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微小RNAs在非小细胞肺癌中的作用
非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌的常见类型,大部分病例确诊时已至晚期,5年生存率较低.微小RNAs(MicroRNAs)调控着至少1/3的人类编码蛋白基因,其中近半数位于肿瘤相关的染色体区域,研究其在NSCLC发病机制中的作用及基因表达谱有助于肺癌的早期诊断和疗效的提高.本文主要就Micro RNAs的生物合成、检测及其在NSCLC中的作用进行综述.Micro RNAs参与多种细胞生物学过程,它本身具有高度的稳定性,在组织及体液中保持完整的特性以及较高的组织特异性,因而可成为非常有前景的分子标志物.
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人巨细胞病毒微小RNA miR-UL70-5P靶向抑制人即刻早期反应蛋白3的表达
目的 寻找人巨细胞病毒微小RNA miR-UL70-5P调控的靶mRNA,检测miR-UL70-5P对靶mRNA蛋白质表达的调节作用 方法 采用Hybrid-PCR方法从人巨细胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞总RNA中筛选候选靶mRNA;采用荧光素酶实验验证miR-UL70-5p与候选靶mRNA的结合能力;采用Western blot方法检测转染miR-UL70-5P对部分靶mRNA蛋白质表达的调节作用 结果 筛选并鉴定了人即刻早期反应蛋白3 (IER3)等7种靶mRNA可与miR-UL70-5P特异性结合;在293T细胞中过表达的IER3可以被转染的miR-UL70-5P下调30％ 结论 人巨细胞病毒表达的miR-UL70-5P在病毒感染宿主过程中具备抑制IER3蛋白质表达的能力.
关键词： 人巨细胞病毒 微小RNAs 人即刻早期反应蛋白3 -
miRNA-21在结直肠癌中的表达研究
目的 检测MicroRNA-21(miRNA-21)在正常人和结直肠癌患者血清,以及结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中的表达,探讨其与结直肠癌临床病理参数的关系.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测正常人和结直肠癌患者血清,以及结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中的表达,分析miRNA-21的表达与结直肠癌临床病理参数的关系.结果 miRNA-21在结直肠癌患者血清中表达水平显著高于正常人血清(P＜0.05);结直肠癌组织中miRNA-21表达水平明显高于癌旁组织;中晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)结直肠癌组织中miRNA-21表达水平明显高于早期(Ⅰ期和Ⅱ期)结直肠癌(P＜0.05);低分化肿瘤组织中miRNA-21表达水平明显高于中高分化者;有淋巴结转移的结直肠癌组织中miRNA-21表达水平明显高于无淋巴结转移者.结论 miRNA-21在结直肠癌患者血清及肿瘤组织中呈高表达,可能与结直肠癌的发生发展有关.
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石蜡包埋组织在分子生物学实验中的研究进展
甲醛固定石蜡包埋是临床病理组织常规的储存方式,临床石蜡标本包含有丰富的临床信息和病理资料,是进行人类疾病研究非常宝贵的资源. 但是由于组织在甲醛固定和石蜡包埋加工过程中引起RNA和蛋白交联及共价修饰等作用,以至提取的RNA质量较差,使得石蜡组织并未在实验研究中得到广泛的应用.而microRNAs(miRNAs)是一种分子链较短且具有调控作用的小分子RNA,可抵抗组织固定和包埋过程对分子结构造成的影响,在加工处理过程中其分子结构和化学性质仍可保持稳定,且目前已经证实 miRNAs在多种疾病包括肿瘤的发生发展中起着非常重要的作用. 因此通过对石蜡组织中 miRNAs 表达的分析研究,可充分发挥石蜡包埋组织在分子生物学实验研究中的作用,尤其对人类疾病的回顾性研究和一些罕见疾病研究做出更多贡献.
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MicroRNA在视网膜神经节细胞的保护作用
视网膜神经节细胞( RGCs)是视神经主要的组成部分,RGCs的丢失可能会造成视网膜退行性病变,包括糖尿病性视网膜病变、青光眼等〔1〕. 作为一种特殊的感觉神经元, RGCs在中枢神经系统中扮演着重要的角色,能通过调节和传递视觉信息到大脑皮质,形成完整的视觉通路. RGCs受到严重损伤将导致视力下降甚至致盲. 多种有害因素,像组织缺氧、兴奋性中毒、氧化应激及RGC凋亡等均可导致RGCs的损伤.
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miR-21在结肠癌与癌旁组织中的表达及其临床意义
目的:检测MicroRNA-21 (miR-21)在结肠癌及其相应癌旁正常组织中的表达,探讨其与结肠癌临床病理指标的关系.方法:应用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)技术检测50例结肠癌组织标本和癌旁组织标本中miR-21的相对表达量,分析其在2种组织中的表达变化,探讨miR-21表达水平与结肠癌发病位置、临床分期、浸润深度及有无淋巴结转移的关联性.结果:miR-21在结肠癌组织中相对表达水平显著高于癌旁组织(P＜0.05),右半结肠癌组织中miR-21表达水平明显高于左半结肠癌组织(P＜0.05)；Ⅲ期和Ⅳ期结肠癌组织中miR-21表达水平明显高于Ⅰ期和Ⅱ期结肠癌(P＜0.05)；miR-21表达水平在不同浸润深度结肠癌之间比较差异无统计学意义(P＞0.05)；有淋巴结转移结肠癌组织中miR-21表达水平明显高于无淋巴结转移者(P＜0.05).结论:相对于癌旁组织,miR-21在结肠癌组织中表达明显上调,且表达水平与发病位置、临床分期及是否有淋巴结转移有关.
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垂体腺瘤发病的分子机制研究进展
垂体腺瘤是发生在腺垂体的良性肿瘤,是颅内常见的肿瘤之一,通过放射学检查和尸检,垂体腺瘤的发病率高达22.5％左右[1].除泌乳素型外,手术治疗是垂体腺瘤患者的首选治疗方法.由于垂体腺瘤的发生机制尚不完全清楚,垂体腺瘤的诊断、治疗和预后尚不尽如人意.随着分子生物学、细胞生物学、遗传学、基因组学和测序技术的飞速发展,垂体腺瘤发生、发展机制研究也取得了较大进展,进一步阐明垂体腺瘤发病机制,有利于提高垂体腺瘤的诊治水平.一般认为垂体腺瘤是单克隆来源的肿瘤,垂体腺瘤的发生和发展是由原癌基因的激活、抑癌基因的失活、细胞周期失调、微小RNAs (miRNAs)和长链非编码RNAs(lncRNAs)表达异常共同作用的复杂过程.现就垂体腺瘤发病的分子机制作一综述.
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MicroRNA在血吸虫与血吸虫病中的作用研究
血吸虫病是一种由裂体吸虫(血吸虫)导致的疾病,我国主要流行日本血吸虫.日本血吸虫虫卵沉积形成的肉芽肿和肝纤维化是慢性血吸虫病的主要病理机制.微小RNAs(MicroRNA,miRNA)是一类长度约22nt的内源性非编码小分子RNA,它通过剪切或降解靶向miRNA调控真核生物体内一系列重要的功能.研究表明,血吸虫及宿主miRNA在尾蚴入侵、雌虫性成熟、产卵和肝脏肉芽肿形成过程中起重要调控作用,一些宿主miRNA被认为是血吸虫病诊断的特异性分子标记物.本研究总结了近几年来血吸虫及宿主miRNA的研究新进展,为进一步认识miRNA在血吸虫及血吸虫病中的调控作用提供思路.
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MicroRNA在急性肾损伤中的研究进展
1993年,Victor Ambrose的实验室在秀丽隐杆线虫中首次发现miRNA.与此同时,Gary Ruvkun的实验室鉴定了首个miRNA的靶标基因[1-2].这2个重要的发现共同确认了一种新的转录后基因调节机制.在过去几年中,miRNA的研究蓬勃发展,我们也开始从一个新的层面上理解基因组学.miRNA的合成及功能MiRNA由一段被称为mitron的特定DNA区域编码,在RNA聚合酶Ⅱ的作用下合成具有数百对至数千对碱基序列的多茎环结构Pri-miRNAs.后者在RNaseⅢDrosha酶及辅助因子DGCR8的作用下,裂解成单茎环结构Pre-miRNAs,大小一般为60～70个核苷酸.Pre-miRNAs通过Exportin5的运输,从细胞核进入细胞质,再由Dicer酶加工成为成熟的miRNA,行使其正常的生物学功能[3].
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心力衰竭发生发展中微小RNAs的作用及临床意义
微小RNAs(miRNAs)是一类高度保守的非编码小RNA,在转录后水平参与细胞增殖、分化和凋亡,与正常生理过程和疾病的发生发展密切相关.近年来一系列研究证明,miRNAs参与了心力衰竭发生发展的病理生理改变过程,包括体液因子的调节、细胞破坏、神经内分泌的改变和心肌重构等.
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微小核糖核酸-25在胃癌患者血清中的异常表达及其临床意义
目的 探讨微小核糖核酸-25(miRNA-25)在胃癌患者血清中的异常表达及其临床意义.方法 选择第四军医大学西京医院手术及随访资料完整的胃癌(86例)、胃腺瘤(70例)患者和健康对照者(80名)为研究对象,提取血清总RNA,在建立了稳定、敏感的血清miRNA-25绝对定量检测方法(qRT-PCR)的基础上,检测胃癌、胃腺瘤患者和健康对照者血清中miRNA-25表达水平.分析胃癌、胃腺瘤和健康对照者血清中的miRNA-25表达差异及血清miRNA-25表达水平与胃癌临床病理参数的关系.结果 胃癌患者血清中miRNA-25的表达水平(135.6 fmol/μg总RNA)显著高于胃腺瘤(67.7 fmol//μg总RNA)和健康对照者(62.2 fmol/μg总RNA,P＜0.01),同时miRNA-25的受试者工作特征曲线显示,血清miRNA-25对胃癌诊断具有良好的特异度和敏感度(曲线下面积=0.827);有淋巴结转移者[(148.3±10.2)fmol/μg总RNA]和临床病理分期Ⅲ/Ⅳ期[(146.7±9.5)fmol/μg总RNA]胃癌患者血清miRNA-25的表达分别明显高于无淋巴结转移者[(120.3±10.1)fmol/μg总RNA]和Ⅰ/Ⅱ期胃癌患者[(119.4±12.2)fmol/μg总RNA](P＜0.05);相关性研究结果表明,血清miRNA-25高表达胃癌患者的生存期与血清miRNA-25低表达胃癌患者无明显差异(P＞0.05).结论 血清miRNA-25的检测可能有助于胃癌的诊断和预后预测.
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室间隔缺损胎儿心室肌组织微小RNAs时序性表达差异研究
目的 采用微小RNAs(miRNAs)表达谱芯片分析不同孕龄(孕早期与孕中期)室间隔缺损(VSD)胎儿心室肌组织中时序性表达差异的miRNAs.方法 连续性纳入2009年7～12月南京医科大学附属南京妇幼保健院因病理因素流产经解剖证实为VSD且不合并其他畸形的胎儿为VSD组.以同期因生理性难免流产,并经解剖证实无心脏畸形和其他器官畸形的胎儿为对照组,依据孕龄与VSD组1:1匹配.根据孕龄,将VSD组和对照组分别分为孕早期亚组和孕中期亚组.采用Agilent Human 2.0 miRNAs表达谱芯片观察胎儿心室肌组织miRNAs表达变化,芯片数据采用生物信息学方法进行分析,包括差异miRNAs筛选,预测miRNAs靶基因Gene Ontology分析,靶基因信号通路分析,并采用实时PCR法验证芯片结果.结果 VSD组和对照组各纳入6例,两组孕早期亚组和孕中期亚组均各3例.①通过差异miRNAs筛选,发现孕早期VSD亚组与孕中期VSD亚组间有33个时序性表达差异的miRNAs.19个miRNAs在孕早期VSD亚组表达上调,在孕中期VSD亚组表达下调;14个miRNAs在孕早期VSD亚组表达下调,在孕中期VSD亚组表达上调.②生物信息学预测到2 761个靶基因,大部分miRNAs的靶基因中含有与心脏发育直接相关的关键基因(TBX5、GATA4、TBX1和NKX2-5等).③靶基因Gene Ontology分析表明其中与细胞进程、代谢过程和生物调控相关的靶基因分别占整个靶基因数量的23.5%、18.3%和17.7%.④靶基因信号通路分析发现,WNT信号通路中的靶基因在孕早期VSD亚组与孕中期VSD亚组中存在时序性差异.⑤随机挑选孕早期VSD亚组与孕中期VSD亚组时序性表达差异的4个miRNAs(hsa-miR-19a、hsa-let-7e、hsa-miR-134和hsa-miR-206)进行验证,定量PCR结果显示,孕早期VSD亚组分别上调3.2(hsa-miR-19a)和4.1倍(hsa-let-7e),下调5.3(hsa-miR-134)和4.4倍(hsa-miR-206);孕中期VSD亚组分别下调4.8(hsa-miR-19a)和3.4倍(hsa-let-7e),上调4.5(hsa-miR-134)和3.9倍(hsa-miR-206).结论 时序性表达差异的miRNAs在胎儿VSD畸形的发生中可能起着重要作用,但本研究样本量较小,需要进一步扩大样本量进行验证.这些差异表达miRNAs的预测靶基因与细胞发育、分化和代谢密切相关,含有与心脏发育直接相关的关键基因,部分靶基因为WNT信号通路中的关键因子,提示VSD的发生发展是机体在miRNAs的参与下,在多个层面上使基因表达失控的共同结果.
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微小RNA-214在胰腺癌中的表达及临床意义研究
背景与目的：微小RNAs(microRNAs，miRNA，miR)在多种肿瘤中异常表达，可能与肿瘤的发生、发展、侵袭及转移有关，被认为可能起癌基因或抑癌基因的作用。该研究旨在检测miR-214在胰腺癌组织中的表达情况，并探讨其临床意义。方法：实时定量PCR(real-time PCR，RT-PCR)法检测36例胰腺癌组织与相应癌旁组织中miR-214的表达水平，分析miR-214表达水平与胰腺癌患者临床病理特征及预后的关系。结果：miR-214在69.4%(25/36)的胰腺癌组织中相对高表达，表达水平为3.45(1.73~5.13)，癌旁组织中的表达水平为1.52(1.09~2.12)，差异有统计学意义(P＜0.01)，并且在T3、T4期患者中的表达水平显著高于T1、T2期患者(P=0.018)。Kaplan-Meier生存分析显示，miR-214表达水平越高，患者生存期越短(P=0.032)。结论：miR-214在胰腺癌组织中的表达上调与胰腺癌的临床病理特征及患者预后密切相关，miR-214可能成为胰腺癌诊断及预后判断的新的分子标志。
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MicroRNAs调控5-氟尿嘧啶化疗敏感性的机制
MicroRNAs(miRNA)是一类内源性小分子非编码RNA,在转录后水平调控基因的表达.半数以上的miRNA定位于与肿瘤发生相关的染色体区域或脆性位点,超过一半的miRNA与癌症发生相关.目前研究表明,一些miRNA与5-氟尿嘧啶(5-Fu)的抗肿瘤化疗敏感性有密切关系,miRNA可通过调控药物代谢相关酶,如胸苷酸合成酶(TS)、二氢嘧啶脱氢酶(DPD)和胸苷酸磷酸化酶(TP)等,调控细胞凋亡(主要是Bcl-2、Bcl-xL、Bax等)以及细胞周期从而影响5-Fu化疗敏感性.此外,miRNA还可通过其他一些机制如调控上皮间质转化(EMT)、多药耐药(MDR)和肿瘤干细胞(CSCs)等影响5-Fu化疗敏感性.
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microRNAs在糖尿病脑梗死发病中的作用
糖尿病脑梗死是糖尿病常见的血管合并症，发病率和死亡率高。微小RNAs在糖尿病及其血管等并发症中的发生、发展过程中具有重要作用。本文综述了近几年与微小RNAs在糖尿病脑梗死发病中的作用机制相关的文献报道。
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微小RNA在自发性高血压大鼠主动脉的差异表达
微小RNAs(microRNAs,miRNAs)是一类基因组编码、非蛋白质编码的小RNA,在转录后水平负性调节靶基因表达.本研究探讨miRNAs在自发性高血压大(spontaneously hypertensive rats,SHR)主动脉的表达特征及其与高血压的关系.取4、8、16和24周龄雄性SHR大鼠及同龄正常血压对照(Wistar-Kyoto,WKY)大鼠.MiRanda、TargetScan和PicTar用于候选miRNAs及靶基因预测分析.通过实时定量RT-PCR检测大鼠主动脉miR-1、miR-133a、miR-155及miR-208的表达,并进一步通过实时定量RT-PCR检测呈差异表达的miR-155和miR-208的预测靶基因mRNA表达.结果显示,SHR大鼠主动脉miR-155表达在4、8、24周时与同龄WKY大鼠无显著差异,但在16周时明显低于同龄WKY大鼠(P<0.05),且大鼠主动脉miR-155表达量与血压呈负相关(r=-0.525,P<0.05).MiR-208表达在4周龄时高,随年龄增长明显下降(P<0.05),其表达水平与血压和年龄呈负相关(r=-0.400,P<0.05;r=-0.684,P<0.0001),但在SHR和WKY大鼠之间无显著差异.miR-1和miR-133a在各年龄组SHR和WKY大鼠间未呈现差异表达.MiR-155和miR-208表达与相应预测靶基因mRNA表达无显著负相关性.以上结果表明,miR-155表达在成年SHR大鼠主动脉明显低于WKY,并与血压呈负相关,提示miR-155可能参与高血压的发生发展,主动脉miR-155表达异常可能是SHR大鼠血压升高的原因之一.大鼠主动脉miR-208表达在幼年时高,随年龄增长而明显下降,提示其可能与血管发育有关.
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新型胃癌相关循环肿瘤标志物的临床应用
虽然近年来胃癌诊断方法和外科治疗技术不断提高,但晚期胃癌患者的预后仍然不理想.因此,探寻更加特异、灵敏的早期生物学标志物,尽早明确诊断和选择治疗方式,对于提高胃癌患者的生存率具有重要意义.随着体液检测及无创检测技术的不断创新,循环肿瘤标志物越来越受到人们的关注.这些新型肿瘤标志物的出现,为疾病的诊断和治疗提供了新靶点,并为患者的生存和预后带来希望.该文主要综述胃癌相关的循环肿瘤标志物及其临床诊断的应用价值,包括循环游离DNA,FERL4等长链非编码RNAs (lncRNAs),miR-200c、miR106a、let-7a等微小RNAs (miRNAs),癌症相关自身抗体,以及通过血清蛋白质组学确定的标志物等.
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微小RNA miR-124在脑缺血中的作用
微小RNA(microRNA,miRNA)是一类高度保守的单链非编码小RNA,通过对mRNA的降解和(或)抑制翻译参与对目标基因的调控.作为在中枢神经系统中含量丰富的miRNA,miR-124近来受到普遍关注.近的研究表明,miR-124与缺血性脑损伤密切相关,但其具体调控机制尚不明确.文章对miR-124在缺血性脑损伤中的作用进行了综述.
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miRNA211在人皮肤黑素瘤的表达及功能研究
目的 探讨miRNA211 (miR-211)在恶性黑素瘤进展过程中的表达以及靶分子MMP-16与miR-211表达的相关关系.方法 实验分阴性对照组、空载体对照组、miR-211过表达组.TaqMan荧光定量PCR检测miR-211在黑素细胞、黑素瘤细胞的表达,以及在痣、黑素瘤组织中的表达.SRB试验和流式细胞仪分别检测细胞增殖和细胞周期分布.甲基纤维素克隆形成试验和Transwell迁移试验研究细胞克隆形成和细胞迁移.用集落大小衡量克隆形成力,而同一迁移距离下的相对细胞数用来衡量细胞迁移能力.TaqMan荧光定量PCR检测比较miR-211表达增加前后MMP-16 mRNA表达的变化.结果 miR-211在黑素瘤细胞G361、C32和A375表达量分别是0.09±0.02,0.000 52±0.000 20,0.000 03±0.000 01(F=10410,P＜ 0.01).miR-211在黑素瘤标本的表达量(0.17±0.03)显著低于痣的表达量(0.87±0.08),t=9.118,P＜ 0.01.在体外,miR-211表达上调的黑素瘤细胞miR-211过表达组与阴性对照组及空载体对照组比较,细胞增殖与细胞周期分布,差异无统计学意义.miR-211过表达组、空载体对照组的克隆形成力分别是0.49±0.05、0.85±0.09,两组比较,差异有统计学意义(t=2.19,P＜0.05).miR-211过表达组、空载体对照组的克隆形成力分别是0.49±0.06、0.82±0.09,两组比较,差异有统计学意义(t=3.15,P＜ 0.05).而空载体对照组与阴性对照组比较,差异无统计学意义.转染miR-211 mimics后24 h,在miR-211过表达组和空载体对照组的MMP-16 mRNA水平比较分别是0.33±0.02和0.91±0.03,两组比较,t=11.30,P＜ 0.01;48 h分别是0.52±0.01和0.96±0.02,两组比较,t=5.02,P＜ 0.05;72 h分别是0.71±0.01和0.97±0.03,两组比较,t=3.85,P＜ 0.05.空载体对照组与阴性对照组在3个时间点的比较,差异均无统计学意义.结论 miR-211在恶性黑素瘤的细胞水平和组织水平低表达.miR-211抑制黑素瘤细胞的锚着非依赖性生长及细胞的迁移.miR-211表达上调后,MMP-16 mRNA表达下调,可能是miR-211下游的靶分子从而影响黑素瘤的侵袭转移.
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早期蕈样肉芽肿微小RNA表达谱的研究
目的：筛选与早期蕈样肉芽肿（MF）相关的微小RNA（miRNA ）。方法用高通量miRNA PCR芯片检测6例早期MF与6例湿疹和扁平苔藓皮损中miRNA的表达差异。针对差异表达的miRNA，进行13例早期MF、13例湿疹和扁平苔藓皮损组织及Myla细胞株的实时荧光定量PCR（RT?qPCR）验证。结果芯片结果示，相对于对照组，早期MF hsa?miR?378a?5p、hsa?miR?107、hsa?miR?302c?3p显著高表达，差异有统计学意义（P<0.05）。皮损组织的RT?qPCR验证结果与芯片结果一致。与正常人外周血T淋巴细胞相比，Myla细胞株中hsa?miR?378a?5p、hsa?miR?107显著上调，与芯片结果一致；未见hsa?miR?302c?3p的差异性表达。结论与炎症性皮肤病相比，早期MF存在差异表达的miRNA表达谱。
