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药物中间体S-苯基-L-半胱氨酸的酶法合成
目的 利用在大肠杆菌中高效重组表达的O-乙酰丝氨酸(硫醇)裂解酶A(OASS-A)合成药物中间体S-苯基-L-半胱氨酸,并对合成产物进行纯度及结构鉴定.方法 通过PCR扩增目的基因Cys K,并连接到pET-22b(+)载体上构建原核表达质粒,重组体转到感受态大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达,重组蛋白采用Ni2-树脂柱亲和层析纯化,利用SDS-PAGE鉴定表达纯化蛋白,通过HPLC对合成产物纯度进行检测,应用1H NMR技术对化合物进行结构鉴定.结果 成功构建了OASS-A原核表达载体,在IPTG诱导下获得了高效表达.重组酶高效合成非蛋白质氨基酸S-苯基-L-半胱氨酸.合成的化合物以晶体形式析出,采用HPLC和1HNMR技术对其结构进行了鉴定,合成产物的纯度为100%.结论 利用大肠杆菌中重组表达的OASS-A能够高效合成药物中间体S-苯基-L-半胱氨酸.
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α-氨基酸酯水解酶酶促合成β-内酰胺类抗生素的研究进展
β-内酰胺类抗生素是临床应用为广泛的一类抗感染药物,在我国医药工业中占有十分重要的地位.由于β-内酰胺类抗生素的酶法合成比传统化学法更节能环保、经济,国外已有企业开始大规模应用酶法合成工艺.加强酶法合成β-内酰胺类抗生素研究对于我国医药产业具有十分重要的现实意义.本文主要综述了α-氨基酸酯水解酶的研究进展,并展望它在合成β-内酰胺类抗生素中的应用.
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头孢氨苄的酶法制备工艺研究进展
综述了酶法合成头孢氨苄的工艺方法研究进展.
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固定化青霉素酰化酶合成头孢拉定的工艺研究
用7-氨基-3-脱乙酰氧基头孢霉烷酸和2,5-二氢苯甘氨酸甲酯盐酸盐在磷酸盐缓冲液体系中(20℃,pH 7.0),利用固定化青霉素酰化酶催化合成抗生素头孢拉定,收率90%.
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酶法合成胞磷胆碱钠原料药的质量研究
对酶法合成的胞磷胆碱钠原料药进行了质量研究,并与日本胞磷胆碱钠刘照品的关键指标进行质量对比研究.晶型采用显微摄影、熔点和粉末X衍射方法进行了检测;采用红外光谱法进行了结构鉴别;采用原子荧光法和比色法测定了重金属(以Pb计);采用HPLC测定了含量和有关物质.结果表明两者晶型与结构均一致,含量相近,有关物质与重金属含量相当.酶法合成的胞磷胆碱钠质量与日本胞磷胆碱钠样品质量等同,并有所提高.
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酶法合成2'-脱氧-5-氟尿苷的研究
以化学合成的2-脱氧核糖-1-磷酸二环己胺盐和5-氟尿嘧啶为底物,在芽孢杆菌核苷磷酸化酶的作用下合成产物2'-脱氧-5-氟尿苷.考察了诱导剂种类及浓度对菌体核苷磷酸化酶活力的影响,同时又考察了底物比例、底物浓度、菌体量、反应温度、缓冲液浓度及pH值等参数,得到佳的条件为核糖浓度35 mmol/L,5-氟尿嘧啶为105 mmol/L,磷酸钾缓冲液45 mmol/L(pH 8.0),游离芽孢杆菌12%(湿重)在55℃下反应3h,转化率可达79.36%,产量可达6.83 g/L.采用该法合成2'-脱氧-5-氟尿苷,反应条件温和,同时能够一定程度地解决酶法合成脱氧核苷中脱氧核糖供体来源少、价格高的问题,具有一定的工业化价值.
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乙酰短杆菌酶法合成2'-脱氧鸟苷
胸苷和鸟苷酸在乙酰短杆菌的核苷磷酸化酶和磷酸单酯酶作用下转化成鸟嘌呤、胸腺嘧啶、鸟苷和产物2'-脱氧鸟苷.通过考察菌体量、反应温度、反应pH值、底物浓度和磷酸盐浓度等参数,得到反应适条件为20 mmol/L的胸苷和鸟苷酸,30 mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH7.0),5%游离乙酰短杆菌在60℃下进行反应,经6 h胸苷转化率就可达到高为56.4%.反应液通过离子交换的方法进行分离,可以得到纯度90.2%的2'-脱氧鸟苷.
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酶法合成6-氯嘌呤核苷
利用菌种Lactobacillus helveticus(ATCC 10697)所产生的N-脱氧核糖转移酶,以底物鸟苷和6-氯嘌呤为原料通过碱基交换合成6-氯嘌呤核苷,并优化了反应条件,25 m1的锥形瓶装有反应液10 ml,结果显示佳反应条件如下:底物适反应浓度为30 mmol/L(鸟苷)和10 mmol/L(6-氯嘌呤),菌体添加量8%~10%(湿重),反应温度40℃,0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH值6.0),摇床转速120 r/min,反应时间24 h,6-氯嘌呤核苷收率可达到51.6%,具有较好的应用前景.
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酶法合成5-氟尿苷
采用产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes) CPU 7856变异株的游离细胞,利用其中的嘧啶核苷磷酸化酶(Uridine Phosphorylase)通过碱基交换进行酶法合成目的物.试验以30mmol/L尿苷(UR),30mmol/L 5-氟尿嘧啶( FU),30mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.8)的混合物加入10%的产气肠杆菌湿菌体反应3h,底物UR的转化率可达50%.
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罗汉果苷ⅢE的酶法合成
为开发罗汉果苷ⅢE的简易制备方法,为开发罗汉果苷类甜味剂提供参考依据.本研究以罗汉果苷Ⅴ为探针筛选糖苷水解酶库,获得了能够区域选择性合成罗汉果苷ⅢE的CPU-GH17,通过考察异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、诱导温度和时间等参数建立了CPU-GH17的高效可溶性表达条件:0. 4 mmol/L IPTG、15 ℃和12 h.在此基础上,针对反应pH、温度、酶量、底物浓度以及反应时间等参数进行系统优化,终确定pH 6. 0、45 ℃、3 U/mL酶、5 mg/mL底物和20 h时,罗汉果苷Ⅴ可以完全转化成罗汉果苷ⅢE.本研究成功地开发了基于CPU-GH17的罗汉果苷ⅢE的酶法合成新工艺,并验证了其规模化生产的可行性.
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RP-HPLC 法同时测定酶法合成阿莫西林工艺中的原料、中间体和产物的含量
目的:建立同时测定酶法合成阿莫西林反应体系中原料、中间体和产物含量的反相高效液相分析方法。方法:以 Gemini-NX-C18为固定相;甲醇∶0.05 mol/L、pH 5.6的磷酸盐缓冲液10∶90(V∶V)为流动相;流速1.0 mL/min;检测波长230 nm;进样量10μL;柱温30℃进行检测。结果:6-氨基青霉烷酸、D-对羟基苯甘氨酸甲酯、D-对羟基苯甘氨酸、阿莫西林在各自的线性条件内线性关系良好,低检测限分别为4.00、1.00、0.04、1.00 mg/L。结论:该方法准确灵敏,适合同时测定酶法合成阿莫西林反应体系中原料、中间体和产物的含量。
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α-生育酚琥珀酸酯的酶法合成研究进展
酶法合成具有反应条件温和、选择性高及环境友好等特点,为制备高质量的α-生育酚琥珀酸酯提供了一条新途径.本文首先概述了酶法合成α-生育酚琥珀酸酯的催化剂及其催化机制,重点介绍了酶催化合成α-生育酚琥珀酸酯的研究成果,讨论了酶催化合成α-生育酚琥珀酸酯研究中的若干问题,后展望了酶催化合成α-生育酚琥珀酸酯的发展前景.
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头孢氨苄酶法合成影响因素概述
头孢氨苄作为第一代口服的头孢菌素类抗生素,对多种革兰阳性菌和革兰阴性菌均有很强的抗菌活性.目前我国制药工业中生产头孢氨苄主要是化学合成法,合成过程步骤繁琐,对环境污染严重.与传统化学合成法相比,生物酶法合成头孢氨苄具有反应条件温和、工艺简便、绿色环保、洁净安全等优点.本文概述了酶法合成头孢氨苄固定化酶的制备,合成过程中各个反应物浓度、温度、pH、投酶量、非水介质对反应转化率的影响以及酶法合成头孢氨苄存在的问题.
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β-内酰胺抗生素的酶法合成研究进展
β-内酰胺抗生素的酶法合成是21世纪β-内酰胺抗生素发展的必然趋势之一,本文对近年来β-内酰胺抗生素合成研究、产品的分离纯化、酶反应器研究进行概述.
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反式头孢丙烯的酶法合成及其体外抗菌活性
以7-苯乙酰氨基-3-E-丙烯基-3-头孢菌素-4-羧酸(反式GPRA)为原料,在青霉素酰化酶作用下,首先酶法水解得到3-E-丙烯基-3-头孢菌素-4-羧酸(反式APRA),过滤固相酶,滤液调pH分离得到反式APRA固体;在青霉索酰化酶作用下,反式APRA再与对羟基苯甘氨酸乙二醇酯缩合,得到反式头孢丙烯;酶法合成所得的产品与进口反式头孢丙烯对照品一致.初步体外抗菌试验表明,反式头孢丙烯对金葡菌和大肠埃希菌的体外抗菌活性比临床用头孢丙烯(顺式90.0%,反式9%)弱.