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卵巢上皮性癌组织ERβ和ERK1/2表达及其相关性分析
目的:探讨ERβ和ERK1/2在卵巢上皮性癌组织中的表达及其相关性.方法:采用RT-PCR检测70例卵巢上皮性癌、24例卵巢良性肿瘤、24例正常卵巢组织中ERβ和ERKl/2 mRNA的表达,并分析其与临床病理特征之间的关系及两者的相关性.结果:卵巢上皮性癌组织中ERβ阳性表达率为55.7％,显著低于卵巢良性肿瘤(91.7％)及正常卵巢组织(100.0％),P＜0.05; ERK1与ERK2的阳性表达率分别为85.7％和85.7％,显著高于卵巢良性肿瘤(50.0％和50.0％)及正常卵巢组织(33.3％和33.3％),P＜0.05；卵巢良性肿瘤与正常卵巢组织相比,ERβ和ERK1/2表达差异无统计学意义,P＞0.05.ERβ阳性表达率与组织学类型、组织分化程度及淋巴转移相关,P＜0.05；与患者年龄、FIGO分期及腹水无关,P＞0.05.ERK1/2阳性表达率与组织分化程度、FIGO分期和腹水相关,P＜0.05；与患者年龄、组织学类型及淋巴转移无关,P＞0.05.在卵巢上皮性癌组织中,ERβ和ERK1/2表达呈负相关,r值分别为-0.743和-0.832,P值分别为0.009和0.001.结论:卵巢上皮性癌组织中ERβ表达的降低和ERK1/2的过高表达可能在卵巢癌发生、发展和侵袭中有协同作用,这可能为卵巢癌的预后和内分泌治疗提供新的靶点和方向.
关键词： 卵巢肿瘤 雌激素受体β 细胞外信号调控激酶1/2 聚合酶连反应 -
PCR法检测肺炎支原体的临床应用及结果分析
目的 探讨PCR法检测肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)的临床应用价值.方法 选择213例社区获得性肺炎(community-acquired pneumonia,CAP)患者中临床证实的62例肺炎支原体感染者的咽拭子、血清标本,分别经肺炎支原体核酸PCR(Polymerase chain reaction,PCR)扩增和血清学检测(IgM)、肺炎支原体培养,采用四格表χ2检验比较三种方法的检测结果.结果 三种方法检测肺炎支原体(Mycoplasma Pneumoniae,MP)的阳性率分别为87.1%、72.6%、45.2%,其中PCR法与血清法比较无统计学差异(P>0.05);与培养法比较有统计学差异(P<0.01);血清法与培养法比较有统计学差异(P<0.01).结论 PCR法检测肺炎支原体具有比培养法、血清法更高的敏感性和特异性,特别是对于早期的感染,对于临床早期的诊断和治疗具有重要意义.
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聚合酶链反应在医学检验中的应用和进展
随着医疗水平的不断发展与完善,医学检验技术越来越趋向于科技化,聚合酶链反应(PCR)是一种体外DNA扩增技术,该技术已经有近三十年的历史,具有操作方便、敏感性高、精准性高等优势,从而广泛地应用在医学及分子生物学等各个领域.PCR在医学检验工作中体现出了较高的应用价值,其应用保证了样品检测的准确性和可靠性,节省了大量的财力和物力,同时还有效地提高了诊断准确率,在临床肿瘤检验、免疫检验、细菌检验等方面发挥着重要的作用.本文针对PCR在医学检验领域中的应用实际情况展开综述,为临床医学检验研究提供借鉴.
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846例女性乳头瘤病毒感染特征分析
目的：分析保定地区女性人乳头瘤病毒（HPV）感染的分布情况，为本地区宫颈病变的筛查及其防治提供依据。方法采用实时荧光定量PCR技术对846例女性进行HPV DNA分型检测，并进行统计分析。结果 HPV感染总数为188例，感染率为22．2％， HPV16型的感染率高，为46．3％，其次为HPV56（13．3％）、 HPV58（12．2％）；多重感染率为15．4％，年龄小于20岁的女性感染严重。结论保定地区HPV感染率高，并且年轻女性的感染比例大，要加强HPV防护方法的宣传，加大女性自我防范意识的教育力度，制定适合本地区的筛查方法。
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乳果糖对便秘小鼠结肠水通道蛋白4表达的影响
便秘是消化道常见的慢性病症，随着饮食结构变化及精神、心理因素的影响，其发病呈上升趋势，严重影响着人类的身心健康，水代谢紊乱为其主要的发病环节。水通道蛋白（aquaporins，AQP）是特异性转运水的蛋白家族，参与机体水的分泌、吸收及细胞内外水平衡的调节，已有研究发现水通道蛋白3、4、8等存在于结肠，与结肠水吸收密切相关［1-3］。渗透性泻药，通过提高肠腔内渗透压，使粪便含水量增加，缓解便秘症状，但其具体作用机制及和水通道蛋白之间的联系尚不明确，本研究通过构建小鼠便秘模型，应用免疫组化和反转录-聚合酶连反应（RT-PCR）方法研究乳果糖对便秘小鼠结肠AQP4表达情况的影响，探讨乳果糖和AQP4之间的关系，为临床便秘治疗提供理论依据。
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张家口坝上地区人群环氧合酶-2基因多态性、幽门螺旋杆菌感染与胃癌发生风险的相关性分析
目的 分析张家口坝上地区人群环氧合酶-2(COX-2)基因多态性、幽门螺旋杆菌(Hp)感染与胃癌发病的关系.方法 选取2015年5月～2017年2月于张家口坝上地区居住10年以上的居民200例为研究对象.将研究对象分为胃癌组(n=100)及对照组(n=100).采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)对两组进行基因分型,以Warhin-starry嗜银法检测两组样本中Hp感染情况.然后经非条件性Logistic回归分析COX-2基因单核苷酸多态性(SNP) rs3218625、Hp感染与胃癌发病风险的相关性.结果 Logistic回归分析显示COX-2基因SNP rs3218625与胃癌的发生密切相关.基因型GA出现频率越高,胃癌发生风险越高(P＜0.05).胃癌组Hp感染率为59.0％,显著高于对照组的42.0％ (P＜0.05).COX-2基因SNPrs3218625位点,Hp感染阳性及阴性患者携带基因型GA、AA或等位基因A(GA+ AA)的频率在胃癌组及对照组中均无显著性差异(P＞0.05).经Logistic 回归分析显示,Hp感染与COX-2基因SNPrs3218625无明显相关性(P＞0.05).结论 张家口坝上地区人群COX-2基因多态性可能会增加当地胃癌的发生风险,其中SNP rs3218625的基因型GA是胃癌发生的危险因素之一,而Hp感染与COX-2基因SNP rs3218625无显著相关性.
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miR-21在结肠癌与癌旁组织中的表达及其临床意义
目的:检测MicroRNA-21 (miR-21)在结肠癌及其相应癌旁正常组织中的表达,探讨其与结肠癌临床病理指标的关系.方法:应用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)技术检测50例结肠癌组织标本和癌旁组织标本中miR-21的相对表达量,分析其在2种组织中的表达变化,探讨miR-21表达水平与结肠癌发病位置、临床分期、浸润深度及有无淋巴结转移的关联性.结果:miR-21在结肠癌组织中相对表达水平显著高于癌旁组织(P＜0.05),右半结肠癌组织中miR-21表达水平明显高于左半结肠癌组织(P＜0.05)；Ⅲ期和Ⅳ期结肠癌组织中miR-21表达水平明显高于Ⅰ期和Ⅱ期结肠癌(P＜0.05)；miR-21表达水平在不同浸润深度结肠癌之间比较差异无统计学意义(P＞0.05)；有淋巴结转移结肠癌组织中miR-21表达水平明显高于无淋巴结转移者(P＜0.05).结论:相对于癌旁组织,miR-21在结肠癌组织中表达明显上调,且表达水平与发病位置、临床分期及是否有淋巴结转移有关.
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弓形体、巨细胞病毒在产前检查中意义的初步探讨
弓形体(TOXO)、巨细胞病毒(CMV)是人类先天感染的主要病原体，对胎儿影响较大，尤其是妊娠早期感染，可引起各系统、多脏器损害，导致流产、死胎、畸形、IUGR等不良结局。我院自1995年起应用聚合酶连反应(PCR)，对孕妇进行普查，以期及早发现TOXO、CMV感染，了解对胎儿的有害影响程度，探讨TOXO、CMV检测在产前检查中的必要性。 材料与方法 一、资料来源 自1995年初至1998年初，凡在我院产科门诊进行正规产前检查，并准备在我院分娩的孕妇，均于孕24～28周进行TOXO-DNA、CMV-DNA-PCR检查，共1533例，其中分娩正常健康活婴1505例，畸形儿15例，死胎10例，新生儿重度窒息死亡3例。
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应用PCR-SSP进行HLA-AB基因分型及与血清学方法的比较
目的建立HLA I类基因分型技术并应用于骨髓配型.方法采用序列特异性聚合酶链反应(PCR-SSP)进行HLA-AB基因分型,并与HLA I类血清学分型(微量淋巴细胞毒试验)进行比较.结果运用PCR-SSP技术共对22例需骨髓移植的病人和48例供者进行基因分型,2例病人确认了HLA完全匹配的亲缘骨髓供者,其中1例已成功进行了骨髓移植;基因分型和血清分型比较,43例结果完全一致(61.4%),血清分型错误率高达38.6%(27/70).结论 PCR-SSP分型技术具有准确性高,简便快速等优点,将取代传统的血清学方法.
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HBV S基因重组体的构建及免疫小鼠的实验
目的:探讨HBV核酸免疫的可行性.方法:采用PCR技术,扩增得到编码HBV HBsAg的S基因片段,将其插入到真核表达载体pcDNA3,酶切鉴定并测序确证,得到质粒pcDNA3-S,转染至COS-7细胞表达.将所构建的核酸疫苗免疫小鼠,观察其诱导产生的特异性体液免疫和细胞免疫功能.结果:HBV S基因序列与文献报道一致,转染真核细胞后能表达目的蛋白.免疫小鼠后实验组和阳性对照组抗-HBs阳性率分别为70%(7/10)和80%(8/10),抗体水平分别为(32.14±13.79)mIU/ml和(28.50±11.87)mIU/ml,两者比较无显著性差异(P＞0.05).对照组和空白组抗-HBs均为阴性,小于10 mIU/ml.实验组和阳性对照组的特异性CTL杀伤率在效∶靶比为20∶1时分别为(35.40±4.85)%和(38.20±7.69)%,效∶靶比为10∶1时则分别为(23.95±3.98)%和(24.55±3.59)%, 两者比较无显著性差异(P＞0.05).对照组和空白组的CTL杀伤率在效∶靶比为20∶1和10∶1时均小于5%.结论:pcDNA3-S直接经肌肉免疫小鼠可诱导产生特异性体液和细胞免疫反应.
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某种人类免疫缺陷病毒Ⅰ型核酸定量检测试剂盒的性能评估
目的 对某种人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的临床应用性能进行评估.方法 收集不同HIV感染状态人群的血液样品共计109份,分别使用HIV-1被评估试剂与参比试剂的核酸定量检测试剂盒进行平行对比试验.统计学处理使用Kappa值、R2和Bland-Altman模型.结果 被评估试剂检测结果相对于参比试剂,检测结果的总符合率为97.25％ (95％ CI:92.17％ ～99.43％),Kappa值为0.92(P ＜0.001),一致性强度为强.109例样本中,均在被评估试剂与参比试剂定量检测范围内的样本为84例,两种试剂盒检测结果的回归分析表现出较强的相关性(R2=0.853 6).使用Bland-Altman模型比较两种试剂检测结果的差异均值,结果显示对于未进行抗病毒治疗的HIV感染者样本两种试剂检测结果具有较好的一致性.结论 被评估试剂和参比试剂对同一份血浆样本检测结果具有较好的定性符合程度和较强的相关性,对HIV感染者样本两试剂检测结果有较强的定量一致性.
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基于流感嗜血杆菌外膜蛋白ompP6基因的PCR的建立和临床应用
目的 建立基于流感嗜血杆菌外膜蛋白ompP6基因的PCR检测方法,并确定其检测限、灵敏度和特异性.方法 根据GenBank公布的ompP6基因核苷酸序列设计引物,用流感嗜血杆菌标准菌株验证其检测限,通过检测1 225例呼吸道感染标本并与细菌培养法比较确定所建立的PCR检测方法的灵敏度与特异性.结果 1 225例呼吸道感染标本,细菌培养流感嗜血杆菌的阳性率为10.94％ (134/1 225),PCR检测流感嗜血杆菌的阳性率为19.18％ (235/1 225),培养法检测阳性标本PCR法检测均阳性.建立的PCR方法检测临床标本流感嗜血杆菌检出率明显高于细菌培养(x2 =32.5,P＜0.01).检测时模板的下限为3 pg,方法的灵敏度为100％,特异性为90.7％.结论 建立的PCR方法具有快速和灵敏度高的特点,对于流感嗜血杆菌引起的呼吸道感染早期诊断有重要意义.
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嗜麦芽寡养单胞菌β-内酰胺酶及喹诺酮类耐药基因检测
目的 检测临床分离嗜麦芽寡养单胞菌耐药基因型并分析其与耐药表型的关系,从而为嗜麦芽寡养单胞菌感染的防治提供理论依据和对策.方法 对2005-2008年收集的102株嗜麦芽寡养单胞菌提取全基因组DNA,采用PCR方法检测β-内酰胺酶L1、L2型耐药基因和喹诺酮耐药基因qnr,分析耐药基因与耐药表型的关系.结果 102株嗜麦芽寡养单胞菌对临床常用抗菌药物耐药率以替卡西林/克拉维酸高达到42.16％,其次为复方磺胺甲基异噁唑29.41％、氯霉素27.45％、头孢他啶22.55％,对米诺环素的耐药率低11.76％.102株嗜麦芽寡养单胞菌L1基因阳性率76.47％,L2基因阳性率67.65％;其中L1和L2型基因共同阳性率56.86％;头孢他啶及替卡西林/克拉维酸耐药菌株均检测到L1和L2型基因.102株qnrX、qnrY和qnrZ的阳性率都是100％.结论 本地区嗜麦芽寡养单胞菌β-内酰胺酶L1和L2酶检出率较高,喹诺酮耐药基因qnr阳性率达到100％,染色体上Qnr酶单独存在并不会导致对氟喹诺酮类药物高度耐药.
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HBsAg阳性孕妇血清HBV-DNA含量与胎儿宫内感染关系探讨
目的 探讨孕妇血清HBV-DNA含量与母婴宫内传播的相关性.方法 选择住院分娩的HBsAg阳性孕妇,使用荧光定量PCR方法检测孕妇及其新生儿脐血血清中HBV-DNA含量以及乙肝病毒血清标志物.结果 新生儿脐带血的HBV-DNA阳性率为18.5％(17/92),高于脐带血HBsAg的阳性率5.4％ (5/92)(P＜0.01)；血清HBeAg阳性孕妇其新生儿脐带血HBV-DNA阳性率为41.2％ (14/34),高于HBeAg阴性孕妇组的阳性率5.2％ (3/58)(P＜0.01);且胎儿宫内感染率随母亲血清HBV-DNA含量的增加而升高,HBV-DNA含量与胎儿宫内感染率呈正相关(x2=9.439,R=0.46,P＜0.01).结论 应用荧光定量聚合酶链反应检测新生儿脐带血HBV-DNA是监测乙型肝炎发生宫内传播的较敏感指标；孕妇血清HBV-DNA高含量是乙型肝炎宫内感染的主要因素之一.
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胃癌腹腔冲洗液癌细胞CEAmRNA表达意义的探讨
目的检测腹腔冲洗液中游离癌细胞CEA(癌胚抗原)mRNA表达,预测胃癌腹膜微转移.方法应用RT-PCR方法检测35例腹腔冲洗液CEAmRNA基因表达阳性率并同时做脱落细胞形态学(PLC)方法检查.结果术中收集的35例胃癌和10例胃良性病变的腹腔冲洗液,分别同时做CEAmRNA表达和细胞形态学测定,胃癌患者CEAmRNA表达阳性率57.1%(20/35),PLC阳性率31.4%(11/35),两组之间差异有显著性意义(P＜0.05),且CEAmRNA表达阳性率随病期进展、浸润深度的加深而逐渐升高,而胃良性病变的腹腔冲洗液均为阴性(P＜0.01).结论 CEAmRNA是预测胃癌腹膜微转移的有效指标.
