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损伤角膜修复重建中的ROCK抑制剂：促进角膜细胞增殖、迁移和黏附
背景：随着人们对Rho/ROCK通路的生物学功能的了解的不断加深，新的ROCK抑制剂不断被发现，且ROCK抑制剂在角膜细胞存活、增殖和迁移中表现出良好的促进效果，ROCK 抑制剂的研究能为再生医学和临床细胞移植提供更多的良好供体材料或种子细胞。目的：总结并探讨ROCK抑制剂Y-39983和Y-27632在角膜病的治疗和应用的研究进展。方法：应用计算机检索PubMed 数据库和中国知网数据库内相关文章，检索时间为2008至2015年，检索词为“corneal endothelial cel，corneal epithelial cel，ROCK inhibitor，Y-39983，Y-27632，ROCK抑制剂，角膜”，从中筛选出与主题相关的部分文献。结果与结论：初检得到264篇文章，按主题相关性对文献进一步筛选，终纳入45篇文章进行讨论。应用到眼科的ROCK抑制剂主要有两种：Y-27632和 Y-39983，两者的应用主要还是基础研究与临床试验阶段。Y-27632可促进角膜缘上皮干细胞增殖及提高冻存复苏后的活性；Y-39983作为一种新型的ROCK抑制剂，其比Y-27632更有效地抑制ROCK激酶的活性，从而能更有效地促进角膜内皮的愈合。目前ROCK抑制剂在角膜治疗的研究较多，但是没有建立一种稳定的获得种子细胞的方法，每一种治疗方法都各有优缺点，而克服这些缺点以及找到快速稳定获得种子细胞的方法是今后的发展方向。
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ROCK抑制剂治疗心血管疾病的研究进展
ROCK为Rho相关的卷曲蛋白激酶,其表达上调常引起平滑肌细胞收缩异常,导致冠状动脉痉挛、动脉粥样硬化、心肌肥厚和肺动脉高压等.因此ROCK抑制剂对这些心血管疾病的发生发展有一定抑制作用,但临床应用尚需更多的研究来证实,本文就ROCK抑制剂在心血管疾病的应用作一综述.
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Rho相关蛋白激酶及其抑制剂的研究进展
Rho相关蛋白激酶(Rho-associated protein kinase，ROCK)1、2属于丝氨酸-苏氨酸激酶AGC家族，对细胞多种生物学功能均有调节作用。抑制ROCK已经被证实可用于多种疾病的潜在治疗。笔者将简要介绍ROCK的结构和治疗的重要性，以及新关于ROCK抑制剂的研究进展。
关键词： Rho/ROCK通路 Rho相关蛋白激酶 ROCK抑制剂 法舒地尔 -
AGEs刺激对小鼠肝脏moesin表达及其磷酸化水平的影响
目的 探讨糖基化蛋白终产物(AGEs)刺激对小鼠肝脏膜突蛋白(moesin)表达及其磷酸化水平的影响.方法 24只C57 BL/6雌性小鼠,随机分为对照组、AGE组、SB203580+AGE组和Y27632+AGE组,各6只.制备模型后,取小鼠肝脏组织进行石蜡包埋、切片,通过免疫组化法对各组肝脏moesin及其磷酸化moesin进行观察并行半定量分析.结果 四组moesin均主要表达在肝窦和微血管的内皮细胞,肝细胞或胆管上皮细胞无表达;对照组磷酸化moesin几乎观察不到;AGE组肝窦和微血管内皮细胞中558位苏氨酸磷酸化moesin的表达明显增加;SB203580+AGE组和Y27632+AGE组肝脏内皮细胞磷酸化moesin染色深度明显低于AGE组并高于对照组.对照组、AGE组、SB203580+AGE组、Y27632+AGE组moesin灰度值分别为84.7±0.35、86.2±0.57、85.5±0.69、84.9±0.67,各组moesin相比,P均＞0.05;其磷酸化moesin灰度值分别为34.6±0.36、82.2±0.92、35.7±0.51、35.9±1.67;AGE组的磷酸化moesin与其余三组相比,P均＜0.05.结论 moesin在肝脏主要表达在肝窦和微血管的内皮细胞,AGEs处理或抑制p38 MAPK、ROCK活性后再给予AGEs均不影响肝脏moesin蛋白的表达;AGEs可导致肝脏内皮细胞moesin磷酸化,p38 MAPK和ROCK两条信号途径参与了moesin磷酸化的过程.
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ROCK抑制剂在眼科基础及临床应用研究进展
ROCK抑制剂治疗青光眼的有效性在临床观察中已得到证实,一些动物及细胞实验中亦发现其对糖尿病视网膜疾病、增殖性视网膜疾病、角膜内皮功能障碍及角膜新生血管有良好的治疗作用.此外,ROCK抑制剂在部分基础研究中也显示出良好的神经保护作用.随着ROCK抑制剂的应用价值日益凸显,其在眼科领域将会有更为广阔的发展空间和应用前景.
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一种基于胚胎干细胞构建角膜上皮样组织的新方法
目的 利用Rock抑制剂联合低氧-常氧培养方式构建基于胚胎干细胞( ESCs)的组织工程角膜上皮. 方法 应用贴壁培养作为分化方式,用全反式维甲酸(RA)+骨形态发生蛋白4(BMP4)诱导人源ESCs细胞系H1向角膜上皮样细胞分化.以SHEM与KSFM培养基1 : 2混合配比作为扩增基础培养基,分别添加或不添加Rock抑制剂Y27632,扩增ESCs来源的角膜上皮样细胞.将诱导后的角膜上皮样细胞接种于去上皮羊膜载体上,在低氧、常氧、低氧-常氧相结合等不同条件下构建组织工程角膜上皮.通过形态学、实时荧光定量PCR反应(RTFQ-PCR)、免疫荧光法检测诱导效果、ESCs来源角膜上皮样细胞的扩增能力及组织工程角膜上皮表型. 结果 与对照组比较,诱导组诱导后8 d ESCs标志物Oct4 mRNA,Notch信号通路相关因子Notch1、Jagged1 mRNA以及Wnt信号通路的相关因子c-myc和Cyclin D1 mRNA的相对表达量显著降低,表皮外胚层标志物p63和K18 mRNA的相对表达量显著增加,差异均有统计学意义( t=14.63、20.15、93.50、11.60、19.30、18.44、22.63,均P<0.05).与Y27632未添加组相比,Y27632添加组细胞的p63、K14 mRNA相对表达量以及Notch信号通路受体Notch1和Jagged1 mRNA相对表达量显著升高,Wnt信号通路下游靶向基因c-myc和CylinD1 mRNA相对表达量明显降低,差异均有统计学意义( t=20.29、59.22、2.90、39.59、5.32、10.14,均P<0.05);2个组 K18 mRNA 的相对表达量无明显变化,差异无统计学意义(t=1.38,P>0.05).Y27632添加组用低氧-常氧相结合的方式构建ESCs来源的上皮片较持续低氧或常氧培养复层化更明显,排列更紧密,并全层表达上皮细胞标志物Pan-CK和K18及上皮干细胞标志物p63和K14. 结论 Y27632的添加可增加ESCs来源角膜上皮样细胞的增生能力,激活Notch信号通路,抑制Wnt信号通路.采用低氧-常氧相结合的方式,利用添加Y27632的培养基扩增构建ESCs来源的组织工程角膜上皮有助于上皮片的复层化.
