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高脂饲料诱导的胰岛素抵抗小鼠肝脏组织差异表达microRNAs的鉴定及生物信息学分析
目的 采用茎环-逆转录实时荧光定量PCR方法,鉴定高脂饲料诱导的胰岛素抵抗小鼠肝脏组织中差异表达的mircoRNAs(miRNAs),即miR-1897-3 p、miR-690和miR-7a-5p,并预测分析miRNAs调控的靶基因和功能,探讨胰岛素抵抗与差异表达的miRNAs的相关性.方法 30只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和高脂饲料诱导的胰岛素抵抗模型组,设计茎环引物和实时荧光定量PCR特异引物,建立茎环-逆转录SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法,检测小鼠肝脏组织中miR-1897-3 p、miR-690和miR-7a-5p的表达.统计学分析小鼠miR-1897-3p、miR-690和miR-7a-5p表达的差异.利用生物信息学软件预测miRNAs调控的靶基因,分析靶基因富集的基因功能(gene ontology,GO)和涉及到的信号转导通路及其靶基因蛋白的相互作用.结果 经实时荧光定量PCR鉴定分析,与对照组相比,胰岛素抵抗组小鼠肝脏组织中miR-1897-3p、miR-690、miR-7a-5p表达下调(P＜0.05).生物信息学分析结果显示,有16种靶基因被两种差异表达的miRNAs调控,其中有8个靶基因可与4种以上的蛋白质相互作用,Rac1、Rhoa、Prkcz、Tgfbr2、Itch和Ube2d3蛋白位于网络的中心节点,且它们与胰岛素信号通路相关或存在交联.结论 肝脏miR-1897-3 p、miR-690和miR-7a-5p可能参与了胰岛素抵抗的病理生理过程,其机制可能通过调节靶基因的表达,影响了胰岛素信号通路的正常级联反应.
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基于TCGA数据库构建肺腺癌预后相关的微小RNAs风险模型
目的 寻找肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)特异性的预后相关微小RNAs(microRNAs,miRNAs),为LUAD患者预后预测及个性化治疗方案制定提供依据.方法 下载TCGA数据库中522例LUAD患者组织标本的miRNA-Seq数据和临床病理及生存时间数据,用R语言对LUAD与癌旁组织中差异miRNAs进行分析.采用LASSO&COX回归模型在训练集(245例LUAD)中进行LUAD预后相关miRNAs筛选,并构建基于7个miRNAs表达谱的线性风险模型.根据风险值的高低,以中位风险值为界将患者分为高、低风险组,并分别在测试集(245例LUAD)和总体标本(490例LUAD)中对风险模型预测患者预后的有效性进行验证.采用COX回归分析miRNAs风险模型是否是独立的预后因子.结果 LUAD组织与癌旁组织中共有72个差异表达的miRNAs(上调45个、下调27个).从训练集中确定miR-101-3p、miR-148a-3p、miR-192-5p、miR-193b-3p、miR-505-3p、miR-584-5p和miR-99a-5p 7个与总生存期相关的miRNAs构建预后风险模型.在训练集、测试集及总体标本中,高风险组患者与低风险组患者相比,总体生存时间均显著降低(P均<0.05).经多因素COX回归分析,风险模型在训练集、测试集及总体样本中均是一个独立的预后因子(训练集HR=1.97,P=0.02;测试集HR=1.927,P=0.009;总体HR=1.909,P=0.001).结论 研究确定了7个与LUAD患者预后相关的miRNAs,基于7个miRNAs构建的风险模型是1个独立的预后因子.
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微小RNAs在糖尿病肾病中的作用
糖尿病肾病是糖尿病的重要并发症之一.目前关于糖尿病肾病的发生发展机制尚不十分明确.近年来研究发现,表观遗传学因素在其进展中发挥了重要作用,其中微小RNAs (microRNAs)在糖尿病肾病的发展中发挥了保持足细胞正常功能及细胞外基质动态平衡等多种功能.
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微小RNAs与糖尿病肾病
微小RNAs(microRNAs,miRNAs)是一类内源性非编码单链小分子RNA,通过介导靶mRNA降解或靶基因翻译抑制来调节靶基因的表达.糖尿病肾病是糖尿病的主要并发症,也是终末期肾脏病的首位病因,严重威胁人类健康.目前研究表明,miRNA在糖尿病肾病的发生、发展过程中发挥重要作用.一些miRNA的表达异常(如miR-192、miR-200s、miR-29a、miR-29c、miR-21、miR-377和miR-93等的上调或下调)与糖尿病肾病的发生、发展密切相关.因此,深入研究miRNAs在糖尿病肾病发病中的作用可能为糖尿病肾病的治疗提供新的线索.
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脓毒症血清miRNA表达谱的初步研究
目的：探讨miRNA在脓毒症患者血清中的表达及临床应用价值。方法收集34例脓毒症患者血清（Sepsis组），以及性别年龄与之相匹配的20名健康体检者（健康对照组）和34例具有全身炎症反应患者的血清（SIRS组），利用芯片技术对其中3例Sepsis患者和3例健康体检者进行miRNA表达谱筛选。从筛选出有表达差异的miRNA中，选取与微生物感染相关的7个miRNA，扩大样品量， qRT?PCR对3组样品进行验证，分析评估差异miRNA的临床应用价值。结果芯片实验结果显示Sepsis组与健康对照组共有36个差异表达的miRNA，其中表达上调的miRNA有16个，表达下调的miRNA有20个。经qRT?PCR扩大样品量验证发现，hsa?miRNA?92a?3p在健康对照组、SIRS组和Sepsis组的表达水平依次呈下调趋势（P<0.05）。hsa?miRNA?92a?3p在评价Sepsis组和健康对照组的曲线下面积（AUC）为0.965，当佳临界值为0.637时，敏感度为100%，特异度为82.4%。在评价SIRS组和健康对照组的曲线下面积（AUC）为0.844，当佳临界值为0.698时，敏感度为90.0%，特异度为79.4%。在鉴别诊断Sepsis和SIRS时hsa?miRNA?92a?3p曲线下面积为0.769，当佳临界值为0.532时，敏感度为64.7%，特异度为88.2%。结论 Sepsis患者血清中特异表达的hsa?miRNA?92a?3p对Sepsis诊断及鉴别诊断具有潜在应用价值。
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弥漫性大B细胞淋巴瘤患者血清和细胞中miR-21的表达及其临床意义
目的 探讨微小RNA-21(miR-21)在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞系和患者血清中的表达及其在DLBCL早期诊断、基因分型及预后判断中的意义.方法 用实时荧光定量聚合酶链反应( FQ-PCR)从细胞水平检测9种DLBCL细胞系(OCI-Ly1、OCI-Ly3、OCI-Ly4、OCI-Ly7、OCI-Ly8、OCI-Ly10、OCI-Ly18、OCI-Ly19和HBL)中miR-21的表达,及临床确诊的62例DLBCL患者(DLBCL组)、50名健康体检者(健康对照组)血清miR-21表达水平；同时,随访62例DLBCL患者无复发生存期(RFS),应用Kaplan-Meier生存曲线分析62例DLBCL患者血清miR-21表达与预后的关系.结果 健康对照组B淋巴细胞miR-21的相对表达量为1.04±0.02,9种DLBCL细胞系miR-21 相对表达量依次为2.30±0.35、237.97±56.19、5.27±0.83、3.40±0.30、11.22±2.70、133.55±16.78、6.63±0.24、4.91±0.37、81.59±6.64,9种DLBCL细胞系的miR-21表达水平均高于健康对照组(t值分别为7.3、13.7、2 1.0、6.2、8.8、13.6、6.5、39.5、18.1,P均＜0.01)；且ABC亚型细胞系(OCI-Ly3、OCI-Ly10、HBL)显著高于GCB亚型细胞系(OCI-Ly1、OCI-Ly4、OCI-Ly7、OCI-Ly8、OCI-Ly18、OCI-Ly19；t=11.18,P＜0.01).DLBCL组血清中miR-21的表达量为21.38( 10.26 ～45.21),健康对照组为1.87(1.05 ～3.97),DLBCL组血清miR-21的表达显著高于健康对照组(U=168,P=0.000).DLBCL患者中GCB亚型miR-21的表达为18.30(7.32～33.46),ABC亚型miR-21的表达为28.68( 14.92～98.44),ABC亚型miR-21的表达高于GCB亚型(U=336,P=0.043).此外,GCB型Ⅰ+Ⅱ期患者血清miR-21表达为24.75( 16.08 ～50.38),而Ⅲ+Ⅳ期为11.96(4.10～21.05)；ABC型Ⅰ+Ⅱ期患者血清miR-21表达为47.49( 25.65～295.41),而Ⅲ+Ⅳ期为16.66(5.35～44.30),Ⅰ+Ⅱ期明显高于Ⅲ+Ⅳ期(GCB型U=62,P=0.013;ABC型U=53,P=0.014).随访DLBCL患者的RFS,miR-21高表达患者预后明显好于miR-21低表达患者(U=259,P=0.035).结论 DLBCL患者血清miR-21高表达,且与DLBCL临床分级分期、基因型和预后判断密切相关,miR-21有可能成为DLBCL早期诊断、基因分型及预后判断的新分子标志.
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microRNA-301在胰腺癌中的表达及其临床意义
目的 分析miR-301在胰腺癌组织中的表达,探讨其在胰腺癌侵袭转移中的意义.方法 用FQ-PCR方法从细胞水平检测5种胰腺癌细胞系(PANC-1、PaCa-2、AsPC-1、Hs-766T、BxPC-3)中miR-301的表达;进一步用免疫组织化学方法从组织水平检测胰腺癌组织芯片(含60份胰腺癌组织、10份癌旁组织和10份正常胰腺组织)中miR-301的表达;在证实miR-301高表达后,进一步研究其在胰腺癌侵袭转移中的临床意义,用100 nmol/L miR-301抑制剂(anti-miR-301)或阴性对照(Anti-miR~(TM) Negative Control#1)处理对数生长的胰腺癌细胞系PANC-1、PaCa-2,用WB检测胰腺癌细胞系中侵袭转移相关分子COX-2、MMP-2的表达,并用Transwell技术检测胰腺癌细胞的侵袭转移能力.结果 FQ-PCR检测结果显示,在5种胰腺癌细胞系PANC-1、PaCa-2、AsPC-1、Hs-766T、BxPC-3中miR-301的相对表达量分别为33.09±4.21、30.76±3.18、47.57±3.56、20.20±1.21、76.75±13.51;而正常胰腺细胞中为1.00±0.08;5种胰腺癌细胞系分别与正常胰腺细胞相比,差异有统计学意义(t值分别为8.86、9.53、6.39、6.77、11.18,P均<0.01).免疫组织化学结果亦显示,胰腺癌组织、癌旁组织及正常胰腺组织中miR-301的相对表达量分别为0.88±0.09、0.22±0.04、0.14±0.05;胰腺癌组织分别与癌旁组织及正常胰腺组织相比,差异有统计学意义(t值分别为15.1、10.6,P均<0.01);正常胰腺组织与癌旁组织相比,差异无统计学意义(t=1.32,P=0.22).用miR-301抑制剂抑制胰腺癌细胞系PANC-1、PaCa-2中miR-301的表达后,WB检测结果显示,侵袭转移相关分子COX-2、MMP-2的表达下调;细胞侵袭转移能力试验结果显示,miR-301抑制剂处理后跨膜转移的细胞数分别为PANC-1(587±27)个、PaCa-2(363±13)个,而阴性对照处理后跨膜转移的细胞数为:PANC-1(1 091±15)个、PaCa-2(737±44)个;miR-301抑制剂处理与阴性对照处理相比,细胞侵袭转移能力亦显著下降(t值分别为7.89、7.56,P均<0.01).结论 胰腺癌细胞系和组织中miR-301高表达;且与胰腺癌的侵袭转移密切相关,抑制miR-301的表达能够有效抑制胰腺癌细胞的侵袭转移,miR-301有望成为抗胰腺癌侵袭转移治疗的新分子靶标和胰腺癌早期诊断的新分子标志.
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临床实验室检测循环微小RNA中应关注的问题
目前,已发现循环微小RNA( microRNA,miR)在体液中可稳定存在,其表达谱和表达量的变化与肿瘤等多种疾病相关；因此,循环miR很有希望成为相关疾病下一代新的生物标志物.然而,至今在有关循环miR的临床研究中,始终存在使用标本来源不一致、检测方法多样、数据分析缺乏标准化等多种缺陷,因而导致研究数据重复性较差、结论不统一,很难真正应用于临床诊疗工作中.对这些问题的解决,今后我们需要进一步规范标本选择、改进检测试剂和检测方法、对检测结果的数据分析和判读等进行标准化,以终实现临床实验室能够快速、简便、低成本的检测循环miR,辅助开展疾病的临床诊断和治疗.
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miR-146a在自身免疫性疾病发病机制及临床诊疗研究中的进展
微小mRNA( miR)是一类长约22个核苷酸的非编码RNA,通过作用于相应mRNA在转录后水平调节基因表达,在炎性反应和自身免疫病中发挥重要作用.近期关于miR-146a在自身免疫性疾病中发挥作用的研究备受关注.在此对miR-146a与几种常见自身免疫性疾病发病机制的相关性及其潜在临床应用价值进行阐述.
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microRNA作为急性肾损伤早期诊断生物标志物的研究进展
近年来急性肾损伤(AKI)的发病率有增高趋势,且死亡率高,预后差.改善AKI预后的关键是早期诊断与干预.由于缺乏诊断AKI的早期生物学标志物,往往导致早期有效治疗的延误.传统的诊断指标血清肌酐和尿素反应滞后,且受到多种影响因素干扰.近年来发现了一些新型的早期诊断标志物,其中microRNA(miRNA)是一种内源性的非编码微小RNA,研究表明miRNA与AKI的发生发展有关.
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多发性骨髓瘤患者外周血单个核细胞微小RNA-202的表达及意义
目的 建立SYBR Green Ⅰ FQ-PCR检测人外周血单个核细胞(PBMC)中miR-202表达的方法,并初步探讨其检测MM的意义.方法 采用特异miR-202茎环引物逆转录后,用FQ-PCR对21例MM患者及20名健康人PBMC中miR-202表达水平做相对定量分析；结果用Mann-Whitney法进行两组间miR-202表达差异比较.此外,用1份1∶125稀释标本重复检测5次；及同一标本连续检测3d,每天检测1次,每次重复5管,根据循环阈值(Ct)计算标准差和变异系数(CV),以评价所建方法的重复性.结果 FQ-PCR检测PBMC中miR-202的扩增曲线呈标准的S型,熔解曲线峰值单一,未见杂峰,显示其特异性较好.批内CV为1.2％,批间CV为3.2％,当标本miR-202浓度被稀释为12.8 pmol/μl时,仍可稳定地得到扩增曲线.FQ-PCR检测MM组中miR-202表达量为1.844(0.162 ～3.966),健康对照组表达量为0.014(0.007～0.221),MM组中miR-202表达明显高于健康对照组(U=48.000,P＜0.01).结论 FQ-PCR是一种快速简便、特异性和重复性较好的检测miR-202的方法,MM患者PBMC中miR-202表达升高,其可能参与MM的发生过程,并有可能成为MM诊断和治疗的新指标.
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改良通用茎环引物筛查和定量检测微小RNA方法的建立
目的 建立可同时筛选和定量检测成熟型miR的荧光定量PCR方法.方法 改良通用茎环引物,在其茎环尾端引入8个随机碱基片段,用于成熟型miR逆转录,以建立SYBR Green PCR筛选和定量检测miR的方法(简称“改良通用茎环引物miR法”).同时,采用10倍梯度稀释的miR-155标准品cDNA(1～109拷贝/μl)评价其灵敏度；采用熔解曲线评价其检测miR-155的特异性；通过对2×105、2×106、2×107拷贝/μl的miR-155标准品cDNA分别进行批内20次重复实验,以其循环阈值(Ct)的变异系数(CV)评价其精密度；并与传统茎环法进行比较,计算实验所用时间和引物成本.然后,采用改良通用茎环引物miR法对植物血凝素(PHA)刺激培养0、16、24、48、72 h的人外周血T淋巴细胞内miR进行筛选(87个靶miR,经PubMed检索可能与免疫功能相关),并用以进行miR定量检测分析.结果 建立的改良通用茎环引物法的低检测限为103拷贝/μl的miR-155 cDNA标准品；熔解曲线于80℃呈单峰,证实为针对miR-155的特异性扩增；其批内重复实验的精密度为CV＜2.5％.优化后的通用引物方法与传统方法相比较,节约引物约75％(1 917 bp比7 851 bp),节省逆转录时间约120min(85 min比205 min).用改良通用茎环引物法筛选T淋巴细胞中87个miR,85个miR在PHA刺激前、后的Ct无变化,而miR-150和miR-155表达量在T淋巴细胞激活前后分别发生超过10倍下降(72 h)和8倍的升高(48 h),且差异有统计学意义(Z=-2.023,P=0.043;Z=-2.032,P=0.042).结论 建立的改良通用茎环引物miR法具有快速、重复性好、灵敏、节约引物用量和实验时间的优点,可用于T淋巴细胞的miR筛查和定量检测.
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荧光定量PCR检测血清微小RNA-21方法的建立及对乳腺癌诊断的初步应用
目的 建立一种SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测血清miR-21方法,并初步探讨其对乳腺癌诊断的应用价值.方法 用Trizol试剂提取血清总RNA.用茎环引物将miR-16(作为miR-21内参基因)与miR-21分别逆转录成相应cDNA.再用SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR对cDNA进行扩增、检测.然后,通过信噪比(signal to noise ratio,SNR)分析试验的准确性；通过熔解曲线评价试验的特异性；通过标准曲线的R2评估试验的精确性；通过批内和批间差异计算试验的稳定性.另外,用自建方法检测33例乳腺癌患者、18例乳腺良性疾病和49名健康人群血清miR-21和miR-16水平,并根据乳腺癌组与健康对照组中miR-21相对表达量确定临界值,以评价其对乳腺癌诊断的敏感度、特异度.结果 通过PCR退火与延伸在温度和时间上的优化,本试验所建立方法SNR≥99.36％；熔解曲线为单峰；标准曲线R3=0.994 8；批内CV＜ 1.5％,批间CV＜ 4％.以miR-16为内参,用自建SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测乳腺癌组、良性疾病组与健康对照组血清miR-21的相对表达量分别为20.83±18.18、20.86±10.11和9.33±4.44,经Kruskal Wallis检验,3组间表达量差异有统计学意义(x2=16.92,P＜0.001),且健康对照组与乳腺癌组、健康对照组与良性疾病组间的差异均有统计学意义(Z值分别为-2.58、-4.42,P均≤0.01),而乳腺癌组与良性疾病组血清miR-21表达量差异无统计学意义(Z=-0.51,P=0.608).以miR-21相对表达量18.32为临界值,其对乳腺癌诊断的敏感度为51.5％(17/33),特异度为93.9％(46/49).结论 建立了一种较敏感、特异、稳定的SYBRGreen Ⅰ荧光定量PCR检测血清miR-21方法,该方法对乳腺癌的诊断可能有一定价值.
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microRNAs调控网络在大肠癌发病机制中的研究进展
microRNAs(miRNAs)是一种长度为19-24个核苷酸的单链非编码RNAs,他们通过下调基因表达广泛参与各种重要的生命进程,如细胞凋亡、分化、增殖及个体发育等.近研究表明,miRNAs可调控许多参与大肠癌(coloreetal cancer,CRC)发生发展的癌基因和抑癌基因通路,如Wnt/β-连环蛋白,KRAS,磷脂酰肌醇(3)-激酶(PI3-K)和P53信号通路等.此外,单核苷酸多态(SNPs)对CRC中miRNAs表达的影响及miRNAs在CRC表观遗传学改变中的作用也日益受到人们的关注.本文将就miRNAs调控网络在CRC发生发展中的作用作一综述.
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microRNAs对胰岛素合成、分泌及其信号通路影响的研究进展
microRNAs是一种长度在19～23个核苷酸左右的非编码小分子RNA,通过抑制靶mRNA的表达或翻译,调控人体30％以上基因的表达.microRNAs的表达异常可导致多种疾病,包括糖尿病.胰岛素是人体唯一降血糖激素,其分泌不足及作用缺陷会引起T2DM.胰岛β细胞中有多种microRNAs表达,这些microRNAs可调节胰岛素的合成与分泌,影响胰岛β细胞增殖.另外,胰岛素靶组织上的microRNAs可通过调节胰岛素信号通路影响胰岛素的作用.由于microRNAs具有组织特异性,并且在不同疾病中会有相应的表达改变,因此,其有作为多种疾病的生物标记及治疗靶点的“潜力”.
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外周血中Let-7e、微小RNA-206、微小RNA-605及微小RNA-1236表达与原发性高血压的相关性研究
目的:探讨外周血中Let-7e、微小RNA-206、微小RNA-605及微小RNA-1236与原发性高血压的相关性.方法:选取2014-07到2016-12在内蒙古自治区医科大学附属医院收治的169例原发性高血压患者(原发性高血压组)及同期体检健康者143例(正常对照组),应用血压计测定研究对象血压,通过反转录实时定量聚合酶链式反应(PCR)测定Let-7e、微小RNA-206、微小RNA-605及微小RNA-1236在外周血中的表达量.并进行微小RNA表达量与高血压发病相关性及原发性高血压发病的多因素Logistic回归分析.结果:原发性高血压组Let-7e、微小RNA-605的表达量均高于正常对照组,分别为1.42±0.15 vs 1.00±0.21 (P<0.05)和2.14±0.22 vs 1.00±0.11(P<0.05);而原发性高血压组中微小RNA-206、微小RNA-1236的表达量均低于正常对照组,分别为0.69±0.12 vs 1.00±0.18(P<0.05)和0.46±0.17 vs 1.00±0.31(P<0.05),差异均有统计学意义.相关性分析显示,Let-7e的表达量与收缩压呈显著正相关(r=0.562,P<0.05);微小R-206表达量与收缩压呈显著负相关(r=-0.582,P<0.05),与舒张压呈显著正相关(r=0.507,P<0.05);微小RNA-605的表达量与收缩压呈显著正相关(r=0.625,P<0.05);微小RNA-1236的表达量与舒张压呈显著负相关(r=-0.598,P<0.05),与体重指数呈显著正相关(r=0.690,P<0.05).多因素Logistic回归分析显示,体重指数的升高显著增加患原发性高血压的危险(95%CI:1.7933~3.9941,P<0.01),Let-7e和微小RNA-605的表达量的升高显著增加患高血压的危险(95%CI:1.5378~1.7632, P<0.05和95%CI:1.5983~2.4203,P<0.01),而微小RNA-206和微小RNA-1236的表达量的降低,也显著增加原发性高血压患病的风险(95%CI:0.5546~0.8782,P<0.01和95%CI:0.2876~0.5614,P<0.01).结论:外周血中Let-7e、微小RNA-206、微小RNA-605及微小RNA-1236与原发性高血压的发病有密切的关系.
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血浆微小核糖核酸-1和微小核糖核酸-146b表达水平与急性ST段抬高型心肌梗死诊断及预后的相关性研究
目的:观察早期急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者血浆微小核糖核酸(miR)-1和miR-146b表达水平的变化,探讨其对急性STEMI的早期诊断价值和与患者预后的相关性.方法:选取急性STEMI患者47例和健康对照受试者23例,在患者入院即刻、发病12 h(T12)、24 h(T24)、48 h(T48)、72 h(T72)、1周(T1W)收集血液标本并用实时定量聚合酶链式反应检测血浆miR-1和miR-146b表达水平,同时收集患者对应时间点血浆心肌肌钙蛋白(cTnT)水平,并与对照受试者进行对比.用受试者工作特征(ROC)曲线评估患者入院即刻血浆miR-1、miR-146b表达水平对急性STEMI的诊断价值;评估入院即刻血浆miR-1、miR-146b表达水平与C反应蛋白、B型利钠肽、白细胞计数的相关性;随访患者确诊1个月内主要不良心血管事件发生情况;分析峰值时间血浆miRNA-1、miR-146b不同表达水平患者的30天累积生存率.结果:急性STEMI患者入院即刻、T12、T24、T48血浆中miR-1、miR-146b的表达水平以及入院即刻、T12、T24、T48、T72外周血中cTnT表达水平较对照受试者均升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);入院即刻血浆miR-1、miR-146b表达水平对于诊断急性STEMI的ROC曲线下面积分别为0.800、0.789(P均<0.001);入院即刻血浆miR-146b表达水平与C反应蛋白、B型利钠肽、白细胞计数呈正相关关系(P均<0.05);峰值时间血浆miR-1、miR-146b高表达患者的30天累积生存率明显低于低表达患者(P均<0.05).结论:血浆miR-1和miR-146b有可能作为早期诊断急性STEMI的生物标志物,血浆miR-1和miR-146b表达水平的高低与急性STEMI患者预后存在相关性.
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不稳定冠心病循环microRNA表达谱特点及功能分析
目的：明确不稳定冠心病患者循环microRNA（miRNA）表达谱，并对差异表达miRNA在细胞增殖中的调控作用进行探讨。方法（1）分别收集不稳定冠心病患者（试验组）及疑似心绞痛的非冠心病患者（对照组）血浆，通过miRNA芯片检测，得到试验组患者循环miRNA表达谱。（2）分别在3个不同的生物信息学数据库——TargetScan、miRanda和DIANAmT，对miRNA靶基因进行预测，得到在3个数据库均有预测的miRNA靶基因。（3）通过DAVID数据库，对上述靶基因在细胞增殖方面的功能进行聚类及信号通路分析。（4）通过实时（real time，RT）-PCR实验，进一步验证循环miRNA-19b（miR-19b）在两组中的表达水平。（5）结合功能聚类分析结果，对差异表达明显的（miR-19b）在细胞增殖中的调控作用进行验证。结果（1）与对照组相比，试验组存在39个差异表达miRNAs，其中miR-19b差异表达明显。（2）通过对miRNA靶基因的预测，发现有14个miRNAs与细胞增殖关系密切，其中miR-19b调控的细胞增殖相关基因多。（3）RT-PCR检测证实不稳定冠心病患者血浆miR-19b水平较对照组明显增高。（4）细胞增殖实验表明，miR-19b明显抑制血管内皮细胞（EA.hy926细胞）增殖。结论不稳定冠心病患者具有特定的循环miRNA表达谱，这些miRNAs可能是不稳定冠心病的潜在生物标志物。miR-19b可能通过抑制内皮细胞增殖，发挥稳定动脉粥样硬化斑块的保护作用。
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循环MicroRNAs在NSCLC诊治中的研究进展
肺癌是全世界范围内发病率高的肿瘤,也是我国癌症死亡的首要原因[1-3].非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌中常见的组织学类型,占85％左右[4].肺癌患者在确诊时往往已处于晚期,失去手术机会,虽然少数患者可使用靶向药物提高生存,改善生活质量,但大多数患者只能采取化疗,总生存率依然非常低,许多肺癌患者在癌症确诊后数月去世.所以,肺癌早期诊断势在必行.研究发现miRNAs与肺癌的类型、进展、患者生存率及预后评估等有密切联系[5].miRNAs可作为致癌因子,也可作为肿瘤抑制因子,从而调控细胞的增殖、凋亡、侵袭及血管生成等.循环miRNAs作为一种新型的生物标志物,在肺癌的诊治,尤其是对NSCLC的早期诊治中将起到重大作用.
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微小RNA-92a抑制剂对高糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用
目的探讨微小RNA（microRNA，miR）92a抑制剂对高糖诱导的内皮细胞损伤的作用。方法分离原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs），脂质体转染miR?92a抑制剂或阴性对照，采用5 mmol/L正常浓度葡萄糖或30 mmol/L葡萄糖刺激HUVECs 48 h后，分为4组：空白组（5 mmol/L葡萄糖），高糖组（30 mmol/L葡萄糖），阴性对照+高糖组（转染阴性对照+30 mmol/L葡萄糖处理），miR?92a抑制剂+高糖组（转染miR?92a抑制剂+30 mmol/L葡萄糖处理）。处理后，用荧光实时定量PCR法分析miR?92a水平，Hoechst染色观察细胞核改变，MTS观察HUVECs活力，Western blotting检测caspase?3和cleaved caspase?3蛋白表达。2组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果高糖组（30 mmol/L）HUVECs与空白对照组相比，miR?92a水平增加31%（1.31±0.37比1，t=1.93，P<0.05）。细胞数目减少，排列不规则，轮廓模糊。细胞核染色质浓缩凝集、边缘化，凋亡小体增加。细胞活力下降19%（81%±2%比1，t=-29.85，P<0.01），cleaved caspase?3/caspase?3增加24%（0.31±0.07比0.25±0.02， t=2.18，P<0.05）。miR?92a抑制剂+高糖组HUVECs与高糖组相比，形态损伤减轻，凋亡小体减少，细胞活力增加9%（88%±11%比81%±2%，t=1.82，P<0.05），cleaved caspase?3/caspase?3减少26%（0.23±0.03比0.31±0.07，t=-2.65，P<0.05）。结论 miR?92a抑制剂可缓解高糖诱导的内皮细胞形态损伤、活力抑制，减少caspase?3激活。miR?92a具有成为防治糖尿病血管并发症靶点的临床价值。
关键词： 内皮细胞 微小RNAs 高糖 细胞活力 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3
