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His-FemA融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达
目的 构建His标签的金黄色葡萄球菌甲氧西林耐药相关蛋白FemA的融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌中表达,为进一步研究femA基因的生物学功能和临床应用奠定基础.方法 根据GenBank中金黄色葡萄球菌femA基因序列,利用Primer Premier 5.0设计PCR引物,并在引物的5'加入BamHI及SalI酶切位点；以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模版,PCR扩增出femA基因片段.将目的DNA片段及质粒pQE30分别进行双酶切、连接并转化大肠埃希菌DH5α；阳性克隆以PCR、双酶切及测序进行鉴定.将鉴定正确的pQE30-femA重组质粒转化大肠埃希菌JM109,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His-femA融合蛋白；采用SDS-PAGE及Western blot分析对表达蛋白进行验证.结果 经PCR、双酶切签定及序列测定,证实重组质粒pQE30-femA构建成功；重组质粒pQE30-femA转化大肠埃希菌JM109经IPTG诱导后,SDS-PAGE和Western blot分析显示表达出53 kD目的蛋白；经Bandscan软件分析,目的蛋白质在4h的表达量占细胞总蛋白的27.5％.结论 成功构建了His-FemA原核表达载体(pQE30-femA),并在大肠埃希菌中高效表达.
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多重PCR在诊断慢性上颌窦炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的作用
目的设计慢性上颌窦炎中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的快速检出方法.方法利用多重聚合酶链反应(MPCR)技术,同时检测同一DNA模板中的金黄色葡萄球菌耐药基因mecA及金黄色葡萄球菌固有的femA基因.结果 femA基因为金黄色葡萄球菌的特有基因,mecA基因在MRSA中检出率为96.2%(51/53例). 结论 MPCR方法能快速准确地鉴定MRSA.
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实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌femA表达水平
目的 探讨实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌femA表达的方法.方法 以BB270femA基因表达为标准,建立实时荧光定量PCR方法,对实验菌株femA表达进行相对定量.结果 建立的实时荧光定量PCR方法所得结果标准曲线线性关系好,熔解峰单一.随MIC变化,金黄色葡萄球菌femA表达水平也随之变化.结论 用实时荧光定量PCR方法研究金黄色葡萄球菌femA表达量结果可靠、敏感、重复性好.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中mecA、femA检测及其抗生素敏感性研究
目的 探讨mecA、femA基因PCR聚合扩散快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的敏感性及特异性.方法 选择耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株84株用PCR聚合扩散法检测mecA、femA基因,并用纸片扩散法检测MRSA菌株的药物敏感性.结果 84株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中,mecA基因阳性率为100％femA基因阳性率为97.6％.未发现万古霉素耐药的菌株.结论 PCR mecA、femA基因聚合扩散法即可用于MRSA快速诊断,又有特异性强的有点.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球 mecA基因 femA基因 抗生素敏感性 -
mecA、femA基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌
目的探讨 mecA、femA基因PCR联合扩增快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的敏感性及特异性.方法用纸片扩散法及mecA、femA基因PCR联合扩增检测178株葡萄球菌中的MRSA,并与琼脂稀释法的结果比较.结果纸片扩散法筛检MRSA(耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 ,MRCNS)的敏感性、特异性分别为94.4%(89.5%)、92.4%(73.7%). 在金黄色葡萄球菌中若以mecA基因阳性为判定MRSA的指标,则敏感性、特异性分别为91.7%、95.5%.在178株葡萄球菌中若以mecA、femA基因阳性作为判定MRSA的指标,特异性提高到 97.9%.结论 PCR mecA、femA基因联合扩增既可用于筛检MRSA,又可免去常规生化鉴定,具快速、特异性强的优点.
