、5%CO2，94%N2)环境中培养24 h后，应用锥虫蓝染色计数法、MTS法检测两组细胞在不同时间点的生长及增殖情况，TUNEL法检测细胞凋亡情况；将两组缺血缺氧后的培养基上清液分别刺激人脐静脉内皮细胞，观察血管形成情况。
结果与结论：缺血缺氧干预后48 h和72 h，转染组的骨髓间充质干细胞活细胞数明显高于未转染组(均为P <0.01)；转染组的骨髓间充质干细胞表现出较高的增殖能力，缺血缺氧干预后24 h及48 h细胞增殖升高较未转染组明显，差异有显著性意义(P <0.01，P <0.05)；缺血缺氧后转染组骨髓间充质干细胞的凋亡比例明显下降(P <0.05)。两组细胞均可促进血管腔样结构形成，但转染组血管管腔样结构较未转染组显著增多(P <0.01)。研究结果提示miR-378可促进缺血缺氧后骨髓间充质干细胞的生长增殖并抑制其在缺血缺氧条件下的细胞凋亡，同时可提高其促血管生成的能力。 -
藤黄酸对肾癌786-O细胞活力和对HUVEC细胞血管形成能力的抑制作用及其分子机制
目的 观察藤黄酸(GA)对肾癌786-O细胞活力和对HUVEC细胞血管形成能力的影响及其分子机制.方法 不同浓度的GA处理786-O细胞一定时间后,分别采用Alamar blue法、流式细胞术和免疫印迹,检测GA对786-O细胞活力、周期分布、凋亡率及凋亡标志物聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)降解片段的影响;GA对HUVEC细胞的作用除进行上述检测外,还利用划痕实验法和Transwell小室法检测细胞横向及纵向迁移能力变化,反映GA对HUVEC细胞血管形成能力的影响;免疫印迹检测P21Waf1/Cip1、Bax、缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和泛素化蛋白;特异性荧光蛋白酶体底物肽降解法检测细胞内糜蛋白酶样蛋白酶体活性.结果GA能够剂量依赖性抑制786-O和HUVEC细胞的活力、诱导细胞G2-M期阻滞和凋亡,同时增加P21Waf1/Cip1、Bax和泛素化蛋白水平;能够减弱HUVEC细胞横向和纵向迁移能力,伴随HIF-1α的稳定性增加和VEGF表达下调;能够抑制细胞内糜蛋白酶样蛋白酶体活性.结论GA通过诱导细胞G2-M周期阻滞和凋亡而显著抑制786-O和HUVEC细胞活力,并能有效抑制HUVEC细胞血管形成能力,其机制可能与蛋白酶体活性抑制所导致的底物蛋白P21Waf1/Cip1、Bax和HIF-1α的稳定性改变,及HIF-1α调控的下游蛋白VEGF表达水平的变化有关.
