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樟芝多糖预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的 研究樟芝多糖对大鼠预处理后,对于心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法 健康SD大鼠50只,随机分为5组,分别为假手术组,模型组,樟芝多糖高、中、低剂量组,每组10只.通过可逆性左冠状动脉前降支结扎法建立心肌缺血再灌注模型:给予大鼠心肌缺血0.5h,复灌2h.樟芝多糖组分别在术前30 min灌胃给予樟芝多糖100、50、10 mg/kg,而模型组和假手术组灌胃等量生理盐水.ELISA法检测大鼠血清中丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)的表达,心肌组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1 β(IL-1 β)、白介素-6(IL-6)的水平.Western-Blot法检测心肌组织中Bcl-2、Bax、caspase-3的表达.测算心肌梗死面积,心肌组织HE染色.结果 与模型组相比,樟芝多糖预处理的大鼠心肌梗死面积显著降低,血清中MDA、CK、CK-MB和心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6表达显著降低,血清中SOD和CAT表达显著上升,心肌组织中Bax、caspase-3表达降低、Bcl-2表达升高.HE染色显示樟芝多糖预处理的大鼠心肌组织受损程度相比模型组显著降低.结论 樟芝多糖可以通过抵抗氧化应激和炎症损伤降低心肌细胞凋亡,对心肌缺血再灌注损伤的大鼠起到保护作用.
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樟芝多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用
目的 探究樟芝多糖对于环磷酰胺构建的免疫抑制小鼠模型的免疫功能的调节作用.方法 利用水提醇沉原理提取得到3种樟芝多糖,环磷酰胺构建免疫抑制小鼠模型.应用3种樟芝多糖进行干预,分别检测细胞免疫和体液免疫的相关指标,包括胸腺指数、脾脏指数、T淋巴细胞亚群、淋巴细胞增殖活性、自然杀伤(NK)细胞杀伤能力以及血清中白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、免疫球蛋白A(IgA)、IgG、IgM的表达.结果 环磷酰胺构建的免疫抑制小鼠的免疫功能得到全面抑制,而3种樟芝多糖可以不同程度的提高免疫抑制小鼠的免疫功能,且相同剂量下,90％乙醇沉淀得到的多糖效果优于其他两种(P＜0.05).结论 樟芝多糖可以提高免疫抑制小鼠的免疫能力,且90％乙醇沉淀的多糖效果更优.
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樟芝多糖对6-OHDA构建的帕金森小鼠模型的行为及抗氧化损伤/抗炎能力的影响
目的 探索樟芝多糖对于6-OHDA诱导的的帕金森小鼠脑组织抗氧化/抗炎能力及行为学的影响.方法 6-OHDA毁损内侧前脑束构建帕金森小鼠模型,小鼠分组为正常组、模型组、给药组(50,100,200 mg·kg-1)组,均为腹腔注射给药.游泳实验和水迷宫实验观察行为学变化,Elisa法检测纹状体GSH-Px、SOD、CAT、LDH、MDA含量和炎症因子IL-6、IL-1β表达.结果 与模型组相比,给药组小鼠的GSH-Px、SOD、CAT、LDH显著上升,MDA、IL-6和IL-1β显著下降,小鼠的认知、行动能力得到明显的改善.结论 樟芝多糖可以一定程度上改善帕金森小鼠行为,其原因可能与多糖具有抗氧化、抗炎的作用有关,多糖可以提高脑组织抗氧化能力,减少炎症因子表达.
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乙醇分级沉淀的樟芝多糖对于小鼠急性肝损伤的保护作用
目的 研究不同浓度乙醇沉淀获得的樟芝多糖对于急性肝损伤小鼠的保肝作用.方法 采用不同浓度的乙醇沉淀获得樟芝多糖,建立D-氨基半乳糖的急性肝损伤小鼠,Elisa法检测各组血清的谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)的表达以及肝组织中SOD、CAT、GSH-Px、GSH的表达,肝脏HE染色检查组织病理,qPCR检测肝组织中Bc1-2、Bax、Caspase-3的mRNA的表达.确定樟芝多糖中对于小鼠急性肝损伤有效的部分.结果 樟芝多糖的各浓度的乙醇沉淀物均有一定的保肝作用,其中90％乙醇沉淀的多糖对于小鼠模型ALT、AST的含量具有显著的降低作用且优于其他组多糖(P＜0.05).4种多糖可以显著降低血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、和肝组织中Bax、Caspase-3mRNA的表达,提高白介素-10(IL-10)和肝组织中SOD、CAT、GSH-Px、GSH蛋白表达以及Bc1-2mRNA的表达(P＜0.05).且PW90多糖效果较好.结论 不同浓度乙醇沉淀的樟芝多糖对于急性肝损伤有着一定的保护作用,90％乙醇沉淀获得的多糖保肝作用优于其他浓度乙醇沉淀获得的多糖.
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樟芝多糖通过调节肠黏膜浸润的Th9及IL-9的表达调控小鼠慢性结肠炎的机制研究
目的 研究樟芝多糖调节结肠黏膜浸润的Th9及其细胞因子IL-9的表达,从而减轻小鼠慢性结肠炎的机制.方法 利用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)构建小鼠慢性结肠炎模型,设置正常组、模型组、阳性对照组(抗IL-9抗体注射组)以及樟芝多糖组(20 mg·kg-1).DAI评分综合评价小鼠1个月内活动能力,测定小鼠1个月内的体质量变化,流式细胞术检测外周血、结肠黏膜固有层中单个核细胞中CD4+IL-9+T细胞的比例,ELISA法检测外周血及结肠黏膜中IL-9、TGF-3以及IL-4的表达,实时荧光定量PCR检测小鼠结肠黏膜中IL-9、TGF-β、smad3及IL-4的表达,HE染色观察小鼠结肠组织病理.结果 DSS可以引起小鼠慢性结肠炎性病变,DAI评分结果显示模型组小鼠活动能力明显下降,而樟芝多糖干预后DAI评分显著降低(P＜0.05),模型组小鼠外周血及结肠黏膜固有层中Th9比例相比正常组显著增高(P＜0.05),外周血及结肠黏膜中IL-9、TGF-β及IL-4的蛋白及mRNA表达也显著增高(P＜0.05).阳性对照组及樟芝多糖组小鼠外周血及结肠黏膜固有层中Th9比例相比模型组显著下调(P＜0.05),且外周血及结肠黏膜中IL-9,TGF-β以及IL-4的蛋白及mRNA表达也显著下调(P＜0.05),HE染色结肠病理情况明显好转.结论 樟芝多糖可以通过调节Th9比例和IL-9表达改善小鼠慢性结肠炎,其作用与免疫调节及抗炎作用有关.
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樟芝多糖通过CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞对小鼠非酒精性脂肪性肝病的保护作用
目的 研究樟芝多糖通过CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的调控对小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的保护作用.方法 高脂饮食构建小鼠NAFLD模型,设置对照组、模型组、低剂量组、高剂量组.樟芝多糖干预1-4周中每周流式细胞术检测外周血Treg细胞的比例,谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的表达,外周血中转化生长因子β(TGF-3)、白介素-6(IL-6)的表达.樟芝多糖干预4周后,小鼠处死,取肝脏进行油红染色,Western blot法检测肝组织中TGF-β和Foxp3、Smad3蛋白的表达,RT-qPCR检测IL-6、TGF-β、Foxp3、Smad3的mRNA表达.结果 高脂饮食喂养4周后成功构建NAFLD小鼠模型,且模型组中Terg比例显著低于对照组(P＜0.05),樟芝多糖干预后Treg比例相比模型组显著增高(P＜0.05),小鼠肝功能得到显著改善,外周血中TGF-p表达上调、IL-6的表达下调,肝组织中TGF-β和Foxp3、Smad3蛋白和mRNA均上调,而IL-6的mRNA表达下调.结论 樟芝多糖可以通过Treg和TGF-β-Smad3信号对NAFLD起到保护作用,作用机制和免疫改善有关.
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樟芝多糖抵抗脂多糖诱导的神经细胞PC12炎症反应
目的 研究樟芝多糖(antrodia camphorata polysaccharide,APC)抵抗脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)引起神经细胞PC12炎症反应的作用和机制.方法 PC12细胞常规培养后,分为对照组、模型组、APC低剂量组、APC高剂量组,其中APC低剂量组采用10 mg·L-1 APC干预,APC高剂量组采用50 mg·L-1 APC干预.采用CCK-8法检测细胞存活率,光镜下观察细胞形态,激光共聚焦法分析观察Flu03-AM染色后细胞内钙离子浓度,Western blot法检测TLR4、MD2以及下游MyD88的表达,ELISA法检测外分泌的TNF-α、IL-6和IL-1β的表达.RT-QPCR检测MD2、TLR4以及MyD88的mRNA表达.结果 APC可以显著改善LPS诱导的神经炎症,APC组细胞存活率显著高于模型组,且高剂量组优于低剂量组.APC干预后,MD2、TLR4以及下游MyD88的表达显著下调,外分泌的TNF-α、IL-6和IL-1β表达亦下调,且APC高剂量组优于低剂量组.结论 APC可以通过抑制TLR4-MD2及其下游因子表达抵抗LPS诱导的神经炎症,这为神经疾病的治疗提供了新的参考,为APC的开发应用提供借鉴.
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3种浓度乙醇提取的樟芝多糖对免疫缺陷小鼠模型免疫功能的调节作用研究
目的 探讨3种浓度乙醇提取的樟芝多糖对免疫抑制小鼠模型免疫功能的调节作用.方法 在利用水提醇沉原理进一步纯化总樟芝多糖时,先后使用浓度为90％、70％、50％的乙醇提取到3种樟芝多糖(PW90、PW70、PW50),腹腔注射环磷酰胺构建免疫抑制小鼠模型,分成模型组、总多糖组、PW90组、PW70组和PW50组,4组大鼠腹腔注入相应的樟芝多糖,模型组和另设的对照组腹腔注射0.9％氯化钠注射液,14d后分别检测细胞免疫和体液免疫的相关指标,包括胸腺指数、脾脏指数、T淋巴细胞亚群、淋巴细胞增殖活性、NK细胞杀伤能力,以及血清中IL-2、IL-6、TNF-α的表达水平.结果 环磷酰胺可以抑制小鼠胸腺指数和脾脏指数,而樟芝多糖干预后可以不同程度的提高胸腺、脾脏指数,且PW90组胸腺、脾脏指数高于PW70组和PW50组(P＜0.05).环磷酰胺可以抑制小鼠淋巴细胞增殖能力和NK细胞杀伤能力,樟芝多糖干预后显著提高淋巴细胞的增殖指数,尤其PW90组NK细胞的杀伤能力显著提高,与PW70组和PW50组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).环磷酰胺可以降低淋巴细胞亚群中CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+的比例,樟芝多糖干预后可以提高3者的比例,且PW90组的效果优于PW70组和PW50组(均P＜0.05).樟芝多糖还可以提高小鼠血清IL-2、IL-6和TNF-α的表达水平,PW90组效果显著优于PW70组和PW50组(均P＜0.05).结论 环磷酰胺构建的免疫抑制小鼠的免疫功能得到全面抑制,而3种樟芝多糖可以不同程度提高免疫抑制小鼠的免疫功能,且相同剂量下,90％乙醇沉淀得到的多糖效果优于其他2种.
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樟芝多糖抑制肿瘤相关成纤维细胞生成的作用研究
目的:研究樟芝多糖抑制肝癌细胞条件性培养基诱导骨髓间充质干细胞(MSC)向肿瘤相关成纤维细胞转化的作用.方法:分离人肝癌细胞HepG2培养基(CM),将骨髓间充质干细胞分为正常组、对照组和实验组,正常组为常规DMEM培养基+10％胎牛血清(FBS),对照组为CM+10％FBS培养,实验组为CM+10％FBS培养+10 mg/L的樟芝多糖培养.应用CCK-8试剂盒检测MSC的细胞活性,BrdU标记-流式细胞术检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,PI染色检测细胞周期变化,Western blot法检测α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)、肌间线蛋白(Desmin)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、凝血酶敏感蛋白1(Tsp-1)、成纤维细胞特异蛋白(FSP)的表达以及转化生长因子 β1(TGF-β1)、信号转导分子(Smad1、Smad2)的表达水平,免疫荧光染色法检测 α-SMA、FAP和FSP的表达水平.结果:对照组MSC的细胞活力显著高于正常组和实验组(P<0.05),三组细胞的细胞凋亡率无统计学差异(P>0.05),对照组MSC中G0/G1期比例降低,S期比例增高,相比正常组和实验组具有统计学差异(P<0.05),对照组MSC中α-SMA、Desmin、FAP、Tsp-1、FSP的表达水平以及TGF-β1、Smad1、Smad2的表达水平显著高于正常组和实验组(P<0.05),免疫荧光结果也显示对照组中α-SMA、FAP和FSP的水平显著高于正常组和实验组(P<0.05).结论:肝癌细胞条件性培养基可以促进MSC向肿瘤相关成纤维细胞转化,而樟芝多糖可以抑制该转化,这是樟芝多糖抗肿瘤作用的机制之一.
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樟芝多糖通过降低NLRP3-Caspase1炎性小体表达改善帕金森小鼠神经行为学的机制研究
目的:研究樟芝多糖通过降低NLRP3-Caspase1炎性小体表达改善6-OHDA构建的帕金森小鼠模型的行为学机制.方法:利用6-OHDA脑内注射构建帕金森小鼠模型,通过酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色和行为学判定小鼠模型的构建成功.利用樟芝多糖进行干预,分别在干预前、干预后的第1、3、7天4个时间点进行神经行为学实验,分别采用转棒实验、爬杆实验检测小鼠自主行为能力以及协调能力,4个时间点取小鼠尾静脉外周血采用ELISA法检测外周血中Caspase1和IL-1β的表达,樟芝多糖干预第7天时待进行完行为学实验后小鼠断颈处死,取小鼠脑组织-纹状体,Western blot法检测纹状体中Caspase1、proCaspase1、NLRP3的表达,高效液相色谱检测纹状体中单胺类神经递质的表达,RT-QPCR检测Caspase1、NLRP3、IL-1β、IL-4、IL-6的mRNA表达.NISS1染色检测小鼠脑组织神经细胞凋亡情况.结果:6-OHDA脑内注射可以造成小鼠帕金森样病变,且TH蛋白表达显著下调,樟芝多糖干预后小鼠的行为学得到显著改善(P＜0.05),纹状体中Caspase1、proCaspase1、NLRP3的表达显著下调,与模型小鼠相比具有统计学差异(P＜0.05),且相关炎症因子Caspase1、NLRP3、IL-1β、IL-4、IL-6的mRNA表达下调(P＜0.05),纹状体中单胺类神经递质表达上升(P＜0.05).结论:樟芝多糖可以通过下调NLRP3-Caspase1炎性小体表达来改善6-OHDA构建的帕金森小鼠模型行为改善,这可能是樟芝多糖治疗帕金森的机制之一.
关键词： 樟芝多糖 NLRP3-Caspase1炎性小体 帕金森小鼠 神经行为学 -
HPGPC联合HPLC-ELSD测定樟芝子实体中多糖分子量、多糖组成和单糖含量
目的:建立高效凝胶色谱法(HPGPC)测定樟芝子实体中多糖分子量,HPLC-ELSD法测定樟芝子实体多糖组成和单糖含量的分析方法.方法:HPGPC法采用ShodexOHPak SB-803HQ色谱柱(300 mm×8 mm);流动相:0.70％硫酸钠溶液(含0.02％的叠氮钠);柱温:35℃,流速:0.5 mL/min.HPLC-ELSD法采用Zorbax Carbohydrate色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(80:20);柱温:30℃;流速:0.5 mL/min.联合上述两种方法进行测定.结果:采用上述HPGPC法可以成功计算出樟芝子实体多糖的分子量,采用HPLC-ELSD法可以测定樟芝多糖的组成及单糖的含量.结论:HPGPC联合HPLC-ELSD法可以简单快速的测定樟芝子实体多糖的分子量、多糖的组成和单糖的含量,可以用于樟芝子实体多糖提取纯化后的质量控制.
